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抗-HCV多表位抗体在检测HCV抗原中的应用

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中国生物制品学杂志 2006年第4期19卷 411-413页

作者：谢忠平龙润乡宋霞李华李文忠熊秋霞洪超崔萍芳李琦涵中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所质量检定室昆明650118

目的应用丙型肝炎病毒多表位抗体，探索从血浆或血清样品中检测丙型肝炎病毒抗原（HCAg）的可能性，为献血员筛选及临床早期诊断提供检测方法。方法利用原核系统表达的丙型肝炎病毒（HCV）7个高度保守区基因的多表位复合抗原免疫动物... 详细信息

目的应用丙型肝炎病毒多表位抗体，探索从血浆或血清样品中检测丙型肝炎病毒抗原（HCAg）的可能性，为献血员筛选及临床早期诊断提供检测方法。方法利用原核系统表达的丙型肝炎病毒（HCV）7个高度保守区基因的多表位复合抗原免疫动物，制备抗-HCV多克隆抗体，采用ELISA双抗体夹心法检测血浆或血清中的HCAg，并与RT-PCR法进行比较。结果制备的抗-HCV多表位复合抗原多克隆抗体，在用ELISA法检测HCAg中表现出较高的特异性及灵敏性，Cutoff值为0．239，批内CV值为5．60％～6．65％，批间CV值为7．80％。与RT-PCR比较，相关系数为0．816，灵敏度为88．89％，特异度为96．30％，一致性为95．24％，调整一致性为90．82％，阳性预测值为80．00％，阴性预测值为98．11％。HCAg检出率与美国ORTHO公司HCV—C抗原检测试剂盒差异无显著意义（P=0．06）。结论用HCV多表位复合抗原制备的多克隆抗体，采用ELISA双抗体夹心法检测HCAg，具有灵敏、特异、快速的优点，有望开发成为HCAg诊断试剂盒。

关键词：丙型肝炎多表位抗体 ELISA

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用原位酶联免疫吸附法检测甲型肝炎病毒

中华实验和临床病毒学杂志 1999年第4期13卷 362-364页

作者：侯宗柳燕景恩龙润乡黄小琴陈洪波陈统球胡云章中国医学科学院

目的　采用一种更加简单和敏感的检测方法对甲型肝炎病毒(HAV)进行检测。方法　用甲型肝炎病毒疫苗株H2M20K株和野毒株合34感染KMB17二倍体细胞,于96孔微量细胞板上培养,并在原位用HAV特异的单克隆抗体与单层细胞上的病毒结合,辣根过氧... 详细信息

目的　采用一种更加简单和敏感的检测方法对甲型肝炎病毒(HAV)进行检测。方法　用甲型肝炎病毒疫苗株H2M20K株和野毒株合34感染KMB17二倍体细胞,于96孔微量细胞板上培养,并在原位用HAV特异的单克隆抗体与单层细胞上的病毒结合,辣根过氧化物酶标记的抗鼠IgG作为指示,以细胞对照A值(OD)均数的18倍判为阳性。结果　病毒增殖动态显示,高峰期为20～25d,比ELISA终点滴定法提前4～6d;两种方法同时做13个样品的感染性滴度比较,结果差异无显著意义(t=1.13,P>0.05)。原位EIA较好地指示中和试验的结果;直接从12份粪便中分离病毒,经第一代培养检测有5份阳性。结论　EIA敏感性与ELISA法相似,由于原位EIA直接检测病毒细胞系统,有操作简单,重复性好等优点,可取代ELISA终点滴定法,同时也可望用于对其他病毒细胞系统的检测。

关键词：甲型肝炎病毒免疫酶技术病毒抗体

云南五种少数民族人群甲型肝炎病毒抗体水平的初步调查

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云南医药 1997年第1期18卷 14-15页

作者：初正韬周德久龙润乡褚嘉佑中国医科院医学生物研究所

云南五种少数民族人群甲型肝炎病毒抗体水平的初步调查初正韬＊周德久＊龙润乡＊褚嘉佑＊甲型肝炎是由甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）感染引起的一种消化道传染性疾病。我国每年都有甲肝的流行或局部爆发，给人民的健康和经济带来极大的损失。... 详细信息

云南五种少数民族人群甲型肝炎病毒抗体水平的初步调查初正韬＊周德久＊龙润乡＊褚嘉佑＊甲型肝炎是由甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）感染引起的一种消化道传染性疾病。我国每年都有甲肝的流行或局部爆发，给人民的健康和经济带来极大的损失。为了解云南边疆少数民族人群的甲肝感...

关键词：甲型肝炎病毒初步调查抗体水平甲肝云南边疆景颇

HCV游离抗原BA-ELISA检测方法的临床应用评价

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现代预防医学 2013年第3期40卷 526-527+530页

作者：龙润乡陈红英朱祥明沈云松孙翳苏品璨王俊谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明医学院第一附属医院云南昆明血液中心云南省第一人民医院

目的根据国家相关法规对HCV游离抗原BA-ELISA检测方法进行临床应用效果评价。方法生物素标记丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)与辣根过氧化物酶标记亲和素联合应用建立HCV游离抗原BA-ELISA检测法,分别在3个省级医疗卫生机构进行临床试验,同时使... 详细信息

目的根据国家相关法规对HCV游离抗原BA-ELISA检测方法进行临床应用效果评价。方法生物素标记丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)与辣根过氧化物酶标记亲和素联合应用建立HCV游离抗原BA-ELISA检测法,分别在3个省级医疗卫生机构进行临床试验,同时使用HCV-cAg、HCV-Ab、HCV-RNA荧光定量检测试剂盒进行对比同步检测。结果临床试剂与HCV-Ab检测结果相比一致性66.67%,特异性100%;与荧光定量PCR相比结果一致性为80.85%、特异性为98.87%;同类市售产品HCV核心抗原检测试剂检测结果与之接近。结论临床试剂特异性较好,灵敏度有待提高;临床研究试剂比市售同类产品阳性检出率略高,但两种试剂检出率均低于核酸及抗体检测试剂。

关键词：丙型肝炎病毒酶联免疫法生物素-亲和素检测法临床运用评价游离抗原

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HCV多表位复合抗原基因表达条件的探索

实用医学杂志 2012年第18期28卷 3012-3015页

作者：杨蓉杨婷李华龙润乡董承红董丽娟谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明市650118

目的:筛选出适合HCV多表位复合抗原基因(PCX)表达的菌株,优化表达条件,并进行目的蛋白的免疫特异性的检测。方法:将含HCV多表位复合抗原基因的重组质粒pWR450-PCX转入大肠杆菌DH5α、TOP10F′、BL21菌株中,在不同培养基中,经不同浓度IPT... 详细信息

目的:筛选出适合HCV多表位复合抗原基因(PCX)表达的菌株,优化表达条件,并进行目的蛋白的免疫特异性的检测。方法:将含HCV多表位复合抗原基因的重组质粒pWR450-PCX转入大肠杆菌DH5α、TOP10F′、BL21菌株中,在不同培养基中,经不同浓度IPTG诱导不同时间,表达融合蛋白(GZ-PCX),并利用患者阳性血清通过Western Blot检测其免疫特异性。结果:重组质粒在DH5α、TOP10F′菌株中均能表达有一定免疫特异性的目的蛋白,但BL21中不表达;目的蛋白在TB培养基中的表达量明显高于LB培养基。结论:在37℃,IPTG浓度为1mM诱导3h时,目的蛋白的表达量达到峰值;所制备的抗原具有一定的免疫特异性和免疫原性。

关键词：丙型肝炎病毒原核表达免疫特异性免疫原性

两种甲型肝炎病毒抗原检测方法的建立及应用效果

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两种甲型肝炎病毒抗原检测方法的建立及应用效果

丙型肝炎病毒分片段抗体检测及优势抗原表位分析

第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：龙润乡谢忠平杨蓉李华白慧珠中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所

目的建立两种甲型肝炎病毒抗原(HAV-Ag)ELISA检测试剂盒,并对其检测效果进行评价。方法生物素标记甲型肝炎病毒抗体(HAV-Ab)与辣根过氧化物酶标记亲和素联合应用建立甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法;同时使用辣根过氧化物酶标记HAV-Ab... 详细信息

目的建立两种甲型肝炎病毒抗原(HAV-Ag)ELISA检测试剂盒,并对其检测效果进行评价。方法生物素标记甲型肝炎病毒抗体(HAV-Ab)与辣根过氧化物酶标记亲和素联合应用建立甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法;同时使用辣根过氧化物酶标记HAV-Ab作放大系统建立双抗体夹心甲型肝炎病毒抗原ELISA检测试剂,对比两种检测方法的特异性、灵敏度及实际应用效果。结果用生物素标记甲肝抗体-辣根过氧化物酶标记亲和素做放大系统建立的HAV-Ag(BA-ELISA)检测法,较双抗体夹心检测方法灵敏度高1-2个稀释度;两种检测法均对10余种病毒无交叉,P/N值BA-ELISA检测法较高。结论利用生物素标记甲肝抗体-辣根过氧化物酶标记亲和素作放大系统,建立的甲型肝炎病毒抗原BA-ELISA检测法是一种灵敏度高,特异性好,方便快捷的检测方法 ,可广泛应用于甲型肝炎病毒研究及临床检测中。而双抗体夹心ELISA检测法,检测灵敏度适中,操作简单,更适用于甲肝疫苗生产检定。

关键词：甲型肝炎病毒 ELISA检测生物素-亲和素检测系统 BA-ELISA

来源： cnki会议评论

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中国生物制品学杂志 2010年第5期23卷 479-481页

作者：谢忠平杨蓉龙润乡李华白惠株廖云蒋蕊鞠王燕洪超中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所诊断试剂室昆明650118

目的检测丙型肝炎病毒(HCV)分片段抗体,并分析HCV优势抗原表位,为HCV抗原、抗体检测及疫苗研究提供依据。方法收集经ELISA法检测抗HCV阳性血清样品90份,使用总抗体检测试剂及抗HCV分片段试剂进行检测,并用荧光定量PCR对抗体弱阳性及阴... 详细信息

目的检测丙型肝炎病毒(HCV)分片段抗体,并分析HCV优势抗原表位,为HCV抗原、抗体检测及疫苗研究提供依据。方法收集经ELISA法检测抗HCV阳性血清样品90份,使用总抗体检测试剂及抗HCV分片段试剂进行检测,并用荧光定量PCR对抗体弱阳性及阴性样品进行复核,分析不同片段出现的阳性率,从而分析HCV的优势抗原表位。结果 90份抗HCV阳性的样品经总抗体检测试剂检测,其中阳性78份(86.67%);90份抗HCV阳性的样品中,分片段试剂检测1个片段以上阳性样品59份(65.56%);其中C、NS3、NS4及NS5片段抗体阳性分别为56份(94.92%)、57份(96.61%)、42份(71.19%)及47份(79.66%),NS3及C片段抗体是HCV的优势抗体。结论 HCV-C及NS3表位是HCV的优势抗原表位;HCV分片段抗体与总抗体检测试剂之间阳性检出率存在一定差异。

关键词：丙型肝炎病毒分片段抗体优势抗原表位

甲型肝炎病毒(H_2株)在三种细胞中的感染性滴度比较

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云南大学学报（自然科学版） 1999年第3期21卷 195-196页

作者：钟光禄燕景恩陈洪波龙润乡陈统球中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所

本文用恒河猴胚肾传代细胞（ＭＥＫ）、人胚肺成纤维二倍体细胞（ＫＭＢ１７和２ＢＳ）对ＨＡＶ－Ｈ２株感染性滴度进行了初步研究，结果显示Ｈ２株在ＭＥＫ上感染性滴度（ＣＣＩＤ５０／ｍＬ）最高，ＣＣＩＤ５０／ｍＬ比ＫＭＢ１７，... 详细信息

本文用恒河猴胚肾传代细胞（ＭＥＫ）、人胚肺成纤维二倍体细胞（ＫＭＢ１７和２ＢＳ）对ＨＡＶ－Ｈ２株感染性滴度进行了初步研究，结果显示Ｈ２株在ＭＥＫ上感染性滴度（ＣＣＩＤ５０／ｍＬ）最高，ＣＣＩＤ５０／ｍＬ比ＫＭＢ１７，２ＢＳ平均ＣＣＩＤ５０／ｍＬ高１．２８ｌｏｇ和１．５９ｌｏｇ．经统计学分析，Ｐ＜０．０５，有显著性差异，证实ＭＥＫ对Ｈ２株最敏感．

关键词：感染性滴度甲型肝炎病毒疫苗 MEK KMB17 2BS

肠道病毒71型与甲型肝炎病毒灭活疫苗联合免疫效果的初步评价

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中国生物制品学杂志 2012年第4期25卷 398-402页

作者：杨婷李华龙润乡杨蓉董承红蒋蕊鞠崔萍芳白惠珠谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研究重点实验室昆明650118

目的初步评价肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)与甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)灭活疫苗联合免疫小鼠诱导的特异性免疫应答水平以及两种抗原间的相互作用。方法将HAV灭活疫苗和EV71灭活疫苗以不同剂量配比制成联合疫苗,免疫IC... 详细信息

目的初步评价肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)与甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)灭活疫苗联合免疫小鼠诱导的特异性免疫应答水平以及两种抗原间的相互作用。方法将HAV灭活疫苗和EV71灭活疫苗以不同剂量配比制成联合疫苗,免疫ICR小鼠后,通过ELISA法检测血清HAV抗体效价;固定病毒-稀释血清法检测血清EV71中和抗体效价;流式细胞术检测脾脏中淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的百分率;ELISPOT法检测脾脏中淋巴细胞分泌IL-4和IFNγ的水平。结果初免后28 d和加强免疫后7 d,各组小鼠血清中EV71中和抗体阳转率均达100%,单价疫苗组和联合疫苗组EV71中和抗体效价均呈剂量依赖性;初免后28 d,小鼠血清中能够产生保护性HAV抗体,加强免疫后抗体水平升高;联合疫苗组与相应的单价疫苗组间抗体水平差异无统计学意义(P>0.05),未发现EV71与HAV的相互作用;初免后28 d,各组小鼠脾脏中CD8+细胞比例高于CD4+细胞(P<0.001),加强免疫后7 d则相反(P<0.001);初免后28 d,HAV全病毒和EV71多肽均不能刺激各组小鼠脾细胞产生阳性反应,加强免疫后7 d,各组小鼠脾细胞分泌IL-4的水平均高于IFNγ(P<0.05)。结论一定剂量的HAV和EV71联合疫苗可诱导小鼠产生良好的体液免疫应答,同时诱导细胞免疫应答,但相对较弱,未发现两种抗原间存在相互干扰或协同作用。

关键词：肠道病毒A型人肝炎病毒甲型灭活疫苗联合免疫