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人呼吸道合胞病毒裂解条件的初步探索

中国生物制品学杂志 2009年第5期22卷 501-504页

作者：陈思瑾谢忠平李华龙润乡蒋蕊鞠崔萍芳中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所质量检定室昆明650118

目的对人呼吸道合胞病毒(HRSV)的裂解条件进行初步探索,为研制HRSV裂解纯化疫苗奠定基础。方法用不同的裂解剂,以不同浓度和温度对HRSV裂解不同时间,以HRSV的F及G蛋白为目标蛋白,对得到的蛋白进行还原蛋白电泳分析及Western blot鉴定,... 详细信息

目的对人呼吸道合胞病毒(HRSV)的裂解条件进行初步探索,为研制HRSV裂解纯化疫苗奠定基础。方法用不同的裂解剂,以不同浓度和温度对HRSV裂解不同时间,以HRSV的F及G蛋白为目标蛋白,对得到的蛋白进行还原蛋白电泳分析及Western blot鉴定,电镜观察验证裂解效果。结果1%浓度的TritonX-100在4℃作用90min,对HRSV的裂解效果优于其他裂解剂。电镜观察可见病毒样品呈云絮状裂解;Western blot分析表明,特异性条带为HRSV的F蛋白。结论已初步筛选出HRSV的裂解条件,其对HRSV的裂解效果较好。

关键词：人呼吸道合胞病毒裂解条件亚单位疫苗

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Cox A16抗原检测试剂研究及初步应用

中国卫生检验杂志 2013年第4期23卷 801-805页

作者：刘正玲李华龙润乡杨婷杨蓉岳磊谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的:建立柯萨奇病毒A组16型抗原检测酶联免疫法,为疫苗研发及病原学检查提供有效的技术手段。方法:以CA16多抗为包被抗体,以辣根过氧化物酶标记抗体为指示物建立CA16抗原ELISA检测法,对其线性、灵敏度、特异度、精密度及稳定性等指标... 详细信息

目的:建立柯萨奇病毒A组16型抗原检测酶联免疫法,为疫苗研发及病原学检查提供有效的技术手段。方法:以CA16多抗为包被抗体,以辣根过氧化物酶标记抗体为指示物建立CA16抗原ELISA检测法,对其线性、灵敏度、特异度、精密度及稳定性等指标进行分析。将所建立的方法应用到疫苗研发及病原检测中进行验证及评价。结果:建立的CA16抗原ELISA检测线性范围为1.25μg/ml～80μg/ml,R2达0.98以上;最低检测下限为1.25μg/ml,可检测到2×102CCID50～9×103CCID50活病毒;与CA16以外的10种肠道病毒无交叉反应;变异系数CV小于15%。与荧光PCR、中和法鉴定结果一致性高。结论:建立的ELISA法各项性能符合抗原检测要求,可用于CA16疫苗研发及病原学检查。

关键词：手足口病肠道病毒柯萨奇病毒A组16型

甲型肝炎灭活疫苗不同免疫方案对恒河猴免疫效果观察

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中华医学杂志 2000年第8期80卷 618-620页

作者：胡云章谭顺革金炜翔侯宗柳陈洪波龙润乡邵聪文陈统球中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所疫苗二室昆明市650107

目的　确定甲型肝炎灭活疫苗免疫恒河猴最佳免疫方案。方法　根据 3个免疫方案(方案 1:0周免疫 ;方案 2 :0周初次免疫、4周加强免疫 ;方案 3:0周初次免疫、2 4周加强免疫 ) ,将 17只抗 HAV阴性的恒河猴随机分成 4组 ;第 1组 :免疫方案... 详细信息

目的　确定甲型肝炎灭活疫苗免疫恒河猴最佳免疫方案。方法　根据 3个免疫方案(方案 1:0周免疫 ;方案 2 :0周初次免疫、4周加强免疫 ;方案 3:0周初次免疫、2 4周加强免疫 ) ,将 17只抗 HAV阴性的恒河猴随机分成 4组 ;第 1组 :免疫方案 1;第 2组 :免疫方案 2 ;第 3组 :免疫方案 3。1～ 3组各 5只 ,空白对照组 2只。用同等剂量 (12 80EL .U/ml)的甲型肝炎灭活疫苗于上臂三角肌内分别免疫两组恒河猴 ,检测恒河猴谷丙转胺酶 (ALT)水平、肝脏病理、抗 HAV水平。结果　 3组猴在5 2周观察期内未出现肝脏病理改变及ALT水平异常升高。方案 1组猴IgG水平在 12周达最高水平(132 19mIU/ml) ,随后逐渐下降 ,第 5 2周降为 2 0 5 6mIU/ml。方案 2组在 4周加强后 ,第 12周达最高水平为 1386 3mIU/ml,第 5 2周降为 6 2 85mIU/ml。方案 3组在第 2 4周加强免疫后 ,第 2 8周抗 HAV水平明显提高 ,达到最高水平 ,为 40 6 38mIU/ml。结论　甲型肝炎灭活疫苗 (吕 8株 )具良好的安全性和免疫原性 ;0周初次免疫、2 4周加强免疫方案具最佳免疫效果。

关键词：甲型肝炎灭活疫苗免疫方案恒河猴免疫效果

EV71抗原BA-ELISA检测方法的建立及应用

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中国生物制品学杂志 2009年第12期22卷 1230-1232页

作者：龙润乡谢忠平杨蓉李华白惠株董承红刘龙丁李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的建立EV71抗原生物素-亲和素酶联免疫(BA-ELISA)检测方法,并进行验证及初步应用。方法以抗EV71抗体为包被抗体,利用生物素-亲和素系统建立双抗体夹心ELISA法,并对其灵敏度、特异性、准确性及精密性进行验证。采用该方法检测组织培养... 详细信息

目的建立EV71抗原生物素-亲和素酶联免疫(BA-ELISA)检测方法,并进行验证及初步应用。方法以抗EV71抗体为包被抗体,利用生物素-亲和素系统建立双抗体夹心ELISA法,并对其灵敏度、特异性、准确性及精密性进行验证。采用该方法检测组织培养及临床样品中EV71抗原的含量。结果所建立的BA-ELISA法在EV71蛋白含量625～156.25ng/ml之间线性关系最佳,R2达0.9976,灵敏度为78.125～156.25ng;与包括CoxA16在内的42种肠道病毒及相关病毒均无交叉反应;检测10份EV71阳性样品和10份阴性样品,结果符合率均为100%;检测EV71原液和高、中浓度样品的变异系数分别为3.09%、6.69%和6.43%;可检出约103～104CCID50的活病毒及手足口病患者的大便悬液和部分咽拭子悬液中的病毒。结论用生物素标记EV71抗体与亲和素系统建立的双抗体夹心ELISA法具有较高的特异性、灵敏度、准确性和精密性,为临床检验及抗原分析提供了参考。

关键词：手足口病 EV71抗原酶联免疫检测法生物素-亲和素系统

泽泻提取物中萜类单体V-54对小RNA病毒增殖的抑制效应

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中国生物制品学杂志 2010年第1期23卷 25-27页

作者：王丽春廖芸龙润乡王晶晶刘龙丁陈纪军李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 中国科学院昆明植物学研究所昆明650204

目的探讨泽泻提取物中提取的萜类衍生物单体V-54对小RNA病毒感染增殖的抑制效应及其生物学机理。方法采用KMB17细胞,分别感染HAV-H、PV-Ⅰ和Cox-B2病毒,经V-54处理后检测病毒滴度,分析PV-Ⅰ和Cox-B2病毒增殖抑制的动力学及V-54对KMB17... 详细信息

目的探讨泽泻提取物中提取的萜类衍生物单体V-54对小RNA病毒感染增殖的抑制效应及其生物学机理。方法采用KMB17细胞,分别感染HAV-H、PV-Ⅰ和Cox-B2病毒,经V-54处理后检测病毒滴度,分析PV-Ⅰ和Cox-B2病毒增殖抑制的动力学及V-54对KMB17细胞凋亡的影响。结果V-54可抑制3种病毒在KMB17细胞上增殖,PV-Ⅰ和Cox-B2病毒感染滴度比未处理组明显降低,V-54对两种病毒的抑制作用呈剂量依赖性。作用24h内,V-54可使KMB17细胞凋亡率明显增加,随后逐渐恢复正常。结论V-54可抑制特定的小RNA病毒的感染增殖,其机制可能为V-54分子结合到细胞表面的相关受体,导致病毒感染效率降低。

关键词：泽泻萜类衍生物 V-54 病毒感染抗病毒作用

免疫复合物解离剂的研究及在HCV抗原检测中的应用效果分析

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免疫学杂志 2012年第7期28卷 620-623页

作者：杨蓉龙润乡李华谭振国白惠珠杨婷蒋蕊鞠谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所病原生物技术诊断研究组昆明650118

目的探索一种可以使免疫复合物发生解离的方法,并进行应用效果分析。方法通过对HAV抗原抗体复合物的解离,进行酸化剂、去垢剂的组合及解离时间、温度等相关条件筛选,优化出最佳的解离方法,应用于1 370份HCV血清样品,对解离前后的抗原阳... 详细信息

目的探索一种可以使免疫复合物发生解离的方法,并进行应用效果分析。方法通过对HAV抗原抗体复合物的解离,进行酸化剂、去垢剂的组合及解离时间、温度等相关条件筛选,优化出最佳的解离方法,应用于1 370份HCV血清样品,对解离前后的抗原阳性率进行统计分析。结果 160 EU/ml的HAV抗原能被效价为20 U/ml的HAV抗血清完全中和;只单独使用去垢剂对免疫复合物无解离效果;0.1 mol/LGly-HCL能解离抗原抗体复合物,加入1种或几种去垢剂后则其解离效果有不同程度的提高,其中以Gly-HCl+7%TritonX-100+5%CHAP的效果最好(q=27.177,P<0.01);免疫复合物在加入解离剂后在室温60 min、37℃30 min、60℃10 min为本试验较好的解离条件,其中以37℃30 min效果最佳;应用Gly-HCl+5%CHAPS+7%TritonX-100在37℃对样品进行预处理30 min后,可使HCV抗原阳性检出率由解离前的33.3%提升至75.56%,解离前后之间的阳性率差异具有显著地统计学意义(χ2=32.34,P<0.01)。结论酸化剂能将HAV及HCV抗原抗体免疫复合物解离,添加去垢剂后,解离效果好于单独使用酸化剂,且联合添加好于单独添加。

关键词：甲型肝炎病毒丙型肝炎病毒抗原抗体复合物解离抗原检测

人呼吸道合胞病毒A_2株在不同细胞中的培养及其影响因素

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中国生物制品学杂志 2009年第6期22卷 574-577页

作者：谢忠平李华龙润乡易红昆沈冬李志强崔萍芳蒋蕊鞠中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所质量检定室昆明650118

目的在不同细胞中培养人呼吸道合胞病毒(HRSV),并分析其影响因素,为病毒的大量增殖创造条件。方法将HRSVA2株分别接种至人二倍体KMB17细胞、Vero细胞、人喉癌Hep-2细胞及HeLa细胞进行培养,采用微量细胞病变法检测病毒的感染性滴度,并进... 详细信息

目的在不同细胞中培养人呼吸道合胞病毒(HRSV),并分析其影响因素,为病毒的大量增殖创造条件。方法将HRSVA2株分别接种至人二倍体KMB17细胞、Vero细胞、人喉癌Hep-2细胞及HeLa细胞进行培养,采用微量细胞病变法检测病毒的感染性滴度,并进行间接免疫荧光试验及合胞体观察。检测吸附时间、维持液pH值和培养温度对病毒增殖的影响。结果4种细胞中,Vero细胞对HRSV最敏感,病变早、病毒感染性滴度可达6.83lgCCID50/ml;KMB17细胞相对敏感性不高,但仍能良好增殖,病毒感染性滴度达6.13lgCCID50/ml;Hep-2细胞及HeLa细胞介于Vero细胞和KMB17细胞之间,病毒感染性滴度也达到6.83lgCCID50/ml。间接免疫荧光试验显示病毒在细胞浆内增殖。吸附时间对HRSV的增殖无明显影响;维持液的pH值对HRSV的增殖及病变特点均有一定的影响,在pH7.0～7.2时可快速引起细胞产生病变,并能达到最高感染性滴度;HRSV在37℃及32℃下培养均能良好地增殖。结论HRSVA2株在KMB17、Vero、Hep-2及HeLa细胞内均可增殖,但敏感性有一定差异,且对培养条件有一定的要求。

关键词：人呼吸道合胞病毒 A2株细胞培养影响因素

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甲型肝炎减毒活疫苗病毒的水平传播

中华医学杂志 2001年第8期81卷 465-467页

作者：黄小琴曹逸云谭顺革白惠珠邵聪文龙润乡周德久董德祥中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118

目的　探讨甲型肝炎 (甲肝 )减毒活疫苗接种后的病毒水平传播。方法　在昆明市安宁县 2个观察点筛选出丙氨酸转氨酶 (ALT)正常、甲肝病毒 (HAV)抗体 (抗 HAV)阴性的 4～ 7岁儿童 199人 ,按 1∶1 4比例分接种组 (82人 )和接触组 (117人 ... 详细信息

目的　探讨甲型肝炎 (甲肝 )减毒活疫苗接种后的病毒水平传播。方法　在昆明市安宁县 2个观察点筛选出丙氨酸转氨酶 (ALT)正常、甲肝病毒 (HAV)抗体 (抗 HAV)阴性的 4～ 7岁儿童 199人 ,按 1∶1 4比例分接种组 (82人 )和接触组 (117人 )进行H2株甲肝减毒活疫苗病毒的水平传播观察 ;另外 ,取接种者和接触者HAV检测阳性的粪便悬液上清 ,分别静脉接种于 8只普通狨猴 (Callithrixjacchus)体内 ,观察粪便HAV毒力水平。结果　接种组接种后 6周抗体阳转率为 97 6 % (80 /82 ) ,接触组 9周时抗体阳转率为 13 7% (16 /117) ,两组儿童肝功能均未见异常 ;接种组和接触组的粪便HAV检出率分别为 89 5 % (34/38)和 70 7% (5 3/75 ) ;以 2株接种者粪便HAV和 2株接触者粪便HAV感染的8只狨猴 ,均未检出血清酶升高和肝脏组织病理学改变 ,抗 HAV阳转时间延迟且效价低。结论　H2株甲肝减毒活疫苗安全性及免疫原性良好 ,疫苗病毒在人体内增殖活跃 ,且保持减毒性能稳定 ,能在人群中造成水平传播 ,但不会引发甲肝。

关键词：甲型肝炎疫苗减毒活疫苗甲型肝炎预防水平传播

国产HAVAB-E在甲肝疫苗抗体检测中的应用效果

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中国公共卫生 2002年第1期18卷 33-34页

作者：龙润乡曹逸云周德久谭顺革陈洪波董德祥中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所昆明650118

目的　评估国产HAVAB -E诊断试剂盒在甲肝减毒活疫苗抗体检测中的应用效果。方法　用Abbott实验室的HAVAB -IMx以及中国医学科学院医学生物学研究所 (昆明 )和浙江省医学科学院普康生物技术公司生产的HAVAB -E 3种试剂对 184份疫苗接种... 详细信息

目的　评估国产HAVAB -E诊断试剂盒在甲肝减毒活疫苗抗体检测中的应用效果。方法　用Abbott实验室的HAVAB -IMx以及中国医学科学院医学生物学研究所 (昆明 )和浙江省医学科学院普康生物技术公司生产的HAVAB -E 3种试剂对 184份疫苗接种者的 12周血进行检测对比试验。IMx试剂经用WHO甲肝免疫球蛋白标准品标化后定量检测标本的mIU/ml。结果　总体GMT为 2 7 2mIU/ml,其中 16 7份 (90 8% )抗体水平 >10mIU/ml。此结果较接近疫苗的保护效果。国产试剂的阳性率分别为 95 1% (175 /184 ,昆明 -E)和 90 2 % (16 6 /184 ,浙江 -E) ,两试剂结果一致率为 92 9%。国产试剂阳性率随抗体水平升高呈增加趋势 ,当滴度 >2 0mIU/ml时 ,与IMx的符合率分别为 98 1% (10 5 /10 7,昆明 -E)和 94 4 % (10 1/10 7,浙江 -E)。结论　两种国产酶免诊断试剂的定性检测结果真实可靠 ,在甲肝减毒活疫苗抗体检测中能客观反映疫苗的免疫原性和保护效果 ,是值得推广使用的诊断试剂。

关键词：甲型肝炎疫苗抗体检测 HAVAB-E