检索结果-南通市图书馆

作者：齐岩梅大连医科大学

学位级别：硕士

研究背景及目的流行病学和前瞻性临床试验证实纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)是动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)独立危险因子,动物实验和体外研究也证实动脉壁内 Fg 向纤维蛋白(fibrin,Fb)转化与 As 进展、血栓形成及经皮冠状动脉介入治... 详细信息

研究背景及目的流行病学和前瞻性临床试验证实纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)是动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)独立危险因子,动物实验和体外研究也证实动脉壁内 Fg 向纤维蛋白(fibrin,Fb)转化与 As 进展、血栓形成及经皮冠状动脉介入治疗术后再狭窄密切相关;但对于 Fg 本身是否为 As 的致病因子目前还存在争议,机制仍不十分清楚。血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)由中膜向内膜移行并异常增殖是 As 及再狭窄发病机制中的关键环节。本实验通过观察不同浓度 Fg 及 Fb 对体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞(rat aorta smooth muscle cell,RASMC)增殖和移行的影响,探讨 Fg 本身是否具有直接致As 作用并对 Fg 与 Fb 的作用加以比较。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)是介导细胞外信号与细胞核反应间信息传递的共同通路与中心环节,但关于 MAPK 信号途径在 Fg/Fb 对 VSMC 增殖和趋化中的调控作用目前尚未见报道。因此本研究进一步探讨了 MAPK 3 个亚族:细胞外信号调节激酶(extracellular signal- regulated kinase , ERK ) 、 p38 MAPK 和 c-Jun N 末端激酶 ( c-June N-terminal kinase, JNK)在 Fg/Fb 诱导 VSMC 增殖和趋化过程中的调控作用。实验方法(1)用胶原酶消化法培养 RASMC,采用免疫荧光染色法对细胞特异性蛋白标志物进行鉴定,同时进行细胞生长曲线测定判断细胞增殖能力及细胞生长动力学特征。(2)根据体内的 Fg 代谢过程,采用凝血酶作用于 Fg 制备Fb。(3)RASMC 的增殖活力采用直接反映细胞数量的细胞计数法和反映细胞DNA 复制能力的 BrdU 掺入法以及反映细胞周期的流式细胞术测定。(4)采用刮伤实验及慢速显微摄像技术测定镜下细胞平均迁移距离,评价 RASMC 随机迁移能力;通过染色计数穿过 Transwell 嵌套装置中多聚碳酸酯膜透膜细胞数,并通过显微镜下动态观察 RASMC 向三维 Fb 胶中的运动评价 Fg/Fb对 RASMC的趋化性,并用 Western 印迹法检测 RASMC 明胶酶 A 的表达,明胶酶谱分析其分泌的明胶酶活性。(5)提取细胞总蛋白,应用 Western 印迹法检测 Fg 及 Fb 对细胞 ERK、p38 和 JNK 表达、活性的影响;应用上述三个信号通路的选择性抑制剂检测各信号通路在 Fg 及 Fb 促 RASMC 增殖、迁移中的作用;提取细胞核蛋白及浆蛋白,应用 Western 印迹法及免疫组织化学方法检测 Fg 对 ERK 活性及亚细胞定位的影响。实验结果(1)RASMC 特异性标志蛋白 SM α-actin 免疫荧光染色阳性,细胞增殖活力较强,细胞倍增时间约 64 h,可用于细胞增殖和迁移实验。(2)Fg 及Fb 均可促进 RASMC 增殖,相同浓度的 Fb 比 Fg 作用更强,0.2 g/L ～ 3.2 g/L Fg及由其转化而成的 Fb 刺激 RASMC 增殖的作用与 Fg 浓度均呈明显剂量效应关系。(3)Fg 对 RASMC 向随机方向迁移无明显影响,Fg 与 Fb 均对 RASMC 有明显的趋化作用且呈浓度依赖关系;同浓度的 Fb 比 Fg 趋化作用更强,两者对RASMC 的趋化作用与明胶酶 A 的表达及活性上调有关。(4)Fg 以时间依赖性方式诱导 ERK及 p38 活化,Fb 以时间依赖性方式诱导 ERK 、p38 及 JNK活化。(5)ERK 及 JNK 部分参与 Fb 诱导的 RASMC 增殖,JNK 在此过程中的作用更为重要,两者并不参与 Fb 诱导的 RASMC 迁移;p38 激活在 RASMC 向 Fb 胶迁移过程中发挥重要作用,但并不参与 Fb 诱导的 RASMC 增殖。(6)ERK 的磷酸化及核转位与 RASMC 自发性生长的特性密切相关,而且与细胞异质性有关。(7)Fg 刺激后 10 min 至 1 h RASMC ERK 的活化及细胞内转位与其促增殖作用密切相关。结论 Fb 通过激活细胞 ERK 和 JNK(而不是 p38)信号通路促进 RASMC增殖;通过促进 p38(而不是 ERK 和 JNK)活化诱导 RASMC 趋化;Fg 的促增殖作用与 ERK 的活化及细胞内转位密切相关。上述机制可能在 As 的发生和/或再狭窄的病理发展过程中发挥重要作用。

关键词：纤维蛋白原血管平滑肌细胞增殖迁移丝裂原活化蛋白激酶

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胚胎干细胞来源的拟胚体分化早期血管平滑肌标志物的表达时相

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中国应用生理学杂志 2008年第4期24卷 385-390页

作者：韩雅玲肖艳平齐岩梅康建闫承慧沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科辽宁沈阳110016

目的:研究胚胎血管发育早期SMα-actin、SM22α、myocardin、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)的表达规律,并初步探讨在此阶段血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)对血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的影响。方法:采用转染平滑肌特异性蛋白SM22α启动子... 详细信息

目的:研究胚胎血管发育早期SMα-actin、SM22α、myocardin、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)的表达规律,并初步探讨在此阶段血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)对血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的影响。方法:采用转染平滑肌特异性蛋白SM22α启动子控制下表达增强型绿色荧光蛋白(GFP)报告基因载体的胚胎干细胞制备拟胚体(EBs),用免疫荧光染色、RT-PCR、Western blot分析SMα-actin、SM22α、myocardin、SMMHC的表达时相;然后分别用0μmol/L(对照组)、10μmol/L、50μmol/L AG1296(血小板源性生长因子受体抑制剂)处理EBs,观察三组SMα-actin、SM22α、myocardin、SMMHC在基因及蛋白水平上的表达变化。结果:胚胎血管发育早期SMα-actin、myocardin、SM22α、SMMHC分别在EBs第0(胚胎干细胞)、8、11、13d开始有表达。AG1296三种浓度处理后SMα-actin、myocardin、SM22α、SMMHC蛋白表达及myocardin、SM22α和SMMHC mRNA表达均无明显差异。结论:EBs发育过程中存在着自发的VSMCs分化,SMα-actin表达最早,依次为myocardin、SM22α、SMMHC;PDGF-BB对EBs分化早期VSMCs标志物表达的调控可能不是必要的。

关键词：胚胎干细胞血管平滑肌细胞分化血小板源性生长因子-BB

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抑制Rac1蛋白活化阻碍胚胎发育早期血管新生

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生物化学与生物物理进展 2009年第6期36卷 696-701页

作者：张剑韩雅玲康建张效林齐岩梅闫承慧李少华沈阳军区总医院全军心血管病研究所心血管内科 Department of Pathology and Laboratory Medicine Robert Wood Johnson Medical SchoolNew Jersey 08854USA

小G蛋白Rac1在胚胎发育早期血管形成尤其是内皮发生过程中的作用尚不清楚.采用胚胎干细胞(ESCs)为模型,建立稳定表达持续表达型Rac1(G12V)和显性失活型Rac1(T17N)编码序列的小鼠ESCs并制备胚胎小体(EBs),诱导分化后观察Rac1(G12V)和Rac1... 详细信息

小G蛋白Rac1在胚胎发育早期血管形成尤其是内皮发生过程中的作用尚不清楚.采用胚胎干细胞(ESCs)为模型,建立稳定表达持续表达型Rac1(G12V)和显性失活型Rac1(T17N)编码序列的小鼠ESCs并制备胚胎小体(EBs),诱导分化后观察Rac1(G12V)和Rac1(T17N)对内皮细胞分化和迁移功能的影响.采用相差显微镜观察EBs发育和分化特征,Pull down分析Rac1表达变化,免疫荧光染色和Western blot分析内皮分化标志物,Matrigel凝胶实验观察血管索形成.结果表明,无论过表达或抑制Rac1的活化,并不影响EBs发育,均可形成典型的EBs胚层结构.抑制Rac1活化对内皮细胞系的发育无影响,但分化的内皮细胞不能连接成血管网.活化的Rac1表达减少,细胞迁移受到明显抑制.抑制Rac1活化导致细胞骨架F-actin排布紊乱.以上结果提示,Rac1影响胚胎早期血管发育的因素是抑制细胞游走,后者可能是通过F-actin机制所介导.

关键词：胚胎干细胞 Rac1 分化血管发育

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神经生长因子对人脐静脉内皮细胞在体外形成管腔样结构的影响

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中华老年心脑血管病杂志 2009年第1期11卷 48-51页

作者：齐岩梅韩雅玲康建李娜田孝祥闫承慧大连医科大学大连116044 沈阳军区总医院心内科心血管研究所

目的探讨神经生长因子(NGF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)在体外形成管腔样结构(LLSs)的影响及其信号机制。方法将接种在基质胶上的HUVECs分为空白对照组、NGF组、NGF中和抗体组、对照IgG组、NGF中和抗体+NGF组、对照IgG+NGF组,以相差显... 详细信息

目的探讨神经生长因子(NGF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)在体外形成管腔样结构(LLSs)的影响及其信号机制。方法将接种在基质胶上的HUVECs分为空白对照组、NGF组、NGF中和抗体组、对照IgG组、NGF中和抗体+NGF组、对照IgG+NGF组,以相差显微镜直接观察LLSs形态,并通过二脒基苯基吲哚/鬼笔环肽免疫荧光染色观察LLSs的细胞组成。为证实NGF促LLSs形成的信号通路,向培养液中分别预先加入丝裂原活化蛋白激酶3个主要信号通路的特异性抑制剂(PD98059、SB203580及SP600125),观察上述3个信号通路对NGF促LLSs形成的影响,并应用Western blot检测NGF及c-Jun N末端激酶(JNK)特异性抑制剂SP600125对HUVECs JNK表达及活性的影响。结果 NGF组LLSs的平均面积较空白对照组明显增加(P0.05)。结论NGF能促进HUVECs在体外形成LLSs,可能与激活JNK信号通路有关。

关键词：神经生长因子脐静脉内皮细胞信号传导丝裂原激活蛋白激酶类

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丝裂原活化蛋白激酶在人冠状动脉平滑肌细胞向三维纤维蛋白胶迁移中的作用

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中国应用生理学杂志 2005年第4期21卷 388-392,i0009页

作者：韩雅玲齐岩梅康建梁明陈兴华中国人民解放军心血管病研究所沈阳军区总医院心内科辽宁省金秋医院心内科辽宁沈阳110016

目的:观察三维纤维蛋白(Fb)胶对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)的趋化作用及其信号转导机制。方法:采用胶原酶消化法培养HCASMC,倒置相差显微镜观察其向三维Fb胶中迁移的能力及ERK、p38、JNK信号通路对其迁移能力的影响。Weste... 详细信息

目的:观察三维纤维蛋白(Fb)胶对体外培养的人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)的趋化作用及其信号转导机制。方法:采用胶原酶消化法培养HCASMC,倒置相差显微镜观察其向三维Fb胶中迁移的能力及ERK、p38、JNK信号通路对其迁移能力的影响。Western blot检测Fb对HCASMC p-ERK、p-p38和p-JNK表达的调控。结果:向Fb胶中迁移的HCASMC呈长梭型,细胞数量增加时形成环形管腔样结构。纤维蛋白原(Fg)浓度为0.8 g/L^6.4 g/L时,HCASMC向胶中迁移的数量呈浓度依赖性增加,并随培育时间的延长逐渐增多。用Western Blot分析显示Fb以时间依赖性方式诱导ERK、p38及JNK活化,三者的选择性抑制剂PD98059 50μmol/L、SB20358010μmol/L及SP600125 20μmol/L可分别抑制其活化,但对HCASMC向胶中迁移的抑制能力不尽相同。PD9805950μmol/L对HCASMC迁移无明显影响,而SB203580 10μmol/L和SP600125 20μmol/L均可抑制HCASMC向Fb胶迁移,且后者抑制作用更强。结论:Fb胶通过激活细胞JNK和p38(而不是ERK信号通路)促进HCASMC向Fb胶中迁移,这种机制可能在动脉粥样硬化血栓形成及再狭窄过程中发挥重要作用。

关键词：丝裂原活化蛋白激酶纤维蛋白(原) 冠状动脉平滑肌细胞迁移

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绿色荧光蛋白标记的TGF-β1shRNA真核表达载体的构建及鉴定

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中国应用生理学杂志 2009年第2期25卷 244-249页

作者：韩雅玲李娜康建齐岩梅郭亮闫承慧沈阳军区总医院心血管病研究所辽宁沈阳110016

目的:构建小鼠转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,探讨TGF-β1在血管发育中的调控作用。方法:根据GenBank小鼠TGF-β1mRNA序列,设计合成三对短链寡核苷酸,退火后形成双链DNA并克隆至入门载体pEN-mH1c。将插入目的... 详细信息

目的:构建小鼠转化生长因子β1(TGF-β1)短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,探讨TGF-β1在血管发育中的调控作用。方法:根据GenBank小鼠TGF-β1mRNA序列,设计合成三对短链寡核苷酸,退火后形成双链DNA并克隆至入门载体pEN-mH1c。将插入目的基因片段的入门载体与带有绿色荧光蛋白(GFP)标签的shRNA真核表达载体pDS-hpEy进行LR重组反应,完成三个TGF-β1shRNA表达载体的构建,分别命名为pDS-Ta,pDS-Tb和pDS-Tc。经测序确认后,转染小鼠成纤维细胞(NIH/3T3),筛选稳定表达的细胞克隆,以RT-PCR及Western blot方法检测转染后TGF-β1 mRNA和蛋白表达。结果:RT-PCR和Western blot显示pDS-Tc可明显下调NIH/3T3细胞TGF-β1的mRNA和蛋白表达,mRNA下调约为70%,蛋白表达减少约65%。结论:GFP标签TGF-β1shRNA表达载体能够阻断TGF-β1基因表达,可作为研究TGF-β1调控血管发育机制的一个工具,为阐明TGF-β1信号传导通路奠定基础。

关键词： LR重组 TGF-β1shRNA 载体构建沉默效率鉴定

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Lutembacher综合征彩色多普勒超声心动图特征及规律性研究

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中华超声影像学杂志 2009年第8期18卷 729-730页

作者：侯传举齐岩梅邓东安朱鲜阳韩秀敏杨军沈阳军区总医院先心病内科 110016 辽宁省金秋医院心内科沈阳医学院附属沈洲医院超声科

Lutembacher综合征是一种少见的先天性心脏病。自1987年8月至2008年8月，我院共收治30例Lutembacher综合征患者，笔者对其彩色多普勒超声心动图（CDE）特征和规律性进行了研究，现报告如下。

关键词： Lutembacher综合征彩色多普勒超声心动图先天性心脏病

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糖尿病与非糖尿病患者急性心肌梗死血脂分析

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实用心脑肺血管病杂志 2003年第4期11卷 196-197页

作者：齐岩梅辽宁省金秋医院心内科 110016

目的　探讨糖尿病与非糖尿病患者并发急性心肌梗死时血脂水平变化及临床意义。　方法　以我院心内科收治的 2 3例糖尿病合并急性心肌梗死患者为观察组 ,与 4 4例非糖尿病急性心肌梗死对照组进行比较。观察指标为血甘油三酯、总胆固醇、... 详细信息

目的　探讨糖尿病与非糖尿病患者并发急性心肌梗死时血脂水平变化及临床意义。　方法　以我院心内科收治的 2 3例糖尿病合并急性心肌梗死患者为观察组 ,与 4 4例非糖尿病急性心肌梗死对照组进行比较。观察指标为血甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、低密度与高密度脂蛋白胆固醇比值、甘油三酯与高密度脂蛋白胆固醇比值。　结果　观察组的甘油三酯 (TG) (P 0 0 5 )两组无明显统计学差异。

关键词：糖尿病急性心肌梗死血脂临床分析并发症总胆固醇高密度脂蛋白胆固醇

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镜像右位心及合并畸形彩色多普勒超声心动图特征和规律性研究

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中国超声医学杂志 2011年第2期27卷 129-132页

作者：侯传举齐岩梅邓东安朱鲜阳韩秀敏卢迪沈阳军区总医院先心病内科沈阳市儿童医院超声科辽宁省金秋医院心内科

目的探寻镜像右位心及合并畸形彩色多普勒超声心动图(CDE)特征和规律性。方法应用CDE检查100例镜像右位心及合并畸形,寻找CDE特征和规律性,95例经心导管对照,76例手术证实。结果根据CDE特征对92例做出正确诊断,诊断准确率92%,误诊8例。... 详细信息

目的探寻镜像右位心及合并畸形彩色多普勒超声心动图(CDE)特征和规律性。方法应用CDE检查100例镜像右位心及合并畸形,寻找CDE特征和规律性,95例经心导管对照,76例手术证实。结果根据CDE特征对92例做出正确诊断,诊断准确率92%,误诊8例。本组镜像右位心及合并畸形CDE特征和规律性明显:(1)镜像右位心合并12种先天性心脏病,其中ILL型右心室双出口(27%)最多,IDD型矫正性大动脉转位(17%)、法洛四联症(16%)和室间隔缺损(12%)较少,心室双入口(7%)、三尖瓣闭锁(5%)、两腔心(5%)、ILL型完全性大动脉转位(4%)、二尖瓣闭锁(2%)、孤立性右室流出道狭窄(2%)、完全性肺静脉异位引流(2%)、孤立性二尖瓣前叶裂隙(1%)更少。(2)镜像右位心无论合并那种先天性心脏病均为心房反位。(3)镜像右位心合并右心室双出口和完全性大动脉转位为左转位;合并矫正性大动脉转位为右转位。(4)镜像右位心合并肺动脉狭窄(80%)多见,肺动脉压正常(12%)和肺动脉高压(8%)少见。(5)合并房间隔缺损和室间隔缺损,彩色多普勒血流显像显示过房间隔或室间隔左向右或双向五彩镶嵌分流束血流信号。结论镜像右位心及合并畸形CDE特征和规律性明显,应用CDE对镜像右位心及合并畸形可做出正确诊断,但检查者必须熟练掌握本病解剖。在探查手法上与正常位心脏明显不同,检查前阅读X线正位胸片对CDE正确诊断有帮助,并可提高检查效率。

关键词：先天性心脏病镜像右位心大动脉转位室间隔缺损彩色多普勒超声心动图

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小鼠胚胎背主动脉发育过程中内皮和平滑肌标志物表达时相及其变化

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第36期11卷 7121-7125页

作者：韩雅玲李颖佳齐岩梅康建闫承慧解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科辽宁省沈阳市110016

目的:观察小鼠胚胎发育过程中背主动脉胎肝激酶1、α-平滑肌肌动蛋白的表达时相,初步探讨背主动脉内皮和平滑肌细胞的形成及其可能起源。方法:实验于2006-01/2007-01在解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科完成。①实验材料:... 详细信息

目的:观察小鼠胚胎发育过程中背主动脉胎肝激酶1、α-平滑肌肌动蛋白的表达时相,初步探讨背主动脉内皮和平滑肌细胞的形成及其可能起源。方法:实验于2006-01/2007-01在解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科完成。①实验材料:昆明种小白鼠50只,体质量20～22g,其中雌鼠30只。②实验方法:将雌鼠分别放入公鼠笼内过夜、交配,从怀孕第8.5天开始获取胚胎,在雌鼠怀孕第8.5～18.5天,每一时间点取10个小鼠胚胎。③实验评估:对胎鼠组织切片分别行苏木精-伊红染色,观察背主动脉形态学变化;免疫组织化学染色法观察内皮细胞标志物胎肝激酶1、CD31、Ⅷ因子相关抗原,α-平滑肌肌动蛋白表达变化及其相互关系。结果:①胚胎8.5～9.5d胎鼠背主动脉由单层细胞构成,呈胎肝激酶1、CD31阳性,α-平滑肌肌动蛋白、Ⅷ因子相关抗原阴性。②胚胎10.5d胎鼠背主动脉仍为单层细胞,但胎肝激酶1、CD31、Ⅷ因子相关抗原、α-平滑肌肌动蛋白均呈阳性。③胚胎11.5d背主动脉管壁发育为多层,内层细胞呈胎肝激酶1阳性、α-平滑肌肌动蛋白阴性,外层细胞呈胎肝激酶1阴性而α-平滑肌肌动蛋白阳性,血管与周围间充质无明显分界,背主动脉管壁周围可见散在α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞。④11.5d之后,背主动脉管壁平滑肌细胞数量增多且由不规则型转变为纺锤型,内层内皮细胞继续呈胎肝激酶1阳性、α-平滑肌肌动蛋白阴性,外层平滑肌细胞胎肝激酶1阴性、α-平滑肌肌动蛋白阳性,血管与周围间充质分界清楚,背主动脉血管周围无散在α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞。结论:胚胎背主动脉的平滑肌细胞可能最早起源于胎肝激酶1、CD31阳性细胞,后期可能来源于周围间充质细胞的募集分化。

关键词：背主动脉血管平滑肌胚胎胎肝激酶1 α-平滑肌肌动蛋白

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