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表没食子儿茶素没食子酸酯通过抑制凋亡减轻脓毒症肠道损伤的研究

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中华急诊医学杂志 2024年第4期33卷 529-535页

作者：黄玮玮马涛李志华王毅高晓明于湘友新疆医科大学第一附属医院重症医学中心乌鲁木齐830054 新疆医科大学乌鲁木齐830054 新疆医学动物模型研究重点实验室乌鲁木齐830054

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对脓毒症肠道损伤的作用,并探究对内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)性凋亡的途径是否存在影响。方法选取60只雄性SD大鼠,根据随机数字表法将其分为5组:... 详细信息

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对脓毒症肠道损伤的作用,并探究对内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)性凋亡的途径是否存在影响。方法选取60只雄性SD大鼠,根据随机数字表法将其分为5组:假手术组(Sham组)、盲肠结扎穿孔术致脓毒症组(cecal ligation and puncture,CLP组)、脓毒症+EGCG低剂量组(术后腹腔注射EGCG 25 mg/kg,EL组)、脓毒症+EGCG中剂量组(术后腹腔注射EGCG 50 mg/kg,EM组)、脓毒症+EGCG高剂量组(术后腹腔注射EGCG 75 mg/kg,EH组),每组均为12只。造模24 h后处死各组大鼠并收集标本。血清中炎症因子采用酶联免疫吸附试验检测;苏木精伊红染色后,光镜下观察回肠病理学改变,根据Chiu's评分进行评价;肠道组织中紧密连接蛋白-1(CLDN1,Claudin-1)、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(phosphorylated PERK,p-PERK)、蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12(cysteinyl aspartate specifi c protease-12,Caspase-12)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(C/EBP-homologous protein antibody,CHOP)的蛋白表达采用蛋白质免疫印迹试验检测;肠道组织中Claudin-1、p-PERK、CHOP、Caspase-12的阳性面积采用免疫组织化学法检测。结果对比Sham组,CLP组大鼠血清中白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α水平,Chiu's评分均升高(均P<0.05);回肠黏膜组织中Claudin-1表达减少,ERS性凋亡相关蛋白p-PERK、CHOP、Caspase-12表达量均增加(均P<0.05)。与CLP组相比,给予低、中、高剂量EGCG干预后大鼠肠道损伤均有所缓解(均P<0.05)。EL组血清炎症因子水平、Chiu's评分和小肠组织中ERS性凋亡相关蛋白p-PERK、CHOP、Caspase-12的蛋白表达水平及阳性面积均较CLP组进一步降低,且EM组较EL组、EH组较EM组均进一步降低(均P<0.05)。EL组小肠组织中Claudin-1蛋白表达水平及阳性面积均较CLP组进一步升高(均P<0.05),且EM组较EL组、EH组较EM组均进一步升高(均P<0.05)。结论EGCG可能通过抑制ERS性凋亡通路的活化对脓毒症大鼠肠道损伤起到一定的保护作用,且高剂量EGCG疗效更佳。

关键词：脓毒症肠道损伤表没食子儿茶素没食子酸酯内质网应激凋亡

“双碳”背景下AF汽车有限公司绿色发展战略研究

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“双碳”背景下AF汽车有限公司绿色发展战略研究

作者：黄玮玮吉林大学

学位级别：硕士

表没食子儿茶素没食子酸酯对脓毒症肠道损伤的保护作用及机制研究

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表没食子儿茶素没食子酸酯对脓毒症肠道损伤的保护作用及机制研究

作者：黄玮玮新疆医科大学

学位级别：硕士

miR-155调节脓毒症诱导的炎症反应及肠道功能障碍的机制

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中国急救医学 2024年第1期44卷 49-56页

作者：李志华黄玮玮马涛王毅于湘友新疆医科大学第一附属医院重症医学科新疆乌鲁木齐830000

目的探讨miR-155在脓毒症中的临床价值,以及其在脓毒症引起的炎症反应和肠道功能障碍中的作用。方法采用前瞻性观察性研究方法,收集2021年11月至2023年4月新疆医科大学第一附属医院129例脓毒症患者及129例同期健康体检者外周血样本,绘... 详细信息

目的探讨miR-155在脓毒症中的临床价值,以及其在脓毒症引起的炎症反应和肠道功能障碍中的作用。方法采用前瞻性观察性研究方法,收集2021年11月至2023年4月新疆医科大学第一附属医院129例脓毒症患者及129例同期健康体检者外周血样本,绘制受试者工作特征(ROC)曲线并计算曲线下面积(AUC),评价miR-155在脓毒症中的诊断价值。所有脓毒症患者进一步根据病情严重程度分为脓毒症组(n=83)和脓毒性休克组(n=46)。根据欧洲危重症医学会(ESICM)提出的诊断标准,进一步将脓毒症患者分为急性胃肠损伤(AGI)组(n=75)和非AGI组(n=54),比较两组循环miR-155及外周血清二胺氧化酶(DAO)的表达水平。采用盲肠结扎穿孔法(CLP)建立脓毒症大鼠模型,并按照随机数字法将32只大鼠分为假手术(Sham)组、CLP组、miR-155阴性对照组(CLP大鼠术前1个月腹腔注射250μL miR-155腺相关病毒空载体)和miR-155腺相关病毒抑制组(CLP大鼠术前1个月腹腔注射250μL miR-155腺相关敲低病毒),每组8只。于造模后24 h经腹主动脉采血并取大鼠小肠组织,采用苏木素-伊红(HE)染色观察小肠病理学改变并进行肠黏膜损伤评分(Chiu′s评分);采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-155表达水平;采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清DAO、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)水平;采用免疫组化法及蛋白质免疫印迹法检测肠道紧密连接蛋白[紧密连接蛋白-封闭蛋白1(Claudin-1)及闭合蛋白(Occludin)]的表达。结果脓毒症患者外周血miR-155表达量较健康体检者明显升高,且脓毒性休克患者外周血miR-155表达量亦高于脓毒症患者(P<0.05)。经ROC曲线分析,外周血miR-155表达量可区分脓毒症患者与健康体检者(AUC为0.932,敏感度为91.9%,特异度为90.5%),也可区分脓毒症与脓毒性休克患者(AUC为0.883,敏感度为79.2%,特异度为80.6%),也可区分脓毒症AGI和非AGI患者(AUC为0.933,敏感度为80.4%,特异度为93.4%)。此外,脓毒症组外周血miR-155表达量与C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、乳酸、急性生理学与慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)评分、序贯器官衰竭评分(SOFA)、DAO、IL-6及TNF-α呈正相关(均P<0.05)。动物实验结果提示,与Sham组相比,CLP组大鼠小肠黏膜水肿、炎症细胞浸润,绒毛破坏塌陷、排列紊乱、部分腺体结构不完整,Chiu′s评分明显升高,血清TNF-α、IL-6、DAO水平明显升高,小肠黏膜组织紧密连接蛋白表达减少。与CLP组相比,miR-155抑制组大鼠肠道损伤得到明显缓解,表现为Chiu′s评分、IL-6、TNF-α、DAO水平下降,紧密连接蛋白表达增加。结论miR-155可能是诊断脓毒症的潜在生物标志物,降低其表达水平可减轻脓毒症诱导的炎症反应和肠道功能障碍。

关键词：脓毒症肠道屏障功能障碍 miR-155 炎症反应急性胃肠损伤紧密连接蛋白-封闭蛋白1 闭合蛋白二胺氧化酶

表没食子儿茶素没食子酸酯对脓毒症肠道损伤的影响及机制研究

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海南医学院学报 2024年第10期30卷 731-738页

作者：黄玮玮马涛李志华王毅高晓明于湘友新疆医科大学第一附属医院重症医学中心新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学新疆乌鲁木齐830054 新疆医学动物模型研究重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对脓毒症大鼠肠道损伤的影响及机制。方法:随机将32只雄性SD大鼠分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、脓毒症+EGCG组(EGCG组)、脓毒症+GSK2606414干预组(GSK组),... 详细信息

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对脓毒症大鼠肠道损伤的影响及机制。方法:随机将32只雄性SD大鼠分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、脓毒症+EGCG组(EGCG组)、脓毒症+GSK2606414干预组(GSK组),每组各8只。Sham组开腹后仅观察盲肠后立即关腹;CLP组采用盲肠结扎穿孔术;EGCG组在CLP术后腹腔注射50 mg/kg的EGCG;GSK组在CLP术前一周每天予100 mg/kg的GSK2606414灌胃。造模术后24 h处死4组大鼠,留取并保存血清及肠道组织标本。苏木素-伊红染色观察大鼠肠道病理学变化。酶联免疫测定法检测大鼠血清中IL-1β、IL-6水平。免疫组化观察肠道组织中磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12(Caspase-12)、紧密连接蛋白-1(Claudin-1)的阳性面积百分比。蛋白印迹法(Western blotting,WB)检测大鼠肠道组织中p-PERK、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、CHOP、Caspase-12、Claudin-1的表达。结果:CLP组大鼠肠道肠绒毛结构严重破坏,镜下可见大量炎性细胞浸润;EGCG组和GSK组较CLP组病理损伤减轻,CLP组Chiu′s评分较EGCG组和GSK组明显升高(P<0.05)。CLP组大鼠血清IL-1β、IL-6水平均较Sham组明显升高,EGCG组和GSK组血清炎症因子水平均较CLP组显著降低(P<0.05)。CLP组大鼠肠道组织中p-PERK、CHOP、Caspase-12阳性面积百分比较Sham组均明显升高,EGCG组和GSK组大鼠肠道组织上述指标阳性面积百分比较CLP组均明显降低(P<0.05);CLP组大鼠肠道组织中Claudin-1阳性面积百分比较Sham组均明显降低,EGCG组和GSK组大鼠肠道组织上述指标阳性面积百分比较CLP组均明显升高(P<0.05)。CLP组大鼠肠道组织中p-PERK、CHOP、Caspase-12蛋白表达水平均高于Sham组,EGCG组和GSK组上述指标水平均低于CLP组(P<0.05);CLP组大鼠肠道组织中Claudin-1蛋白表达水平均低于Sham组,EGCG组和GSK组上述指标水平均高于CLP组(P<0.05)。结论:表没食子儿茶素没食子酸酯对脓毒症肠道损伤有一定的治疗作用,其机制可能与抑制内质网应激性凋亡通路相关。

关键词：脓毒症肠道损伤表没食子儿茶素没食子酸酯内质网应激凋亡

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System Xc-/GPX4/Nrf2介导的铁死亡对脓毒症大鼠肠道机械屏障的影响

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中华实用诊断与治疗杂志 2024年第1期38卷 12-18页

作者：马涛黄玮玮于湘友新疆医科大学第一附属医院重症医学科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐830054

目的探讨System Xc-/GPX4/Nrf2通路介导的铁死亡对脓毒症大鼠肠道机械屏障损伤程度及炎症状态的影响。方法 24只SPF级雄性大鼠随机分为假手术组、脓毒症组、铁死亡组、治疗组各6只。脓毒症组、铁死亡组、治疗组采用盲肠结扎穿孔法制备... 详细信息

目的探讨System Xc-/GPX4/Nrf2通路介导的铁死亡对脓毒症大鼠肠道机械屏障损伤程度及炎症状态的影响。方法 24只SPF级雄性大鼠随机分为假手术组、脓毒症组、铁死亡组、治疗组各6只。脓毒症组、铁死亡组、治疗组采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症大鼠模型,假手术组开腹游离盲肠后还纳关腹。造模即刻,治疗组皮下注射去铁胺20 mg/kg,铁死亡组腹腔注射铁死亡激活剂Erastin 20 mg/kg,假手术组和脓毒症组腹腔注射等量生理盐水,注射后4组均皮下注射37℃生理盐水50 mg/kg液体复苏。造模24 h大鼠麻醉后开腹,取十二指肠(空肠),机械法组织匀浆后收集细胞悬液,应用荧光探针法检测小肠平滑肌细胞活性氧(ROS);透射电镜下观察小肠上皮组织中线粒体形态。然后腹主动脉采血离心取血清,采用比色法检测Fe^(3+)、D-乳酸脱氢酶(D-LDH)水平,采用硫代巴比妥酸缩合法检测丙二醛(MDA)水平,采用ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平。采血后处死大鼠,取小肠组织,采用HE染色观察组织病理学改变,采用免疫组织化学ABC法检测GPX4、Nrf2、Claudin-1阳性面积百分比,采用Western blot法检测GPX4、Nrf2、Claudin-1蛋白相对表达量。结果 (1)治疗组[(56 528±182)×10~5/mL]、脓毒症组[(67 964±844)×10~5/mL]、铁死亡组[(71 958±1 306)×10~5/mL]小肠平滑肌细胞ROS荧光强度均高于假手术组[(52 551±438)×10~5/mL](P<0.05),脓毒症组、铁死亡组高于治疗组(P<0.05),铁死亡组高于脓毒症组(P<0.05)。(2)假手术组小肠上皮组织线粒体形态完整、嵴丰富整齐、双膜结构存在且体积较大;脓毒症组线粒体体积变小,膜信号变强,线粒体嵴松散并发生溶解现象;治疗组线粒体体积较脓毒症组略有恢复,双膜结构部分存在,线粒体嵴少量溶解;铁死亡组线粒体体积较脓毒症组进一步缩小,膜密度增高,线粒体嵴发生溶解及消失。(3)脓毒症组、治疗组、铁死亡组血清Fe^(3+)含量低于假手术组(P<0.05),MDA、D-LDH水平均高于假手术组(P<0.05);脓毒症组、铁死亡组血清Fe^(3+)含量低于治疗组,MDA、D-LDH水平高于治疗组(P<0.05);铁死亡组血清Fe^(3+)含量低于脓毒症组,MDA、D-LDH水平高于脓毒症组(P<0.05)。(4)脓毒症组、治疗组、铁死亡组血清IL-1β、TNF-α、IL-6水平均高于假手术组(P<0.05),脓毒症组、铁死亡组高于治疗组(P<0.05),铁死亡组高于脓毒症组(P<0.05)。(5)假手术组小肠绒毛丰富规整、未见基底层分离及毛细血管充血;脓毒症组绒毛顶端出现溶解、破碎,炎症细胞浸润明显,毛细血管充血;治疗组绒毛顶端部分破裂情况略有好转,但仍有毛细血管充血、炎症细胞浸润;铁死亡组小肠绒毛已出现崩解、脱落,炎症组织浸润明显,部分延伸到绒毛两侧,黏膜与黏膜下层出现分离。(6)脓毒症组、治疗组、铁死亡组Nrf2阳性面积百分比大于假手术组(P<0.05),GPX4、Claudin-1阳性面积百分比小于假手术组(P<0.05);脓毒症组、铁死亡组Nrf2阳性面积百分比大于治疗组,GPX4、Claudin-1阳性面积百分比小于治疗组(P<0.05);铁死亡组Nrf2阳性面积百分比大于脓毒症组,GPX4、Claudin-1阳性面积百分比小于脓毒症组(P<0.05)。(7)脓毒症组、铁死亡组Nrf2蛋白相对表达量高于治疗组,GPX4、Claudin-1蛋白相对表达量均低于治疗组(P<0.05);铁死亡组Nrf2蛋白相对表达量高于脓毒症组,GPX4、Claudin-1蛋白相对表达量均低于脓毒症组(P<0.05)。结论脓毒症大鼠模型肠道损伤中存在铁死亡现象;抑制System Xc-/GPX4/Nrf2通路介导的铁死亡,可改善脓毒症大鼠肠道机械屏障的损伤程度及炎症状态。

关键词：脓毒症肠道损伤 System Xc-/GPX4/Nrf2 铁死亡大鼠

运脾化浊方对脾虚湿阻型中晚期结直肠癌化疗后生活质量的影响

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运脾化浊方对脾虚湿阻型中晚期结直肠癌化疗后生活质量的影响

作者：黄玮玮山东中医药大学

学位级别：硕士

目的:探讨运脾化浊方对中晚期结直肠癌患者化疗后生活质量的影响的临床疗效。方法:收集烟台市中医医院肿瘤科2020年7月-2021年11月住院的符合本研究纳入标准的60例中晚期结直肠癌患者。随机将其60名患者分为治疗组和对照组,每组各30例,... 详细信息

目的:探讨运脾化浊方对中晚期结直肠癌患者化疗后生活质量的影响的临床疗效。方法:收集烟台市中医医院肿瘤科2020年7月-2021年11月住院的符合本研究纳入标准的60例中晚期结直肠癌患者。随机将其60名患者分为治疗组和对照组,每组各30例,均应用常规化疗方案,治疗组联合服用中药运脾化浊颗粒,对照组联合服用安慰剂颗粒,其中两种颗粒外观、颜色均一致。观察两组患者治疗前后的中医症状（体倦乏力、恶心呕吐、口淡不渴、大便异常）、肠癌生命质量测定量表评分、KPS评分、T细胞亚群、骨髓抑制、粪便菌群分布。结果:1.中医症状:治疗后,治疗组总积分比对照组改善明显（P＜0.05）;2.肠癌患者生命质量测定量表:治疗后,组间比较:治疗组在生理、情感、功能状况三个方面较对照组明显改善（P＜0.05）。组内比较:治疗组在生理、情感、功能、总分方面较治疗前均有显著改善（P＜0.01）;对照组在情感方面较前改善（P＜0.05）,其他方面改善不显著,甚至有下降。KPS评分方面:治疗后,治疗组KPS评分优于对照组（P＜0.05）。3.免疫功能:治疗后,组间比较:治疗组CD4+较对照组升高明显（P＜0.05）,CD8、CD4/CD8虽有升高但无统计学意义;组内比较:治疗组CD4+、CD8+、CD4/CD8升高显著（P＜0.01）;对照组CD4+、CD8+下降明显（P＜0.01）。4.骨髓抑制:治疗后,治疗组改善白细胞减少方面较对照组改善（P＜0.05）。5.粪便菌群变化分析:运脾化浊方可提高肠道菌群群落丰富度,提高有益菌乳杆菌属与双歧杆菌属的菌群群落丰富度,降低条件致病菌拟杆菌的丰富度占比,但统计学不具有显著性差异（P＞0.05）。结论:运脾化浊方联合化疗能显著改善“脾虚湿阻型”中晚期结直肠癌患者的中医症状、肠癌生活质量、外周血免疫功能、骨髓抑制情况,并且可提高中晚期结直肠癌患者粪便肠道菌群中有益菌占比,降低致病菌占比。

关键词：运脾化浊方中晚期结直肠癌肠道菌群

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铁死亡在脓毒症中有关通路的研究进展

中华危重病急救医学 2022年第10期34卷 1103-1106页

作者：马涛黄玮玮王毅丁琼莉于湘友新疆医科大学第一附属医院重症医学科乌鲁木齐830054

脓毒症是由细菌等病原微生物引起的宿主反应失调所致器官功能障碍并伴有高病死率的一种疾病,前期以炎症反应为主,后期则主要表现为免疫抑制,仅用重症感染和免疫抑制来解释脓毒症导致的不良预后已略显苍白;从全球脓毒症绝对病死率的角度... 详细信息

脓毒症是由细菌等病原微生物引起的宿主反应失调所致器官功能障碍并伴有高病死率的一种疾病,前期以炎症反应为主,后期则主要表现为免疫抑制,仅用重症感染和免疫抑制来解释脓毒症导致的不良预后已略显苍白;从全球脓毒症绝对病死率的角度看,关于脓毒症的战役并未取得全面胜利;"铁死亡"自2012年由Dixion等正式提出至今已有10年,研究范畴从最初的肿瘤相关疾病,到神经系统疾病及心血管系统疾病,热度始终不减,并取得了一定的进展。目前,在脓毒症背景下,发现铁死亡在各器官功能障碍中扮演着越来越重要的角色,对疾病的治疗及预后亦有着重要影响。现对主要的几种铁死亡相关通路及干预措施进行概述,以便更全面地了解脓毒症的发病机制,寻求新的治疗靶点,优化诊治策略,提高患者生存率和生存质量以及改善临床预后。

关键词：脓毒症铁死亡发生机制通路抑制剂

鳗鲡养殖污染现状及整治对策——以永泰县清凉溪流域为例

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能源与环境 2022年第3期 10-12,17页

作者：黄玮玮福州市永泰环境监测站福建福州350700

鳗鲡作为福建省主要的出口创汇养殖种类之一,其养殖模式仍停留在池塘或水泥精养模式,不仅占地面积大、换水量大、占用大量淡水资源,而且大量排放的养殖废水易导致水环境的污染。针对鳗鲡养殖的污染现状及危害,以永泰县清凉溪流域为例,... 详细信息

鳗鲡作为福建省主要的出口创汇养殖种类之一,其养殖模式仍停留在池塘或水泥精养模式,不仅占地面积大、换水量大、占用大量淡水资源,而且大量排放的养殖废水易导致水环境的污染。针对鳗鲡养殖的污染现状及危害,以永泰县清凉溪流域为例,分析清凉溪流域水质超标原因,根据污染整治实际情况,提出鳗鲡养殖污染整治的关键点控制,探讨鳗鲡养殖可持续发展的对策建议。

关键词：鳗鲡养殖污染整治关键点控制流域