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黑曲霉固态发酵餐厨垃圾生产酸性蛋白酶

食品工程 2023年第2期 44-47页

作者：张帅陈栩民黄海潇肇庆学院食品与制药工程学院广东肇庆526601

餐厨垃圾作为餐饮行业中的大宗废弃物,目前主要是进行填埋处理,既浪费了资源又不利于环保。采用黑曲霉固态发酵餐厨垃圾生产酸性蛋白酶,为这一资源的综合利用开辟了新途径。通过单因素试验考察了黑曲霉接种量、培养基含水量及发酵时间3... 详细信息

餐厨垃圾作为餐饮行业中的大宗废弃物,目前主要是进行填埋处理,既浪费了资源又不利于环保。采用黑曲霉固态发酵餐厨垃圾生产酸性蛋白酶,为这一资源的综合利用开辟了新途径。通过单因素试验考察了黑曲霉接种量、培养基含水量及发酵时间3个重要因素对固态发酵餐厨垃圾生产酸性蛋白酶的影响。在单因素试验基础上,采用正交试验优化产酶工艺参数。结果表明,30 g餐厨垃圾固态发酵培养基中,黑曲霉接种量4 mL,加水量22 mL,30℃发酵70 h,此工艺条件下所得酸性蛋白酶的活力最高。

关键词：餐厨垃圾黑曲霉固态发酵酸性蛋白酶

虎杖甙对LPS作用下多形核白细胞趋化反应的影响及其机制研究

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虎杖甙对LPS作用下多形核白细胞趋化反应的影响及其机制研究

作者：黄海潇中国人民解放军第一军医大学

学位级别：硕士

近年来在对革兰氏阴性(G)菌引起中毒性休克的机制研究中，认识到脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)在启动体内免疫和炎症反应系统，导致中毒性休克中发挥了重要作用。内毒素引起休克、造成多器官功能衰竭(MOF)并非细菌感染直接作用，而... 详细信息

近年来在对革兰氏阴性(G)菌引起中毒性休克的机制研究中，认识到脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)在启动体内免疫和炎症反应系统，导致中毒性休克中发挥了重要作用。内毒素引起休克、造成多器官功能衰竭(MOF)并非细菌感染直接作用，而是宿主受LPS刺激后体内释放多种内源性细胞因子引起过度炎症反应的结果。而在过度炎症反应的发展过程中，多形核白细胞(polymorphonuclear leukocyte，PMN)的趋化和过度激活是导致组织损伤的重要起始因素。因此，抑制LPS引起的PMN过度激活和趋化是避免炎症反应失控的有效手段。虎杖甙(polydatin，PD)是从具有抗病毒、抗菌作用的中药虎杖中提取的主要成份，对感染性、烧伤性和失血性休克有良好疗效。近来的工作证实PD可以降低休克时白细胞在微静脉的粘附，改善休克动物的微循环灌流，提示PD可能具有抑制白细胞激活和趋化的作用。为了探讨PD治疗炎症、感染性休克的机制，本实验以LPS刺激来模拟炎症条件，观察了PD对炎症状态下多形核白细胞趋化性的影响及其机制，以期为PD的临床应用提供理论依据。实验第一部分采用趋化小室方法测定了PD对LPS作用后PMN趋化活性以及产生趋化因子的影响。结果表明：LPS刺激可以使多形核白细胞细胞对细菌甲酰化肽甲酰基甲硫氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸(fMLP)的趋化活性增高。PD对正常PMN的趋化活性没有明显影响，但能显著下调LPS引起的PMN趋化活性增高。此外，LPS也可增加PMN趋化性细胞因子的分泌，PD可以下调PMN对LPS刺激后PMN悬液上清趋化性的升高。接着，我们利用转染了甲酰化肽样受体的细胞株对其机制进行了初步探讨，结果发现PD同样可以下调LPS刺激下转染了甲酰化肽样受体基因的细胞株的细胞趋化性的升高。实验第二部分先用扫描电镜从形态学上观察了PD对LPS刺激下PMN形态的影响。结果发现：正常PMN分散均匀，呈球形。细胞膜的皱褶适中，细胞聚集少。受LPS刺激的PMN细胞增大、变形，细胞膜皱褶减少，有板状伪足伸出，多个细胞粘附聚集成团。在高倍扫描电镜下可见浆膜互相镶嵌连接，融合成片。而在PD处理的PMN，细胞形态上与正常对照组相比没有明显改变。在LPS刺激后，加入PD进行处理，则PMN回复成球形，皱褶与正常相比变化不明显，伪足形成少，细胞聚集较少。接着，我们观察了对白细胞变形和趋化运动密切相关的PMN骨架蛋白F一actin(纤维状肌动蛋白)在LPS刺激和PD处理后含量和分布的影响。结果观察到:在LPS刺激作用下，PMNF一actin含量明显下降至正常时的so士0.02%(P<0.05)，在LPS刺激后再用PD治疗，其F一actin又上升至正常的89土0.018%(P<0 .05)。在正常情况下，PMN中F一actin主要分布于细胞膜附近，形成一层较为致密的骨架，支撑起细胞的形状。在LPS刺激后，F一actin在细胞边缘形成一宽厚的骨架层，同时发现该层分布不均匀，提示在一些部位可能会有伪足形成。LPS刺激后再用PD 治疗，发现细胞边缘的F一actin较LPS刺激时明显减少，而中央相对增加，提示PD抑制了LPS对细胞骨架蛋白F一actin的影响。综合上述实验结果，可以得出以下结论: 1.用离体实验，从功能和形态学两方面证实，LPS可以引起PMN趋化性增强、引起细胞变形、板状伪足伸出以及细胞相互聚集;PD可以抑制LPS引起的PMN趋化性等改变，维持细胞正常的功能和形态。 ***引起的PMN变形和趋化性增强，可能与LPS能刺激PMN细胞自身分泌一些能促进细胞激活和趋化的化学因子增加有关;PD可以抑制LPS引起的PMN分泌上述趋化性化学因子及其引起的趋化反应。 ***抑制PMN趋化反应的作用机制可能与PD影响PMN上的一种趋化因子受体一甲酞化肤样受体FPRLI的表达以及维持PMN正常细胞骨架和形态、抑制LPS引起的PMNF一actin含量和分布的变化有关。

关键词：多形核白细胞虎杖甙脂多糖趋化性纤维状肌动蛋白

虎杖甙对脂多糖刺激下中性粒细胞趋化反应的影响

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第一军医大学学报 2003年第12期23卷 1253-1256页

作者：黄海潇赵清金春华第一军医大学休克微循环重点实验室广东广州510515

目的从白细胞趋化性变化中探讨虎杖甙治疗感染性休克的作用机制.方法以趋化寡肽fMLP为趋化因子,用趋化小室观察了正常时中性粒细胞的趋化活性以及脂多糖(LPS)、虎杖甙(PD)和PD对LPS刺激后中性粒细胞的趋化指数的改变.结果正常情况下,中... 详细信息

目的从白细胞趋化性变化中探讨虎杖甙治疗感染性休克的作用机制.方法以趋化寡肽fMLP为趋化因子,用趋化小室观察了正常时中性粒细胞的趋化活性以及脂多糖(LPS)、虎杖甙(PD)和PD对LPS刺激后中性粒细胞的趋化指数的改变.结果正常情况下,中性粒细胞表现出一定的趋化活性(趋化指数为4.96±±0.69).在10、100、1000ng/ml LPS刺激后,中性粒细胞趋化性较正常时显著增强(白细胞趋化指数各为8.94±1.73,10.31±1.180和7.12±1.46,LPS刺激组显著高于正常对照组)(P＜0.05).PD在0.8～0.008 mg/ml范围内均能抑制LPS的作用,使增高的白细胞趋化细胞数减少,以PD浓度0.08 mg/ml时效果最显著,其趋化指数可达1.95±***作用5～60 min,均能导致白细胞的趋化细胞数下降.当LPS浓度在10～1 000 ng/ml时,各PD治疗组与正常对照组比较均有显著性差异(P＜0.05).但不同浓度PD对正常中性粒细胞趋化性没有明显作用(P＞0.05).结论PD可调节LPS性炎症反应条件下白细胞的趋化性,可能对防治炎症和感染性休克有重要作用.

关键词：虎杖甙脂多糖中性粒细胞细胞趋化反应治疗感染性休克

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虎杖甙对内毒素性心肌细胞损伤的防治作用

第一军医大学学报 2003年第4期23卷 364-366页

作者：赵清黄海潇金春华第一军医大学全军休克微循环重点实验室广东广州510515 第一军医大学实验管理中心广东广州510515

目的观察脂多糖(LPS)对心肌细胞微丝蛋白的形态学影响以及中药虎杖甙(PD)的防治效果。方法体外乳鼠心肌细胞培养,随机分为4组:正常对照组(D'-Hanks 作用于心肌细胞30 min)、PD组(0.2 mmol/L作用于心肌细胞10 min)、LPS组(100 ng/ml刺激3... 详细信息

目的观察脂多糖(LPS)对心肌细胞微丝蛋白的形态学影响以及中药虎杖甙(PD)的防治效果。方法体外乳鼠心肌细胞培养,随机分为4组:正常对照组(D'-Hanks 作用于心肌细胞30 min)、PD组(0.2 mmol/L作用于心肌细胞10 min)、LPS组(100 ng/ml刺激30 min)和LPS+PD组(100 ng/ml LPS 30 min, 0.2 mmol/L PD治疗10 min)。用免疫荧光技术标记纤维状肌动蛋白(F-actin)。结果正常对照组心肌细胞皮质部分有较多纤维状肌动蛋白分布,细胞内纤维状肌动蛋白呈网状布满于整个细胞;LPS组细胞皮质部分染色较弱甚至消失,心肌细胞应力纤维(stress fiber)形成;PD(0.2 mmol/L)处理10 min后,心肌细胞应力纤维消失,形态趋于正常组细胞;而PD组和正常对照组细胞形态无明显差异。结论LPS可能直接导致心肌细胞应力纤维的形成,PD对LPS导致的心肌细胞损伤有保护作用。

关键词：内毒素心肌细胞损伤虎杖甙脂多糖中药微丝蛋白

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造血因子与急性放射病

解放军医学杂志 2005年第3期30卷 186-190页

作者：罗庆良从玉文郝静黄海潇毛秉智军事医学科学院放射医学研究所北京100850

近十余年来,应用细胞因子来改善辐射造血损伤获得了良好的疗效,积累了不少经验。然而,细胞因子治疗急性辐射损伤的用药对象、剂量、时机及合理的配伍应用等问题尚未解决,疗效并非尽善尽美,短效、无效者绝非罕见,甚至出现滥用现象... 详细信息

近十余年来,应用细胞因子来改善辐射造血损伤获得了良好的疗效,积累了不少经验。然而,细胞因子治疗急性辐射损伤的用药对象、剂量、时机及合理的配伍应用等问题尚未解决,疗效并非尽善尽美,短效、无效者绝非罕见,甚至出现滥用现象。本文作者实验治疗研究结果表明,造血因子对急性辐射损伤有明显的治疗作用, 但宜尽早给药,极期给药的疗效不如早期给药好。使用细胞因子治疗的时间应有一个时限,而不是越长越好。单纯应用rhTPO不能促进粒系造血恢复。单纯应用rhG-CSF不能促进巨核系造血的恢复,未见增加肿瘤细胞染色体畸变率,重复给药和二次照射的结果未促进造血干/祖细胞库耗竭。rhGM-CSF促进粒细胞恢复的作用不如 rhG-CSF。rhIL-11可促进辐射损伤三系造血的恢复,以巨核系的恢复更为明显。在骨髓型急性放射病的治疗中联合使用造血细胞因子,rhG-CSF+rhIL-11不失为较理想的方案,可作为骨髓型急性放射病患者临床治疗的首选药物。

关键词：细胞因子造血细胞生长因子辐射损伤

PBL+循证护理教学法在急诊科护生批判性思维能力培养中的应用

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昆明医科大学学报 2022年第8期43卷 166-172页

作者：王赟王慧黄海潇李茹婴沙瑞芹田莹昆明医科大学第一附属医院护理部云南昆明650032

目的探讨PBL+循证护理教学法在急诊科实习护生批判性思维能力培养中的应用效果。方法选取2020年12月至2021年12月在云南省某三甲医院急诊科实习的100名护生为研究对象,按入科先后编号后,奇数组为对照组,偶数组为干预组,每组50名。对照... 详细信息

目的探讨PBL+循证护理教学法在急诊科实习护生批判性思维能力培养中的应用效果。方法选取2020年12月至2021年12月在云南省某三甲医院急诊科实习的100名护生为研究对象,按入科先后编号后,奇数组为对照组,偶数组为干预组,每组50名。对照组采用传统教学,干预组采用PBL+循证护理教学法,该教学法由“循证护理理论授课→PBL小组讨论→护理查房成果汇报→教师指导”4个逐渐递进的环节组成。干预后采用批判性思维能力测量表、教学效果自评问卷及理论考试进行评价。结果干预后干预组实习护生批判性思维能力评分、教学效果自评问卷得分、理论成绩得分均优于对照组(P<0.05)。结论在急诊科临床带教中,结合科室特色采用PBL+循证护理教学法有助于提升实习护生的批判性思维能力和理论成绩,可提高教学效果评价。

关键词：循证护理教育 PBL教学法护理教育

甲酰化肽样受体介导脂多糖诱导的白细胞趋化反应及虎杖甙的调节作用研究

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中国病理生理杂志 2006年第1期22卷 131-134页

作者：黄海潇赵清金春华北京军事医学科学院放射医学研究所1室北京100850 南方医科大学休克微循环重点实验室南方医科大学实验管理中心广东广州510515

目的:初步研究虎杖甙(PD)对脂多糖刺激下白细胞趋化活性调节的机制。方法:用趋化小室方法测定虎杖甙对LPS刺激下多形核白细胞(PMN)趋化活性及转染了甲酰化肽样受体(FPRL1)基因的293细胞(FPRL1/293)趋化活性的影响。结果:LPS及LPS刺激的... 详细信息

目的:初步研究虎杖甙(PD)对脂多糖刺激下白细胞趋化活性调节的机制。方法:用趋化小室方法测定虎杖甙对LPS刺激下多形核白细胞(PMN)趋化活性及转染了甲酰化肽样受体(FPRL1)基因的293细胞(FPRL1/293)趋化活性的影响。结果:LPS及LPS刺激的PMN上清可增强多形核白细胞的趋化反应;同样LPS刺激下转染了甲酰化肽样受体基因的293细胞的趋化性显著升高。而PD可下调LPS刺激引起的PMN和FPRL1/293细胞的趋化性升高。结论:甲酰化肽样受体FPRL1可能参与介导脂多糖引起的白细胞趋化反应,PD可能通过抑制白细胞趋化因子的分泌和下调甲酰化肽样受体活性来调节细胞的趋化性。

关键词：虎杖甙趋化作用脂多糖类中性白细胞

重组人粒细胞集落刺激因子和重组人白介素11对3.5Gy照射狗的治疗作用

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军事医学科学院院刊 2007年第4期31卷 394-396页

作者：邢爽黄海潇熊国林谢玲李明董波宋良文罗庆良军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

急性放射病的主要病理变化是骨髓造血功能受到严重抑制,外周血白细胞和血小板极度缺乏,由此而引起的感染和出血是导致患者死亡的主要原因.重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）和重组人白细胞介素11（rhIL-11）能刺激骨髓等造血器官生... 详细信息

急性放射病的主要病理变化是骨髓造血功能受到严重抑制,外周血白细胞和血小板极度缺乏,由此而引起的感染和出血是导致患者死亡的主要原因.重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）和重组人白细胞介素11（rhIL-11）能刺激骨髓等造血器官生成白细胞和血小板，为了观察rhIL-11和rhG-CSF联合给药对重度骨髓型急性放射病的治疗作用，给临床同类患者的救治提供实验依据，我们进行了本实验。

关键词：放射损伤造血因子急性放射病重组人白介素11 重组人粒细胞集落刺激因子造血干细胞

rhIL-11+rhG-CSF对中子急性放射病狗的治疗作用

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解放军医学杂志 2005年第3期30卷 204-207页

作者：王欣茹黄海潇熊国林谢玲余祖胤王宝勤罗庆良二炮总医院检验科北京100088 军事医学科学院放射医学研究所

目的　探讨rhIL-11与rhG-CSF联用对中子急性放射病(ARS)的治疗作用。方法　18只雄性成年比格狗,随机分为照射对照组、对症治疗组和两因子+对症联合治疗组。所有动物均接受90%中子照射,吸收剂量为2.0Gy。联合治疗组动物于照射后即刻开... 详细信息

目的　探讨rhIL-11与rhG-CSF联用对中子急性放射病(ARS)的治疗作用。方法　18只雄性成年比格狗,随机分为照射对照组、对症治疗组和两因子+对症联合治疗组。所有动物均接受90%中子照射,吸收剂量为2.0Gy。联合治疗组动物于照射后即刻开始皮下注射rhG-CSF10μg/(kg·d)和rhIL-1150μg/(kg·d),给药时间分别为14天和21天,观察照射后动物外周血象及骨髓有核细胞形成CFU-GM能力的变化。结果　对症治疗组和联合治疗组动物全部存活,而照射对照组动物30天存活率为57.1%。照射后联合治疗组各检测点外周血白细胞数及恢复期血小板和红细胞数均明显高于照射对照组及对症治疗组。照射后1天,联合治疗组骨髓CFU-GM数量是两个对照组的6倍(P<0.01),33天分别是照射对照组、对症治疗组的1.75和1.46倍(P<0.01)。结论　 rhIL-11与rhG-CSF联合给药可以升高2.0Gy裂变中子照射狗的外周血白细胞、血小板数的最低值,缩短白细胞最低值持续的时间, 加速骨髓造血功能的恢复,对2.0Gy中子照射狗有明显的治疗作用。

关键词：白细胞介素11 粒细胞集落刺激因子,重组辐射损伤,实验性中子