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拓展年龄相关性黄斑变性发病机制的研究思路

中华眼科杂志 2012年第10期48卷 865-866页

作者：黎晓新黄旅珍北京大学人民医院眼科教育部视觉损伤与修复重点实验室 100044

在发达国家，年龄相关性黄斑变性（AMD）是50岁以上人群不可逆性严重视力下降的首要原因，是65岁以上人群主要的致盲眼病。随着我国经济水平的提高，进入老龄化社会的加速，AMD患者不断增多，日益受到全社会的关注。AMD的病因学和发病... 详细信息

在发达国家，年龄相关性黄斑变性（AMD）是50岁以上人群不可逆性严重视力下降的首要原因，是65岁以上人群主要的致盲眼病。随着我国经济水平的提高，进入老龄化社会的加速，AMD患者不断增多，日益受到全社会的关注。AMD的病因学和发病机制至今未明，是全世界眼科研究的热点。目前多数研究者认为环境与基因、氧化损伤、炎症免疫、血管生成与抑制生成因子失调等因素参与AMD的发生与发展。如何从纷繁复杂的相关因素中，探索我国人群AMD的发病机制是值得国内研究者认真关注的重要问题。笔者认为应善于从学术争议中寻找突破点，以拓展AMD发病机制的研究思路，为临床治疗AMD提供理论依据。（中华眼科杂志，2012，48：865—866）

关键词：黄斑变性哮喘 TOLL样受体3

Leber遗传性视神经病变的临床特征及线粒体突变位点分析

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中华实验眼科杂志 2016年第10期34卷 920-924页

作者：黄旅珍李天琦王斌黎晓新北京大学人民医院眼科视觉损伤与修复教育部重点实验室视网膜脉络膜疾病诊治北京市重点实验室 100044

背景 Leber遗传性视神经病变（LHON）是一种线粒体脱氧核糖核酸（mtDNA）变异而导致的母系遗传疾病,其常见的突变位点有m.3460 G＞A,m.11778 G＞A和m.14484 T＞C,其他突变类型较为少见,而了解患者的mtDNA突变位点对于患者的治疗有重要... 详细信息

背景 Leber遗传性视神经病变（LHON）是一种线粒体脱氧核糖核酸（mtDNA）变异而导致的母系遗传疾病,其常见的突变位点有m.3460 G＞A,m.11778 G＞A和m.14484 T＞C,其他突变类型较为少见,而了解患者的mtDNA突变位点对于患者的治疗有重要的临床意义. 目的结合LHON患者的发病特点检测和分析其线粒体突变位点.方法纳入2010-2014年在北京大学人民医院确诊的无亲缘关系的12例LHON患者,对患者的双眼进行视力、视野、眼前节、视觉诱发电位、眼底等眼科检查.采集患者肘静脉血4 ml,采用PCR法对患者的mtDNA进行扩增并测序,对患者携带的3个常见突变位点和其他突变位点进行分析.结果 12例患者中男11例,女1例;双眼视力同时下降者7例,左眼先发病者3例,右眼先发病者1例.患者左右眼间视力损害程度比较无明显差异.患者近视力为看不到J7者18眼,近视力为J7者3眼,近视力为J6者2眼,近视力为J2者1眼.患者远视力为手动/眼前者1眼,光感者1眼,0.01 ～0.1者18眼,0.12～ 0.3者2眼.患者鼻侧视野严重缺损者7眼,颞侧视野严重缺损者3眼,中央视野严重缺损者8眼.12例患者的mtDNA测序发现,m.3460 G＞A突变者3例,m.11778 G＞A突变者5例,m.14484 T＞C突变者2例,2例患者无上述3个常见位点突变,分别为MT-ND1和MT-ND4L基因的序列突变,其突变位点分别为m.3497 C＞T和m.10663 T＞C. 结论 LHON患者中以男性多见,患者双眼间视力下降的程度不同,多数患眼近视力损害更为严重.视野损害以中心区较为多见.本研究中发现了中国人群中LHON患者的少见线粒体基因m.3497C＞T和m.10663 T＞C位点突变.

关键词：线粒体疾病 DNA突变分析基因学遗传性视神经萎缩聚合酶链反应 Leber遗传性视神经病变视力

家族性渗出性玻璃体视网膜病变临床表型的相关因素分析

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中华眼底病杂志 2023年第1期39卷 11-16页

作者：姚昱欧闫慧超黄旅珍尹虹北京大学人民医院眼科、眼病与视光医学研究所、视网膜脉络膜疾病诊治研究北京市重点实验室北京大学医学部眼视光学院北京100044

目的观察并分析家族性渗出性玻璃体视网膜病变(FEVR)不同临床表型的相关因素。方法回顾性系列病例研究。2012年1月至2021年12月于北京大学人民医院眼科检查确诊的FEVR患者42例84只眼以及家系中一级亲属68名纳入研究。患者来自42个无血... 详细信息

目的观察并分析家族性渗出性玻璃体视网膜病变(FEVR)不同临床表型的相关因素。方法回顾性系列病例研究。2012年1月至2021年12月于北京大学人民医院眼科检查确诊的FEVR患者42例84只眼以及家系中一级亲属68名纳入研究。患者来自42个无血缘关系家庭。患者中,男性31例,女性11例;首诊年龄(16.6±33.7)个月。外院转诊21例,均为眼底筛查发现病变;首诊本院21例。早产儿、足月儿分别为4、38例。有FEVR阳性家族史2例。均为FEVR分期1~5期。年龄3个月的23例中,至少1只眼病变分期为3期以上16例(69.6%,16/23)。行眼底检查的68名一级亲属中,眼底FEVR样改变22名(32.4%,22/68)。行基因检测的26个家系中,检出FEVR相关基因的16种变异13个家系(50%,13/26),其中LRP5基因突变10种,最常见。单基因突变10个家系,其中LRP5、FZD4、CTNNB1基因分别为6、2、2个家系;LRP5基因复合杂合突变1个家系;LRP5基因和NDP双基因突变1个家系;LRP5和TSPAN12双基因突变1个家系。携带致病性FEVR基因13例先证者中,双眼病变程度一致者6例,不一致者7例,基因突变和临床表型之间未见明显相关性。结论FEVR临床表型和基因型具有高度异质性;除首诊年龄外,未发现明确影响FEVR临床表现的因素。

关键词：家族性渗出性玻璃体视网膜病变临床表型基因

脂褐素成分A2E诱导人视网膜色素上皮细胞自噬及损伤的研究

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眼科新进展 2021年第7期41卷 608-614页

作者：张晶晶陈云珍黄旅珍陈莉首都医科大学大兴教学医院眼科北京市102600 北京大学人民医院眼科北京市100044 首都医科大学附属北京朝阳医院眼科北京市100020

目的探讨N-亚视黄基-N-视黄基-乙醇胺(A2E)能否诱导人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)的自噬及损伤反应,并从自噬的角度探索其与年龄相关性黄斑变性(AMD)发病相关的分子机制。方法CCK-8法筛选A2E作用于ARPE-19细胞的最佳浓度用于后续... 详细信息

目的探讨N-亚视黄基-N-视黄基-乙醇胺(A2E)能否诱导人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)的自噬及损伤反应,并从自噬的角度探索其与年龄相关性黄斑变性(AMD)发病相关的分子机制。方法CCK-8法筛选A2E作用于ARPE-19细胞的最佳浓度用于后续实验。采用多重细胞因子检测技术检测A2E作用于ARPE-19细胞后对细胞间黏附分子(ICAM)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、IL-10、促血管生成素-2(Ang-2)、胎盘生长因子(PIGF)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、转化生长因子-β(TGF-β)以及血管内皮生长因子A(VEGFA)表达的影响,透射电子显微镜观察ARPE-19细胞超微结构的变化,免疫荧光标记检测细胞内自噬相关蛋白LC3的表达变化,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1和p62的表达变化。结果依据CCK-8法检测结果,选择20μmol·L^(-1)的A2E作用于ARPE-19细胞用于后续实验。20μmol·L^(-1)的A2E作用于ARPE-19细胞后,细胞因子ICAM、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、Ang-2、IGF-1、TGF-β的表达水平自6 h起均有所升高,PIGF和VEGFA的表达水平在A2E作用12 h后也明显升高,与未给予A2E处理的对照相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。透射电子显微镜下可见,20μmol·L^(-1)的A2E作用于ARPE-19细胞1 h后细胞质内可见碗状、尚未收口的双层膜结构的“吞噬泡”,作用3 h、6 h、12 h时出现自噬体结构以及自噬溶酶体结构,自噬囊泡在A2E作用24 h时开始出现内容物减少,体积逐渐缩小。荧光显微镜下可见,与未给予A2E处理的对照相比,20μmol·L^(-1)的A2E作用于ARPE-19细胞6 h起即可见细胞质内LC3荧光呈现点状聚集,至12 h时荧光斑点数量达到最多、颗粒也最大、差异最明显,24 h时绿色荧光斑点数量开始下降,荧光强度也较前减弱。Western blot检测结果显示,与未给予A2E处理的对照相比,ARPE-19细胞中Beclin-1蛋白的表达在A2E作用1 h、3 h、6 h、12 h及24 h时均显著升高,p62蛋白的表达在A2E作用1 h、3 h、6 h、12 h及24 h时均下降(均为P<0.05)。结论A2E能够刺激ARPE-19细胞分泌多种AMD相关炎症因子和新生血管因子,同时也能激活自噬潮,这为进一步研究自噬在AMD发病中扮演的角色提供了新的思路。

关键词： N-亚视黄基-N-视黄基-乙醇胺(A2E) 视网膜色素上皮细胞自噬老年性黄斑变性

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MBP在春季角结膜炎角膜损害中的作用研究

MBP在春季角结膜炎角膜损害中的作用研究

自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对A2E诱导视网膜色素上皮细胞自噬的调节以及相关细胞因子表达的影响

第三届全球华人眼科学术大会暨中华医学会第十一届全国眼科学术大会

作者：黄旅珍复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科

目的:研究MBP(eosinophil major basic protein,嗜酸性粒细胞主要碱性蛋白)、Eotaxin(嗜酸性粒细胞活化趋化因子)、病程、年龄和乳头大小与VKC角膜损害并发症之间的关系,探讨MBP在VKC角膜损害发生中的作用。方法: 对符合入选标准的VKC...

目的:研究MBP(eosinophil major basic protein,嗜酸性粒细胞主要碱性蛋白)、Eotaxin(嗜酸性粒细胞活化趋化因子)、病程、年龄和乳头大小与VKC角膜损害并发症之间的关系,探讨MBP在VKC角膜损害发生中的作用。方法: 对符合入选标准的VKC患者进行裂隙灯拍照,由两人分别对乳头大小和角膜损害程度进行等级评分。取VKC患者乳

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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眼科新进展 2022年第3期42卷 179-183页

作者：陈莉张晶晶陈云珍黄旅珍首都医科大学附属北京朝阳医院眼科北京市100020 首都医科大学大兴教学医院眼科北京市102600 北京大学人民医院北京市100044

目的探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺(A2E)诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞自噬的调节以及相关细胞因子表达的影响。方法取人RPE细胞(ARPE-19细胞系)进行培养。将细胞分为4组。对照组:仅使用正常DMEM-F12完... 详细信息

目的探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺(A2E)诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞自噬的调节以及相关细胞因子表达的影响。方法取人RPE细胞(ARPE-19细胞系)进行培养。将细胞分为4组。对照组:仅使用正常DMEM-F12完全培养基孵育ARPE-19细胞;A2E组:将ARPE-19细胞置于含20μmol·L^(-1) A2E的DMEM-F12完全培养基中孵育12 h;3-MA组:使用含10 mmol·L^(-1)3-MA(美国Sigma-Aldrich公司)的DMEM-F12完全培养基预处理细胞1 h后,再用正常DMEM-F12完全培养基孵育细胞12 h;3-MA联合A2E组:先使用10 mmol·L^(-1)3-MA预处理细胞1 h,再将细胞放入含20μmol·L^(-1) A2E的DMEM-F12完全培养基孵育12 h。使用CCK\|8法检测各组ARPE-19细胞增殖情况,透射电镜观察各组ARPE-19细胞超微结构,Western blot法检测各组ARPE-19细胞Beclin-1和P62自噬相关蛋白表达,免疫荧光染色法检测各组ARPE-19细胞自噬标志物LC3蛋白的表达,使用Procarta细胞因子分析试剂盒检测各组细胞培养上清液10种细胞因子表达情况,10种细胞因子包括:细胞间黏附分子、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、IL^(-1)0、血管生成素2、血小板衍生生长因子、胰岛素样生长因子、转化生长因子和VEGFA。结果与A2E组相比,3-MA联合A2E组细胞生存率下降了27.16%(P<0.01)。与A2E组相比,3-MA联合A2E组细胞培养上清液10种细胞因子含量均明显升高(均为P<0.01)。与对照组相比,3-MA组ARPE-19细胞超微结构无明显变化,而A2E组ARPE-19细胞胞浆内出现大量自噬泡;3-MA联合A2E组ARPE-19细胞自噬泡数量较A2E组明显减少。3-MA联合A2E组ARPE-19细胞胞浆内可见荧光斑点亮度较A2E组减弱,绿色荧光斑点数量也明显减少。与对照组相比,A2E组ARPE-19细胞Beclin-l蛋白相对表达量显著升高(P<0.001),P62蛋白的相对表达量显著降低(P<0.001)。与A2E组相比,3-MA联合A2E组ARPE-19细胞中Beclin-l蛋白相对表达量显著降低(P<0.01,),而P62蛋白相对表达量显著升高(P<0.001)。结论3-MA联合A2E作用下,ARPE-19细胞中炎症因子和血管生长因子的表达显著升高,自噬溶酶体数量及自噬蛋白的表达降低,自噬在年龄相关性黄斑变性的发生和发展中具有重要的调节作用。

关键词： N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺 3-甲基腺嘌呤视网膜色素上皮细胞自噬年龄相关性黄斑变性

人脐带间充质干细胞源外泌体对缺氧条件下RPE细胞生物学特性的影响

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中华眼科杂志 2019年第12期55卷 933-941页

作者：徐宁达黄旅珍朱莉唐辛李岩赵明威北京大学人民医院眼眼科眼病与视光医学研究所视网膜脉络膜疾病诊治研究北京市重点实验室北京大学医学部眼视光学院100044

目的探讨人脐带间充质干细胞(HUMSC)外泌体对缺氧条件下人视网膜色素上皮(RPE)细胞的增殖、凋亡及迁移生物学特性的影响。方法实验研究。组织块贴壁培养法原代培养HUMSC,扩增传代至第4代,流式细胞仪鉴定其细胞表面标志物;收集培养第4代H... 详细信息

目的探讨人脐带间充质干细胞(HUMSC)外泌体对缺氧条件下人视网膜色素上皮(RPE)细胞的增殖、凋亡及迁移生物学特性的影响。方法实验研究。组织块贴壁培养法原代培养HUMSC,扩增传代至第4代,流式细胞仪鉴定其细胞表面标志物;收集培养第4代HUMSC无血清培养基,分离提取外泌体,在电镜下观察其超微结构并用免疫印迹法鉴定其CD63、CD9蛋白表达;体外培养RPE细胞用噻唑蓝(MTT)法检测缺氧0、1、2、3、4、5 d的细胞增殖情况;用细胞划痕实验检测缺氧0、24、48、72 h的细胞迁移情况,并结合细胞凋亡实验确定缺氧时间。处于生长旺盛期的RPE细胞分为5个组,分别为对照组、缺氧组及不同剂量外泌体预处理组(100、200、300μg/ml),培育48 h后采用MTT法观察各组细胞的增殖能力,Annexin V/碘化丙啶(PI)双染流式细胞术观察细胞凋亡,细胞划痕实验中观察各组细胞的迁移功能。结果流式细胞仪检测第4代HUMSC的表面标志CD105、CD73、CD90呈强阳性表达,体外诱导成脂和成骨细胞,提示分离培养的HUMSC具有MSC特异性表型。分离的外泌体经扫描电镜观察可见大小不一的球状膜性结构,且免疫印迹法结果提示CD63、CD9呈阳性表达。体外培养RPE在缺氧0、1、2、3、4、5 d用MTT法检测细胞增殖结果:与对照组比较,吸光度(A)值差异均有统计学意义,前2 d随缺氧时间延长,RPE细胞的增殖能力逐渐增强(A值为1.862±0.135和2.278±0.244);3 d后RPE细胞的增殖能力逐渐减弱(A值为1.419±0.124和1.599±0.156)。细胞划痕实验结果:随着缺氧时间的延长,RPE细胞迁移距离逐渐增加,至72 h全部长满且无缝隙。RPE细胞凋亡实验检测结果:缺氧前2 d,随缺氧时间延长细胞凋亡数量有差别[3.628%±1.348%、20.123%±1.183%],3 d时细胞凋亡数量较多(42.290%±3.217%),与2 d比较差异有统计学意义。缺氧48 h后MTT法检测细胞增殖结果:与对照组(1.870±0.499)比较,缺氧组(2.616±0.307)细胞增殖数显著增加(t=-3.116,P0.05)。采用Annexin V/PI双染流式细胞仪观察细胞凋亡结果:与对照组(1.180%±0.689%)比较,缺氧组细胞凋亡数(19.273%±1.194%)显著增加(t=-32.141,P0.05)。细胞划痕实验结果:与对照组比较,缺氧组细胞迁移距离显著增加;与缺氧组比较,外泌体预处理组细胞迁移距离减小(t=11.766,10.770,11.311;P0.05)。结论HUMSC外泌体可有效抑制缺氧状态下人RPE细胞增殖、凋亡及迁移,为寻找缺氧导致RPE相关疾病的研究和治疗提供理论依据。

关键词：视网膜色素上皮细胞低氧间充质干细胞脐带外泌体

基因捕获技术在视网膜母细胞瘤患者RB1基因突变筛选的应用

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中华眼科杂志 2017年第6期53卷 455-459页

作者：孟庆娱黄旅珍王斌黎晓新梁建宏北京大学人民医院眼科中心视觉损失与修复教育部重点实验室视网膜脉络膜诊治研究北京市重点实验室 100044

目的探讨基因捕获技术在视网膜母细胞瘤（RB）患者RB1基因突变筛选中的应用。方法实验研究。2010年6月至2014年6月采集北京大学人民医院经病理学检查确诊的17例RB患者的外周血。通过设计RB1基因外显子及侧翼序列的靶向捕获探针，对患者... 详细信息

目的探讨基因捕获技术在视网膜母细胞瘤（RB）患者RB1基因突变筛选中的应用。方法实验研究。2010年6月至2014年6月采集北京大学人民医院经病理学检查确诊的17例RB患者的外周血。通过设计RB1基因外显子及侧翼序列的靶向捕获探针，对患者外周血DNA进行测序分析，并采用Sanger法对候选变异进行验证。同时收集患者父母血样进行比较。结果在17例RB患者中，男性12例，女性5例；年龄0．5～23．0岁，平均（3．2±5．2）岁；双眼患者6例，单眼患者11例。4例患者存在RB1基因突变，其中双眼受累2例，单眼受累2例。2例新发现基因突变，包括RB1基因第15外显子c．1408A〉T错义突变，造成异亮氨酸突变为苯丙氨酸和RB1第19外显子0．1960G〉C错义突变，造成缬氨酸突变为亮氨酸。该2例患儿父母均未检测到基因突变。另外2例存在已报道的基因突变位点。其中1例患者的家族史阳性，其父亲为单眼RB患者，患者及其父亲均在第10外显子发生c．1030C〉T无义突变。1例患者发生了第3外显子c．371．372delTA的缺失突变，该父母未检测到基因突变。结论应用基因捕获技术联合Sanger测序可有效筛选RB患者RBI基因突变，发现了2例RB患者新的RB1生殖细胞突变，补充了RB1基因突变谱。

关键词：视网膜母细胞瘤基因视网膜母细胞瘤视网膜母细胞瘤蛋白质突变序列分析 DNA 外显子

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春季角结膜炎中角膜损害的研究进展

中国眼耳鼻喉科杂志 2006年第4期6卷 262-263页

作者：黄旅珍陈荣家复旦大学附属眼耳鼻喉科医院限科上海200031

春季角结膜炎又名春季卡他,是一种季节性反复发作的变态反应性角结膜炎。多见于儿童和青少年,常侵犯双眼,病变发展累及角膜,可引起视力受损。其发病机理复杂,涉及多种免疫机制。

关键词：春季角结膜炎角膜损害变态反应性反复发作视力受损发病机理免疫机制季节性青少年