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牛精原干细胞体外分化潜能的分析

中国细胞生物学学报 2014年第11期36卷 1526-1531页

作者：罗奋华萨初拉黄军就吴应积内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室呼和浩特010070 中山大学生命科学学院有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学附属第一医院广东省生殖医学重点实验室广州510275

家畜精原干细胞操作的核心技术是精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)的长期培养。至今家畜精原干细胞的长期培养方法还没有完善。其中的一个原因是缺乏简便有效的家畜精原干细胞生物活性鉴定手段。该研究的目的是建立一种牛精... 详细信息

家畜精原干细胞操作的核心技术是精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)的长期培养。至今家畜精原干细胞的长期培养方法还没有完善。其中的一个原因是缺乏简便有效的家畜精原干细胞生物活性鉴定手段。该研究的目的是建立一种牛精原干细胞生理潜能的体外分析方法,用于体外培养的牛精原干细胞的生物活性鉴定。首先培养牛精原干细胞,进而用干细胞因子(stem cell factor,SCF)对体外长期培养的牛精原干细胞进行诱导分化。在诱导分化过程中对细胞进行显微观察,并且用免疫荧光染色法鉴定分化的细胞。观察结果显示,经过诱导培养8 d后,牛精原干细胞形态发生了明显改变;细胞的运动行为显示出精母细胞特有的特征。免疫荧光染色结果显示,分化的细胞表达精母细胞的标记基因Scp3。上述结果例证了体外培养的牛精原干细胞具有分化为精母细胞的潜能。该研究建立了牛SSCs体外诱导分化的分析方法,用于鉴定体外培养的牛SSCs的生理潜能。但是体外诱导培养条件不能满足牛SSCs减数分裂的全部要求,导致出现一些不完全符合精母细胞特征的现象。诱导分化培养液尚需改进。

关键词：牛精原干细胞体外分化干细胞因子

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内含肽介导的Split-Cre系统的构建

生物工程学报 2024年

作者：敖艺菲张琪陈昱僖黄军就文锦坤广东药科大学生命科学与生物制药学院广东药科大学基础医学院中山大学生命科学学院

Split-Cre系统是指被拆分为无活性的N端和C端两个片段的Cre酶在一定条件下重组为有酶活性的全长Cre的基因工程工具。该系统常结合LoxP元件使用，近年来在多基因操纵、多基因活性标记以及神经环路示踪等方面有着重要的应用。为了开发更... 详细信息

Split-Cre系统是指被拆分为无活性的N端和C端两个片段的Cre酶在一定条件下重组为有酶活性的全长Cre的基因工程工具。该系统常结合LoxP元件使用，近年来在多基因操纵、多基因活性标记以及神经环路示踪等方面有着重要的应用。为了开发更高效的Split-Cre系统，本研究利用海洋红嗜热盐菌(Rhodothermus marinus， Rma)内含肽对Cre进行拆分，在“红绿灯”报告细胞系中筛选出了能够高效介导Cre酶重组的S102拆分位点，并且通过双腺相关病毒(adeno-associated virus， AAV)将S102 Split-Cre系统递送至小鼠体内，证明了Rma内含肽介导的S102 Split-Cre系统在小鼠体内同样具有高效的活性。该系统为Split-Cre的基础研究和应用研究提供了可靠的参考。

关键词： Cre酶 Split-Cre系统 Rma内含肽断裂内含肽

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人类胚胎单碱基编辑治疗遗传疾病的研究

生命科学 2018年第9期30卷 926-931页

作者：孙宏伟梁普平黄军就中山大学生命科学学院基因功能与调控教育部重点实验室广州510275 中山大学生命科学学院和广州医科大学第三附属医院广东省生殖医学重点实验室广州510275 中山大学眼科中心眼科国家重点实验室广州510060

基因编辑技术是当今生物学研究领域最为重要的颠覆性技术之一,以CRISPR/Cas9系统为核心的基因编辑工具被广泛应用于包括人类体细胞、生殖细胞编辑相关的医学研究领域。虽然CRISPR/Cas9系统可以高效编辑靶基因,但其精准编辑能力依赖于效... 详细信息

基因编辑技术是当今生物学研究领域最为重要的颠覆性技术之一,以CRISPR/Cas9系统为核心的基因编辑工具被广泛应用于包括人类体细胞、生殖细胞编辑相关的医学研究领域。虽然CRISPR/Cas9系统可以高效编辑靶基因,但其精准编辑能力依赖于效率极低的同源重组方式,这极大限制了其定点编辑的能力与应用范围,所以寻找一种能高效引入点突变的新型基因编辑工具具有重大的应用价值。以CRISPR/Cas9系统为基础的单碱基编辑系统可以在基因组靶位点实现精准、高效的C/G和T/A碱基间的转换,其编辑能力已经在动植物、人体细胞以及人类胚胎中得到证实。利用单碱基编辑技术,有望对人类超过70%的相关遗传性致病位点进行修复。现就人类胚胎单碱基编辑治疗遗传疾病的最新研究进展进行综述和展望。

关键词：人类胚胎 CRISPR/Cas9 单碱基编辑遗传疾病

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中山大学基因编辑学科发展

中国科学：生命科学 2024年第9期54卷 1534-1548页

作者：黎镇祥周依潼黄军就李剑峰中山大学生命科学学院广州510275

DNA序列变异是决定许多人类疾病发生发展和农作物优良性状形成的遗传基础.基因编辑是指利用位点特异性核酸酶(site-specific nuclease,SSN)在基因组特定位点引入序列变异,从而实现基因功能操控、人类疾病治疗和作物分子设计育种的目的.... 详细信息

DNA序列变异是决定许多人类疾病发生发展和农作物优良性状形成的遗传基础.基因编辑是指利用位点特异性核酸酶(site-specific nuclease,SSN)在基因组特定位点引入序列变异,从而实现基因功能操控、人类疾病治疗和作物分子设计育种的目的.常用的SSN包括锌指蛋白核酸酶(zinc-finger nuclease,ZFN)、转录激活因子样效应蛋白核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALEN)和CRISPR/Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated)技术[1~4].

关键词：基因编辑分子设计育种锌指蛋白人类疾病遗传基础

小学期实验技能课整合毕业设计促进生命科学本科培养的改革初探

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高校生物学教学研究（电子版） 2017年第1期37卷 49-53页

作者：黄燕黄军就中山大学生命科学学院广州510006

生命科学是实践性学科。为了提高本科培养质量,促进科研发展,以适应建设世界一流大学的需求,本改革以小学期实验技能课为起点,挖掘一批对科研感兴趣的本科人才,进一步整合毕业设计,使本科生提早进入生命科学相关领域的文献阅读、实验计... 详细信息

生命科学是实践性学科。为了提高本科培养质量,促进科研发展,以适应建设世界一流大学的需求,本改革以小学期实验技能课为起点,挖掘一批对科研感兴趣的本科人才,进一步整合毕业设计,使本科生提早进入生命科学相关领域的文献阅读、实验计划和项目实施中,促进本科人才的系统培养。同时科研项目得到加速孵化,实现人才激励和教学科研双赢。经笔者4年实践,改革取得初步成效,为教学发展和人才培养提供了参考。

关键词：小学期实验技能课毕业设计科研人才激励

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推开人类胚胎基因研究的神秘大门

生命科学 2016年第4期28卷 420-426页

作者：梁普平黄军就中山大学生命科学学院基因工程教育部重点实验室和广东省生殖医学重点实验室广州510006

人类基因组测序成功后,人们翻开了隐藏自身秘密的蓝图,而如何正确地解读和利用该蓝图成为全球科学家关注的焦点。基因编辑技术的飞跃式发展为基因组功能研究提供了关键性工具。目前常用的基因编辑技术包括ZFN(zinc finger nuclease)、TA... 详细信息

人类基因组测序成功后,人们翻开了隐藏自身秘密的蓝图,而如何正确地解读和利用该蓝图成为全球科学家关注的焦点。基因编辑技术的飞跃式发展为基因组功能研究提供了关键性工具。目前常用的基因编辑技术包括ZFN(zinc finger nuclease)、TALEN(transcription activator-like effector nuclease)和CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated 9)这三种系统,而CRISPR/Cas9系统以其简单、高效和低成本等特点,在极短的时间内被广泛地应用于从细菌到人等各个物种中,为深入认识基因功能和治疗遗传性疾病带来了曙光。目前,人们已经利用CRISPR/Cas9系统成功地在动物受精卵中进行基因编辑,从而揭示动物胚胎发育的调控机制。此外,通过在受精卵中对遗传疾病的突变位点进行编辑,人们已经获得基因校正的正常的动物。大量的研究结果显示,人类的胚胎发育机制有别于模式动物;此外,还有上千种单基因突变导致的遗传疾病在成年后无法进行有效的治疗。为了探讨CRISPR/Cas9系统是否能应用于人类早期胚胎发育调控机制的研究及遗传性疾病突变的有效修复,通过尝试利用生殖临床中自然产生的、因无法正常发育而被废弃的三原核受精卵作为模型,研究了CRISPR/Cas9系统在人类早期胚胎中对中国南方常见的地中海贫血突变位点的编辑效率以及存在的技术风险。研究结果显示CRISPR/Cas9系统可以在人三原核受精卵中编辑突变位点,但目前的技术还存在脱靶效应、胚胎镶嵌性和同源重组效率低等问题。该研究工作推动了国际人类基因编辑峰会的召开,最终,科学界达成的共识认为在人类体细胞、胚胎及生殖细胞中进行基因编辑技术的基础研究是极其重要的。针对这一全球关注的重大科学研究事件进行回顾与展望。

关键词：人类胚胎基因编辑 CRISPR/Cas9 三原核受精卵

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苯并芘扰乱小鼠着床前胚胎发育

苯并芘扰乱小鼠着床前胚胎发育

中国毒理学会毒性病理学专业委员会第一届会员代表大会

作者：詹少泉张曦亚曹善柏黄军就中山大学生命科学大学院和附属第一医院广东省生殖医学重点实验室广州医科大学附属第三医院广东省生殖医学重点实验室

＜正＞目的:吸烟女性卵泡液中含有大量的毒性物质,包括苯并芘（BaP）。我们通过将小鼠受精卵通过体外培养暴露在吸烟女性卵泡液中生理浓度下的BaP,研究BaP对早期着床前胚胎发育的影响及其机制。方法:CD1小鼠受精卵在添加有5nM或50hM Ba...

＜正＞目的:吸烟女性卵泡液中含有大量的毒性物质,包括苯并芘（BaP）。我们通过将小鼠受精卵通过体外培养暴露在吸烟女性卵泡液中生理浓度下的BaP,研究BaP对早期着床前胚胎发育的影响及其机制。方法:CD1小鼠受精卵在添加有5nM或50hM BaP的培养液中进行体外培养（DMSO处理组作为对照）,然后检测并比较胚胎的发育效率和胚胎质量;此外,本文还利用来源于小鼠囊胚内

关键词：

来源： cnki会议评论

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单碱基基因编辑系统的研究进展

世界科技研究与发展 2017年第6期39卷 457-462页

作者：刘佳慧梁普平时光黄军就中山大学生命科学学院基因工程教育部重点实验室广州510275 中山大学生命科学学院和广州医科大学第三附属医院广东省生殖医学重点实验室广州510006

基因编辑技术是近年来取得突破性进展的颠覆性技术之一。CRISPR/Cas9基因编辑系统简便、高效,被广泛应用于基因功能研究和利用。尽管CRISPR/Cas9可以高效靶向目的基因,但其定点修饰依赖于效率低下的同源重组机制,因此精准编辑基因的能... 详细信息

基因编辑技术是近年来取得突破性进展的颠覆性技术之一。CRISPR/Cas9基因编辑系统简便、高效,被广泛应用于基因功能研究和利用。尽管CRISPR/Cas9可以高效靶向目的基因,但其定点修饰依赖于效率低下的同源重组机制,因此精准编辑基因的能力有待提高。单碱基编辑技术通过将Cas9切口酶或无核酸酶活性的Cas9与胞嘧啶脱氨酶形成融合蛋白,并通过sgRNA(单链向导RNA)将融合蛋白靶向靶位点,在不切割双链DNA的情况下对靶基因位点的单个碱基进行胞嘧啶C→胸腺嘧啶T或鸟嘌呤G→腺嘌呤A的精准编辑。目前,单碱基编辑技术已在植物、动物以及人细胞中进行了高效的基因定点突变,在农业、生物医学研究甚至基因治疗中有广泛的应用前景。本综述就单碱基编辑系统的发展和应用进行回顾和展望。

关键词：基因编辑 CRISPR/Cas9 单碱基编辑胞嘧啶脱氨酶

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β-血红蛋白病的基因治疗临床试验进展

广东医学 2023年第10期44卷 1203-1210页

作者：刘倩宜陈晓琳刘思邈李欣瑜黄军就中山大学生命科学学院基因功能与调控教育部重点实验室广东广州510275 中山大学孙逸仙纪念医院儿科血液专科广东广州510120

β-血红蛋白病是由β-珠蛋白基因突变导致的单基因遗传病,包括β-地中海贫血和镰刀型细胞贫血症。目前临床上的治愈性治疗手段仅有异体造血干细胞移植。对患者来源的造血干细胞进行体外的基因修饰并进行自体造血干细胞移植,可以在恢复... 详细信息

β-血红蛋白病是由β-珠蛋白基因突变导致的单基因遗传病,包括β-地中海贫血和镰刀型细胞贫血症。目前临床上的治愈性治疗手段仅有异体造血干细胞移植。对患者来源的造血干细胞进行体外的基因修饰并进行自体造血干细胞移植,可以在恢复患者体内造血功能的同时,规避异体造血干细胞移植供体来源有限及产生移植物抗宿主病等问题,为β-血红蛋白病的治疗提供了新的治疗策略。目前,基于基因替代疗法及基因编辑疗法的多种基因治疗方案已进入临床试验阶段,有望早日实现彻底治愈β-血红蛋白病,造福患者及社会。

关键词： β-血红蛋白病基因治疗造血干细胞