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PDX-1腺病毒载体构建及其在脂肪间充质干细胞中的表达

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生物学杂志 2014年第1期31卷 5-10页

作者：王晓囡周艳严敏鲁帅尧李松孙茂盛李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发实验室昆明650118

研究通过重组腺病毒表达系统包装重组腺病毒Ad-PDX-1,通过重组腺病毒将Pancreatic duodenal homeobox1(PDX-1)导入大鼠脂肪间充质干细胞(rat adipose mesenchymal stem cells,rASCs)中,评价PDX-1在rASCs中的表达情况,为进一步探讨ASCs-PDX-1在体内修复糖尿病的潜能提供了实验基础。研究通过构建pAdEasy-CMV-PDX-1腺病毒质粒,在重组腺病毒表达系统PadEasy-1中成功包装出重组腺病毒Ad-PDX-1。培养及鉴定大鼠脂肪间充质干细胞,将携带PDX-1的重组腺病毒感染rASCs,通过RT-PCR、免疫荧光及免疫印迹(Western blotting)检测PDX-1在rASCs中的表达及产物定位。结果显示,构建的重组腺病毒包装成功,具有较高滴度,并能成功感染大鼠脂肪间充质干细胞。PDX-1蛋白定位于细胞核,并可稳定表达,为后续将大鼠脂肪间充质干细胞向胰岛β细胞诱导分化奠定了基础,为糖尿病的干细胞治疗提供依据。

关键词：胰腺十二指肠同源框蛋白1 脂肪间充质干细胞腺病毒载体

实验性2型糖尿病恒河猴模型的构建及其部分临床特征分析

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中国比较医学杂志 2013年第6期23卷 1-5,F0002页

作者：鲁帅尧和占龙杨凤梅禹文海赵远李艳艳王俊斌陈丽雄乞素冬中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

目的构建2型糖尿病(T2DM)恒河猴模型,使之成为研究人类T2DM的有效替身。方法以高糖高脂饮食为基础,在出现高脂血症和肥胖状态后注射35 mg/kg的链脲佐菌素(STZ),测定体重指数、血脂、空腹血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数、尿糖和口服葡萄... 详细信息

目的构建2型糖尿病(T2DM)恒河猴模型,使之成为研究人类T2DM的有效替身。方法以高糖高脂饮食为基础,在出现高脂血症和肥胖状态后注射35 mg/kg的链脲佐菌素(STZ),测定体重指数、血脂、空腹血糖、胰岛素、胰岛素抵抗指数、尿糖和口服葡萄糖耐量试验等,分析其部分临床特征。结果 T2DM模型组体重指数(BMI)大于35达到重度肥胖,有高脂血症的特点,空腹血糖、胰岛素和胰岛素抵抗指数显著增高(P<0.01),尿糖检测呈阳性,葡萄糖耐量受损并且空腹血糖高于7 mmol/L、2 h的血糖水平高于11.1 mmol/L,胰岛有轻度损伤和病变。结论通过部分临床特征分析,T2DM模型组具有典型的T2DM临床特征,可成为T2DM研究的有效模型。

关键词：糖尿病,2型临床特征胰岛素抵抗恒河猴

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非人灵长类动物的应激反应与控制

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中国实验动物学会第七届学术年会

作者：和占龙赵远鲁帅尧唐永明陈丽雄王俊斌李仕成杨亮宇中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所云南省动物营养与饲料重点实验室

应激是影响非人灵长类动物引种和人工繁育工作重要因素,使其生产繁殖性能降低,发病率和死亡率升高, 为提高非人灵长类实验动物的数量和质量,减少经济损失,保证动物实验和科研结果准确可靠,对非人灵长类动物的应激反应与控制进行总结论述... 详细信息

应激是影响非人灵长类动物引种和人工繁育工作重要因素,使其生产繁殖性能降低,发病率和死亡率升高, 为提高非人灵长类实验动物的数量和质量,减少经济损失,保证动物实验和科研结果准确可靠,对非人灵长类动物的应激反应与控制进行总结论述,为生产实践和科研工作者提供借鉴。

关键词：非人灵长类动物应激反应控制

一株恒河猴克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌)的分离鉴定及序列分析

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中国微生态学杂志 2014年第4期26卷 377-381页

作者：禹文海赵远鲁帅尧乞素冬沈冬李艳艳杨凤梅陈丽雄王俊斌和占龙中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的对恒河猴粪便中分离到的一株克罗诺杆菌进行鉴定,为实验恒河猴疾病检测、鉴别诊断和治疗提供参考依据。方法通过细菌培养特性、菌落形态观察及微生物鉴定系统(ID32 E)生化试验进行菌落鉴定;并进行抗生素敏感试验和小白鼠致病性试验;... 详细信息

目的对恒河猴粪便中分离到的一株克罗诺杆菌进行鉴定,为实验恒河猴疾病检测、鉴别诊断和治疗提供参考依据。方法通过细菌培养特性、菌落形态观察及微生物鉴定系统(ID32 E)生化试验进行菌落鉴定;并进行抗生素敏感试验和小白鼠致病性试验;用PCR方法扩增分离菌株的23S rRNA基因并测序,并将其与GenBank上参考菌株23S rRNA基因核苷酸序列进行同源性分析。结果经细菌形态学和生化鉴定该细菌为克罗诺杆菌,23S rRNA基因序列与GenBank中分离自婴幼儿配方奶粉中的阪崎克罗诺杆菌(CP004091)同源性为98%。药敏试验表明该菌对甲硝哒唑耐药,对其他15种抗生素敏感。致病性试验证明该分离菌株对小白鼠有强致病性。结论该株从恒河猴中分离到的克罗诺杆菌具有较强的致病性,对实验恒河猴饲养及相关研究人员有潜在的危害,因此,在恒河猴饲养及研究过程中应引起重视。头孢、庆大霉素和诺氟沙星等药物可作为治疗恒河猴克罗诺杆菌感染的临床用药。

关键词：恒河猴克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌) 分离鉴定序列分析

基于MHC-DRB3.2基因的部分牛种遗传多样性比较及分子系统发育分析

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中国牛业科学 2008年第6期34卷 5-7,12页

作者：禹文海黄芬和占龙鲁帅尧赵远王绍生刘红文鲁绍雄中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 上海交通大学农业与生物学院上海201240 中共云南省委党校云南昆明650111 云南省家畜改良站云南昆明650225 云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201

本研究比较了秦川牛、鲁西牛、南阳牛等国内9个品种牛DRB3．2基因的遗传多样性，采用SAS软件对这些牛种分子系统发育情况进行了分析，结果表明：等位基因HaeⅢA和HaeⅢB为9个牛种共有，其它部分等位基因为某个牛种特有；除了晋南牛是以... 详细信息

本研究比较了秦川牛、鲁西牛、南阳牛等国内9个品种牛DRB3．2基因的遗传多样性，采用SAS软件对这些牛种分子系统发育情况进行了分析，结果表明：等位基因HaeⅢA和HaeⅢB为9个牛种共有，其它部分等位基因为某个牛种特有；除了晋南牛是以HaeⅢF为优势等位基因外，其余8个牛种都是以HaeⅢA为优势等位基因。分析的9个牛种的多态信息含量（0.321～0.627）和杂合度（0.339～0.686）都较高，但有效等位基因数（1．512～3．188）较少。秦川牛、鲁西牛、南阳牛和晋南牛血缘关系相对较近，而蒙古牛、云南高峰牛、中国荷斯坦奶牛及英国娟珊牛血缘关系相对较近。研究的9个牛种群体内基因型一致性较低、遗传变异较大、遗传多样性较丰富。

关键词： MHC—DRB3.2基因遗传多样性分子系统发育

基于线粒体D-loop基因全序列分析贵州、四川、广西恒河猴群体遗传多样性

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基于线粒体D-loop基因全序列分析贵州、四川、广西恒河猴群体遗传...

第十五届中国实验动物科学年会

作者：禹文海马进赵远鲁帅尧杨凤梅李艳艳王俊斌陈丽雄徐鸿界刘权和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的从分子水平探讨贵州、四川、广西恒河猴群体遗传多样性,为今后开展恒河猴遗传资源的保护及合理开发利用提供借鉴和背景资料。方法采用PCR直接测序法测定贵州、四川、广西恒河猴38份样品的线粒体D-loop基因全序列,用MEGA和DNASP软件... 详细信息

目的从分子水平探讨贵州、四川、广西恒河猴群体遗传多样性,为今后开展恒河猴遗传资源的保护及合理开发利用提供借鉴和背景资料。方法采用PCR直接测序法测定贵州、四川、广西恒河猴38份样品的线粒体D-loop基因全序列,用MEGA和DNASP软件对变异位点数、简约信息位点数、单倍型、单倍型多样度、核苷酸多样度等遗传信息进行分析,基于邻接法(Neighbor-joining,NJ)构建系统发生树。结果 38份样品定义了31种单倍型,共发现136个变异位点,其中单一多态位点20个,简约信息位点113个,缺失/插入3个。结论不同地区恒河猴群体均存在着较丰富的遗传多态性。

关键词：恒河猴线粒体DNA 单倍型遗传多态性

恒河猴布氏柠檬酸杆菌和克氏耶尔森菌的分离鉴定及耐药性分析

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恒河猴布氏柠檬酸杆菌和克氏耶尔森菌的分离鉴定及耐药性分析

第十五届中国实验动物科学年会

作者：禹文海李艳艳赵远马进鲁帅尧杨凤梅王俊斌陈丽雄徐鸿界刘权和占龙中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的对一例腹泻恒河猴进行肠道病原菌的分离鉴定,为腹泻恒河猴疾病检测、鉴别诊断和治疗提供参考依据。方法肛拭子采集粪便进行GN增菌,经SS琼脂培养后挑选可疑菌落接三塘铁琼脂培养,用ID32 E细菌鉴定系统进行分离菌株鉴定,并进行16种抗... 详细信息

目的对一例腹泻恒河猴进行肠道病原菌的分离鉴定,为腹泻恒河猴疾病检测、鉴别诊断和治疗提供参考依据。方法肛拭子采集粪便进行GN增菌,经SS琼脂培养后挑选可疑菌落接三塘铁琼脂培养,用ID32 E细菌鉴定系统进行分离菌株鉴定,并进行16种抗生素药敏试验和小白鼠致病性试验。结果分离到的2株病原菌为布氏柠檬酸杆菌和克氏耶尔森菌,药敏试验表明该2株病原菌对磺胺甲基异恶唑、林可霉素、甲硝哒唑和土霉素耐药,氨苄西林为中度敏感,阿米卡星、头孢曲松、磷霉素、头孢唑林、庆大霉素和头孢哌酮为高度敏感。致病性试验证明布氏柠檬酸杆菌菌株对小白鼠有强致病性,而克氏耶尔森菌对小白鼠致病性不强。结论恒河猴携带布氏柠檬酸杆菌和克氏耶尔森菌,布氏柠檬酸杆菌具有较强的致病性,今后在恒河猴饲养繁育过程中应引起重视。头孢、阿米卡星、庆大霉素和磷霉素等药物可作为治疗恒河猴该类疾病的临床用药。

关键词：恒河猴布氏柠檬酸杆菌克氏耶尔森菌分离鉴定耐药性分析

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规模化猕猴养殖场寄生虫病综合防治措施

实验动物科学与管理 2006年第1期23卷 53-54,56页

作者：和占龙杨亮宇鲁帅尧赵远唐永明李仕成中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所昆明650118 云南农业大学动物科学技术学院昆明650201

制订一套科学、合理的规模化猕猴养殖场寄生虫病综合防治措施,对有效防治规模化猕猴养殖场的寄生虫病、提高实验猕猴的数量和质量及保证动物实验结果的准确性是很有必要的。

关键词：猕猴寄生虫病防治措施

恒河猴增龄过程中miR-16-5p及靶基因在外周血白细胞中的表达变化

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基础医学与临床 2019年第7期39卷 995-1000页

作者：胡婧雯李艳艳刘伟焦丽杨晶杨云和占龙彭小忠鲁帅尧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650107 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的明确衰老相关microRNA与恒河猴增龄的相关性。方法将猴群参照人类增龄划分为幼年、成年、老年和长寿,提取外周血白细胞的总RNA;用real-time PCR检测外周血白细胞中的microRNA及VEGFA、GHR、TBP、INSR、CLOCK、IKBKB、PIK3R1、LRP2、... 详细信息

目的明确衰老相关microRNA与恒河猴增龄的相关性。方法将猴群参照人类增龄划分为幼年、成年、老年和长寿,提取外周血白细胞的总RNA;用real-time PCR检测外周血白细胞中的microRNA及VEGFA、GHR、TBP、INSR、CLOCK、IKBKB、PIK3R1、LRP2、SSTR3、IGF1R、BCL2、PPM1D、IRS1、MAPK8、ADCY5、APP、NFE2L1、BDNF和PEX5的表达;利用microRNA靶基因预测网站miRwalk、TargetSan、miRecords、miRDB预测miR-16-5p的靶基因,并与人类衰老基因库(http://***/)对接。结果在增龄过程中,恒河猴外周血白细胞中miR-16-5p的表达量随年龄增长而增加(P<0.001);多个网站对miR-16-5p靶基因预测得到539个潜在的靶基因,与人类衰老基因组库对接后有19个基因重合;有10个基因的mRNA在恒河猴增龄过程中存在差异表达,其中,IKBKB、PIK3R1、IRS1的表达随着年龄的增加逐渐下降。结论在自然衰老恒河猴的外周血白细胞中,miR-16-5p及其靶基因IKBKB、PIK3R1、IRS1能作为外周血衰老候选标志物。

关键词：衰老恒河猴 miR-16-5p 标志物