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PRRSV Nsp4突变毒株对β2M分子表达的影响

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南京农业大学学报 2024年

作者：康磊刘珂王建忠尹才邱亚峰魏建超李蓓蓓邵东华李宗杰粟硕马志永南京农业大学动物医学院免疫学研究所教育部动物卫生与食品安全国际联合研究实验室江苏省动物免疫学工程实验室中国农业科学院上海兽医研究所苏州市相城区农业技术综合服务中心宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心

[目的]本次试验探究PRRSV＿Nsp4基因是否在抑制β2M分子表达方面发挥关键性作用，为进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制打下了基础。[方法]本次试验首先建立了PRRSV的反向遗传平台，并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。随后根据之... 详细信息

[目的]本次试验探究PRRSV＿Nsp4基因是否在抑制β2M分子表达方面发挥关键性作用，为进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制打下了基础。[方法]本次试验首先建立了PRRSV的反向遗传平台，并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。随后根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测，在其Domain II和Domain III区域分别筛选了3个和5个不同的氨基酸位点，并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变，随后将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒。最后将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞，并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV＿Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M分子表达方面发挥的作用。[结果]只有D2-5重组PRRSV毒株在不影响病毒复制能力的同时能够高效的在Marc-145和PAM细胞上促进β2M分子的表达，而野生毒株SH2020表现出了对β2M分子表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M分子表达方面发挥重要作用，并且Nsp4＿A80L突变能够显著促进β2M分子的表达。

关键词： Nsp4 β2M 反向遗传平台突变毒株

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西尼罗病毒的流行风险因素分析

中国动物传染病学报 2024年

作者：陶坤盛康磊何潺张彤陈梦莉李宗杰邵东华李蓓蓓魏建超邱亚峰马志永刘珂中国农业科学院上海兽医研究所

西尼罗病毒（WNV）是一种经蚊媒传播的黄病毒，已成为世界范围内重大的公共卫生问题。目前WNV的全球分布包括非洲、欧洲、亚洲、澳大利亚以及北美和南美的各个地区。该病毒主要通过受感染的蚊子传播，库蚊是主要媒介。影响WNV传播和流... 详细信息

西尼罗病毒（WNV）是一种经蚊媒传播的黄病毒，已成为世界范围内重大的公共卫生问题。目前WNV的全球分布包括非洲、欧洲、亚洲、澳大利亚以及北美和南美的各个地区。该病毒主要通过受感染的蚊子传播，库蚊是主要媒介。影响WNV传播和流行的因素很多，包括蚊媒、候鸟、生态、地理、气候和边境活动等。这篇综述讨论了目前WNV的全球流行情况，明确指出了影响WNV传播和流行病学的主要危险因素。根据流行病学历史和全球危险因素，分析了WNV的流行风险因素。

关键词：西尼罗病毒传播流行风险因素分析

PRRSV Nsp4基因突变株对β2M表达的影响

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南京农业大学学报 2024年第3期47卷 507-514页

作者：康磊刘珂王建忠尹才邱亚峰魏建超李蓓蓓邵东华李宗杰粟硕马志永南京农业大学动物医学院免疫学研究所/教育部动物卫生与食品安全国际联合研究实验室/江苏省动物免疫学工程实验室江苏南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 苏州市相城区农业技术综合服务中心江苏苏州215131 宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心宁夏银川750011

[目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp... 详细信息

[目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测,在其DomainⅡ和DomainⅢ分别筛选出3个和5个不同的氨基酸位点,并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变,再将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒,将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞,并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M表达方面发挥作用。[结果]成功拯救出PRRSV D2-5(Nsp4-A80L)突变毒株,并且在Marc-145细胞上的生长动力学特性与野生毒株SH2020相似;而Nsp4基因其余位点突变则会导致PRRSV生长受到显著抑制从而无法进行试验。Western blot和RT-qPCR试验结果证实PRRSV D2-5毒株能够显著促进β2M在Marc-145和PAM细胞的表达,而野生毒株SH2020则表现出了对β2M表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M表达方面发挥重要作用,并且Nsp4-A80L突变能够显著促进β2M的表达。

关键词： PRRSV Nsp4 β2M 反向遗传平台突变毒株

我国动物源细菌中SXT/R391整合性接合元件的流行调查

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中国动物传染病学报 2024年

作者：马思原姚晓慧金耀忠马永国李琳李宗杰魏建超刘珂邵东华邱亚峰马志永李蓓蓓中国农业科学院上海兽医研究所上海市浦东新区畜牧水产技术推广中心甘肃省定西市安定区动物疫病预防控制中心

本研究旨在调查SXT/R391整合性接合元件在我国养殖动物源细菌中的流行状况及其主要宿主菌的耐药性特征。收集了我国21个省市自治区的猪源、鸡源和牛源粪便样本，总计1166份。提取粪便样本总DNA，利用PCR检测SXT/R391元件的特异性整合酶... 详细信息

本研究旨在调查SXT/R391整合性接合元件在我国养殖动物源细菌中的流行状况及其主要宿主菌的耐药性特征。收集了我国21个省市自治区的猪源、鸡源和牛源粪便样本，总计1166份。提取粪便样本总DNA，利用PCR检测SXT/R391元件的特异性整合酶基因，对该元件流行状况进行调查。选取阳性样本分离鉴定携带SXT/R391元件细菌，阐明其宿主菌菌属分布。利用琼脂稀释法测定携带SXT/R391元件的变形杆菌对9种抗菌药物的最小抑菌浓度（Minimum inhibitory concentrations，MICs），测试药物包括：氨苄西林、四环素、替加环素、环丙沙星、头孢西丁、美罗培南、庆大霉素、恩诺沙星和氟苯尼考。研究结果表明，SXT/R391元件在我国动物源细菌中的流行率总体达44.3%，其中猪源为50.4%（429/852），鸡源为33.6%（85/253）、牛源为4.9%（3/61）。对携带SXT/R391元件细菌的分离鉴定结果表明，携带该元件的主要为奇异变形杆菌（32.5%，118/363）和普通变形杆菌（31.4%，114/363），且在大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、解鸟氨酸拉乌尔菌、幼虫普罗威登斯菌、彭氏变形杆菌、摩根摩根菌和蜂房哈夫尼亚菌等细菌中均有发现。对携带SXT/R391元件的奇异变形杆菌和普通变形杆菌的药物敏感测试结果表明，对四环素、环丙沙星、庆大霉素、氟苯尼考等耐药率极高（＞60%），未发现美罗培南和替加环素耐药菌株。SXT/R391元件作为一个耐药基因捕获的重要载体，在养殖动物源细菌中的广泛流行表明其在动物源耐药性传播扩散中可能起到了重要作用，值得进一步的关注和研究。

关键词： SXT/R391 整合性接合元件动物源

猪链球菌中携带optrA基因的新型整合性接合元件ICESsuDF712解析

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中国动物传染病学报 2024年

作者：聂万森宋强强姚晓慧徐卫兵李宗杰魏建超刘珂邵东华邱亚峰马志永李蓓蓓夏利宁上海市浦东新区大团镇经济发展服务中心中国农业科学院上海兽医研究所新疆农业大学动物医学院

在临床分离的猪链球菌中发现了一个新型的携带optrA基因整合性接合元件（Integrative and conjugative element，ICE），本研究对该ICE元件的遗传结构、转移能力及其携带的多重耐药基因进行解析。采用微量肉汤稀释法测定猪链球菌DF712... 详细信息

在临床分离的猪链球菌中发现了一个新型的携带optrA基因整合性接合元件（Integrative and conjugative element，ICE），本研究对该ICE元件的遗传结构、转移能力及其携带的多重耐药基因进行解析。采用微量肉汤稀释法测定猪链球菌DF712的最小抑菌浓度（Minimum inhibitory concentrations， MICs），利用PCR技术检测恶唑烷酮类耐药基因，通过Illumia二代测序平台获取DF712全基因组数据，采用生物信息学分析和PCR技术获取携带optrA基因的ICE元件完整核苷酸序列，利用反向PCR和接合转移试验探索新型ICE元件的转移能力。结果表明，猪链球菌DF712中的optrA基因定位于一个ICE元件，该ICE元件全长69，029 bp，插入rpIL与hpy基因之间，拥有ICESa2603家族的典型特征，但其遗传信息和结构特征具有独特性，因此将其命名为ICESsuDF712。除optrA基因外，ICESsuDF712还携带其它耐药基因，包括erm(B）、spw、tet(O)、aadE。optrA基因两端由重复序列IS1216E包围，形成一个典型的IS1216E-optrA-IS1216E转座子结构插入ICESsuDF712之中。反向PCR结果表明ICESsuDF712和IS1216E-optrA-IS1216E结构均可自我剪切并形成环状结构，提示二者均有潜在的转移能力，但接合转移未能成功。综上所述，ICE元件是optrA基因在猪链球菌中转移传播的重要载体，应持续关注并检测该基因在动物源细菌的流行状况和传播机制。

关键词：猪链球菌耐药性整合性接合元件 optrA基因

PRRSV非结构蛋白2合成肽多克隆抗体的制备及应用

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中国动物传染病学报 2024年

作者：张彦兵解艺璇李慧肖长广葛菲菲刘珂魏建超李宗杰邵东华李蓓蓓马志永孙延鸣邱亚峰石河子大学动物科技学院上海市动物疫病预防控制中心中国农业科学院上海兽医研究所

本研究旨在利用PRRSV Nsp2合成肽进行多克隆抗体的制备，并分析了该抗体的特性。应用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp2的抗原肽序列，并通过化学合成的方法获得抗原肽，将其与KLH载体蛋白进行偶联；随后，将偶联好的抗原肽与... 详细信息

本研究旨在利用PRRSV Nsp2合成肽进行多克隆抗体的制备，并分析了该抗体的特性。应用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp2的抗原肽序列，并通过化学合成的方法获得抗原肽，将其与KLH载体蛋白进行偶联；随后，将偶联好的抗原肽与弗氏佐剂混合，通过对新西兰大白兔进行免疫获得的血清即为针对Nsp2的多克隆抗体；最后，利用ELISA、Western blot及间接免疫荧光法(IFA)对多克隆抗体的特性进行分析。研究结果显示：ELISA检测该多克隆抗体的效价超过105；Western blot检测可以特异性的检测到细胞过表达和不同毒株病毒感染的Nsp2蛋白；IFA检测分析得出，该多克隆抗体可有效地区分病毒感染和未感染的样品。此外，PRRSV Nsp2合成肽多克隆抗体还可以应用于不同毒株PRRSV感染样品的检测，这为进一步研究PRRSV Nsp2的功能提供了一个有效的工具。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒合成肽多克隆抗体非结构蛋白2

2017-2020年华东地区猪源多杀性巴氏杆菌耐药性和PFGE分析

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中国动物传染病学报 2024年第3期32卷 128-133页

作者：宋强强轩慧勇朱维魏建超刘珂邵东华邱亚峰马志永李蓓蓓夏利宁新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 山东省滕州市动物疫病预防中心滕州277599

为了解华东地区猪源多杀性巴氏杆菌的耐药情况及流行特征,本研究收集了2017—2020年华东地区分离的31株猪源多杀性巴氏杆菌,通过琼脂稀释法检测其对12种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法进行分子分型探求... 详细信息

为了解华东地区猪源多杀性巴氏杆菌的耐药情况及流行特征,本研究收集了2017—2020年华东地区分离的31株猪源多杀性巴氏杆菌,通过琼脂稀释法检测其对12种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法进行分子分型探求菌株亲缘关系。结果显示:31株猪源多杀性巴氏杆菌,对复方新诺明的耐药率最高(61.29%),其次为泰妙菌素(32.26%)、氟苯尼考(25.81%)、多西环素(12.90%)和大观霉素(3.23%)。所有菌株对头孢噻呋、庆大霉素、阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、恩诺沙星完全敏感;耐药谱型呈现多样化特点,31株猪源多杀性巴氏杆菌共表现为8种耐药谱型,其中有2株3药耐药菌株,耐药谱型分别为DOX+TIA+SPT和FFC+TIA+SXT;依据85%相似性标准可将其分为14个PFGE分型,其中A、G、H、J簇共有19株菌,占61.29%,并且PFGE分型相同的菌株耐药表型也高度相似。研究结果表明,华东地区猪源多杀性巴氏杆菌呈现耐药模式和PFGE分子分型多样化的特性,PFGE分型与耐药表型之间存在一定的相关性,应加强猪源多杀性巴氏杆菌的耐药性监测和流行性防控。

关键词：多杀性巴氏杆菌耐药性 PFGE 猪

PRRSV非结构蛋白Nsp1α合成肽多克隆抗体的制备及应用

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中国动物传染病学报 2024年第3期32卷 19-26页

作者：解艺璇张彦兵李慧朱琳葛菲菲刘珂魏建超李宗杰邵东华李蓓蓓马志永孙延鸣邱亚峰石河子大学动物科技学院石河子832003 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 上海市动物疫病预防控制中心上海201103

本研究尝试利用PRRSV Nsp1α合成肽进行多克隆抗体的制备,并对抗体的特性进行了分析。首先,利用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp1α的抗原肽序列;随后,按照此序列合成获得抗原肽,并将其与KLH载体蛋白进行偶联;接下来,将偶联... 详细信息

本研究尝试利用PRRSV Nsp1α合成肽进行多克隆抗体的制备,并对抗体的特性进行了分析。首先,利用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp1α的抗原肽序列;随后,按照此序列合成获得抗原肽,并将其与KLH载体蛋白进行偶联;接下来,将偶联好的抗原肽与弗氏佐剂混合,通过免疫大白兔制备针对Nsp1α合成肽的多克隆抗体;最后,利用ELISA、Western blot及间接免疫荧光法对多克隆抗体的特性进行了分析。结果显示:该多克隆抗体ELISA的效价超过105;利用Western blot可以检测到特异的Nsp1α表达条带,包括瞬时转染的样品和不同毒株病毒感染的样品;利用间接免疫荧光法分析,该多克隆抗体可有效地区分病毒感染和未感染的样品。结果表明,PRRSV Nsp1α合成肽多克隆抗体可以有效地应用于PRRSV Nsp1α表达检测,为进一步研究PRRSV Nsp1α的功能提供了一个有效的工具。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒合成肽多克隆抗体非结构蛋白

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三种复方植物精油驱蚊效果实验室观察研究

中国动物传染病学报 2024年第2期32卷 113-117页

作者：李昱昊刘昱男张妍管志欣张俊杰肖长广李宗杰李蓓蓓邵东华刘珂邱亚峰马志永孙尧魏建超中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 创澳(上海)环保科技发展有限公司上海201112

养殖场中滋生的大量蚊蝇可以在畜禽之间和人畜之间传播蚊媒病毒,不仅会对养殖场造成经济损失,而且还会严重威胁人类健康。本试验为了观察三种复方植物精油在实验室驱蚊的效果。我们根据国标GB/T 13917.9-2009规定的攻击力试验方法,通过... 详细信息

养殖场中滋生的大量蚊蝇可以在畜禽之间和人畜之间传播蚊媒病毒,不仅会对养殖场造成经济损失,而且还会严重威胁人类健康。本试验为了观察三种复方植物精油在实验室驱蚊的效果。我们根据国标GB/T 13917.9-2009规定的攻击力试验方法,通过使用小鼠模型来测定三种复方植物精油对白纹伊蚊的驱避时效。本试验结果显示在该试验中,以白纹伊蚊作为本次试验蚊虫,两种驱蚊花露水在2 h以内对昆明小鼠有效保护率在70%以上;复方植物精油(APEX)在2 h内对昆明小鼠的有效保护率达到40%;通过调整植物精油成分,复方植物精油(APEX-1)对昆明小鼠有效保护时间为2 h,而且在4 h内有效保护率均可达到80%以上;复方植物精油(APEX-2)型对昆明小鼠有效保护时间为2 h,而且在4 h内有效保护率均可达到90%以上。结果表明,复方植物精油(APEX)是一种有效的蚊蝇驱避剂,通过调整植物精油成分后,有效保护率达到80%以上,其高效绿色环保的优势在养殖场蚊蝇驱避方面有较大应用前景。

关键词：植物精油驱避剂白纹伊蚊有效保护时间