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日本沼虾原肌球蛋白基因克隆、原核表达及其致敏性评价

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日本沼虾原肌球蛋白基因克隆、原核表达及其致敏性评价

作者：骆叶晴南昌大学

学位级别：硕士

日本沼虾(Macrobrachium nipponense)在我国渔业资源中占有重要的地位,广泛分布于我国和其他亚洲国家的淡水和低盐度河口水域。原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)是日本沼虾的主要过敏原,能够引起严重的过敏反应。研究表明,基于TM的组分诊断... 详细信息

日本沼虾(Macrobrachium nipponense)在我国渔业资源中占有重要的地位,广泛分布于我国和其他亚洲国家的淡水和低盐度河口水域。原肌球蛋白(Tropomyosin,TM)是日本沼虾的主要过敏原,能够引起严重的过敏反应。研究表明,基于TM的组分诊断可以显著提高虾类过敏诊断的准确度,同时获得高纯度的过敏原是研究其结构和致敏性的基础。天然TM的提取过程琐碎复杂、周期长,蛋白得率和纯度较低,难于形成规模化和标准化生产。而重组TM纯化技术简单稳定、周期短,蛋白得率和纯度较高,易于规模化和标准化生产。重组蛋白的制备具有更为稳定的材料来源,且重组蛋白可以作为天然蛋白的一种替代物,在食物过敏原的检测以及食物过敏的诊断与治疗等领域发挥重要作用。因此,重组TM的制备具有高度应用价值。本研究首先从日本沼虾的肌肉组织中克隆出TM基因新亚型,接着根据克隆得到的基因序列构建pET-30a-TM重组质粒,体外诱导重组TM表达并利用亲和层析对其纯化,同时利用离子交换层析从日本沼虾肌肉组织中分离纯化得到天然TM。随后对两种蛋白的结构、理化性质和致敏性进行评价,以期获得能够替代天然TM的重组TM,为虾类过敏的诊断及其相关检测产品开发提供可靠的过敏原蛋白组分。本研究的主要方法、结果及结论如下:1、采用RACE技术克隆得到日本沼虾TM基因全长序列,其长度为1658 bp,其中5’非编码区有47 bp,3’非编码区有756 bp,开放阅读框开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)为855 bp,编码284个氨基酸,分子量32.8 k Da。NCBI登录号为OP974621。2、构建重组表达质粒pET-30a-TM,并通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行体外诱导表达。最佳诱导条件为37℃条件下,IPTG浓度1 mmol/L诱导4 h。重组TM主要以可溶性形式存在于细胞破碎液的上清液中,分子量约38 k Da。通过金属螯合亲和层析分离纯化获得重组TM,经SDS-PAGE进行分析,纯化得到的重组TM纯度达90%以上。3、通过阴离子交换层析分离纯化天然TM,SDS-PAGE分析结果表明纯化后的天然TM纯度达88%以上。4、采用质谱技术对天然和重组蛋白进行分析鉴定,结果表明,纯化的天然蛋白和重组蛋白在Uniprot的序列号为W6EKR0,均鉴定为TM。利用圆二色(Circular dichroism spectrometry,CD)光谱比较天然和重组TM的二级结构,发现重组与天然TM的光谱信号高度重叠,表明天然和重组TM具有相似的构象结构,空间结构高度相似。5、通过竞争抑制ELISA和建立BALB/c小鼠致敏模型对日本沼虾天然和重组TM进行体外和体内致敏性评估。结果表明,重组TM具有更强的Ig E结合能力。天然原肌球蛋白(NTM)组和重组原肌球蛋白(RTM)组中小鼠均出现了明显的过敏症状,小鼠血清中组胺和特异性抗体水平均显著性升高,且辅助性T细胞(T helper cells,Th)分化向辅助型T细胞2(T helper 2 cells,Th2)方向偏移。与NTM组相比,RTM组小鼠肛温变化、血清中特异性抗体、组胺水平等指标显著性升高。综合上述各项指标的检测结果可知,重组TM与天然TM都具有较强的致敏性,而重组TM的致敏性更强。6、采用16S rDNA测序技术对TM致敏小鼠盲肠内容物进行肠道菌群分析。与对照组相比,NTM组和RTM组小鼠肠道菌群物种多样性均有下降趋势,其中RTM组的肠道菌群物种多样性下降更显著。天然和重组TM使致敏小鼠肠道菌群的结构发生变化。在门水平上,天然TM致敏小鼠与重组TM致敏小鼠肠道菌群中厚壁菌门的丰度占比有下降趋势,而拟杆菌门和放线菌门的丰度占比呈现上升趋势,其中重组TM致敏小鼠变形菌门相对丰度占比显著上升。说明天然和重组TM能通过改变肠道优势菌群相对丰度引起肠道菌群的紊乱从而影响食物过敏,而重组TM的影响更显著。本研究克隆得到了日本沼虾TM的基因序列,并进行了生物信息学分析。随后利用原核表达技术成功获得了重组TM。综合各项指标发现,天然和重组TM的氨基酸序列和空间结构高度相似。天然和重组TM均具有较强的致敏性,而重组TM的致敏性更强,可作为天然TM的替代品应用于食物过敏的诊断和治疗。

关键词：食物过敏原肌球蛋白基因克隆重组表达致敏性

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数据犯罪的演变趋向及治理路径研究

犯罪与改造研究 2024年第6期 25-30页

作者：兰添妃天津师范大学法学院刑事风险防控研究中心

数据具有流动性、价值性、可塑性、虚拟性等特征，数据犯罪表现为非法收集型、非法利用型、非法内容生成型等不同类型。当前，数据犯罪呈现侵犯法益的多元化、犯罪手段的技术性、犯罪主体的多层级化趋向。对数据犯罪的治理应坚持数据流... 详细信息

数据具有流动性、价值性、可塑性、虚拟性等特征，数据犯罪表现为非法收集型、非法利用型、非法内容生成型等不同类型。当前，数据犯罪呈现侵犯法益的多元化、犯罪手段的技术性、犯罪主体的多层级化趋向。对数据犯罪的治理应坚持数据流动性与安全性相调和的理念。在此理念指导下，以法益保护为维度构建差异化的数据保护路径、实施动态数据保护模式以适应数据犯罪的技术性、坚持数据犯罪协同治理思路。

关键词：数据安全流动性法益协同治理

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栀子果浸泡食用油工艺及神经保护功效研究

栀子果浸泡食用油工艺及神经保护功效研究

作者：骆小凡浙江农林大学

学位级别：硕士

栀子果是茜草科植物栀子的成熟果实,是含有多种生物活性成分的药食同源食品。栀子果中的藏红花素、藏红花酸以及环烯醚萜苷类生物活性成分已被证明具有一定的神经保护功效。本课题以栀子果为原料,将栀子果浸泡到天然食用油中,对食用油... 详细信息

栀子果是茜草科植物栀子的成熟果实,是含有多种生物活性成分的药食同源食品。栀子果中的藏红花素、藏红花酸以及环烯醚萜苷类生物活性成分已被证明具有一定的神经保护功效。本课题以栀子果为原料,将栀子果浸泡到天然食用油中,对食用油的神经保护功效进行功能强化。首先对浸泡料液比参数进行了优化;其次通过检测大豆油浸泡前后活性成分含量、理化指标变化及感官评分,对浸泡所用栀子果及栀子粕的不同前处理方式进行优化筛选;随后进一步检测了大豆油浸泡栀子果和栀子粕后的PC12细胞保护效果,筛选对神经保护效果最好的浸泡原材料,明确了栀子果浸泡食用工艺;最后主要探究了栀子果浸泡不同食用油活性成分含量变化及对PC12细胞的保护效果,对浸泡后的食用油进行综合评价。主要研究结果如下:(1)优化了浸泡料液比参数以及浸泡所用栀子果及栀子粕的不同前处理方式。以浸泡水栀子果后大豆油类胡萝卜素含量为试验指标进行单因素实验,对不同浸泡料液比参数(1:1、1:3、1:5、1:7、1:9)进行筛选;以不同前处理后的栀子果为原料浸泡大豆油,对栀子果的品种(山栀子果、水栀子果)、粉碎度(25目、60目、80目)、炒制度(生、炒、焦、炭)及栀子粕的前处理方式(微波、超声、干热、湿热)进行筛选。结果显示,浸泡料液比参数为1:5时,水栀子果中绝大部分类胡萝卜素已经进入到大豆油当中,含量为9.144 mg/g,因此选择1:5为最佳浸泡料液比参数。浸泡粉碎80目的炭-水栀子果后对大豆油活性成分含量提升效果最好,藏红花素Ⅰ及藏红花酸含量分别从0提升至19.259μg/g和16.983μg/g,类胡萝卜素及总酚含量分别提升了25.315 mg/g(约111倍)和20.201μg/g(约1.9倍);浸泡粉碎80目的焦-水栀子果后大豆油活性成分含量提升效果仅次于前者,藏红花素Ⅰ及藏红花酸含量分别从0提升至18.234μg/g和16.113μg/g,类胡萝卜素及总酚含量分别提升了17.091 mg/g(约75倍)及13.618μg/g(约1.3倍);浸泡栀子果后显著提升了大豆油酸价,对大豆油过氧化值和共轭二烯值的抑制效果显著;在感官分析中,虽然浸泡粉碎80目的炭-水栀子果对大豆油活性成分含量提升效果最好,但浸泡后的大豆油苦味较重、色泽较差,因此该前处理方式不予采用。浸泡粉碎80目的焦-水栀子果后的大豆油活性成分含量较高,且焦香味浓郁、苦味较弱、对色泽影响较小,感官评分7.19,排名第一。因此选择品种为水栀子果、粉碎度为80目、炒制度为焦作为栀子果最佳前处理方式。大豆油浸泡湿热处理的栀子粕后,藏红花素Ⅰ及藏红花酸含量分别从0提升至22.225μg/g和16.110μg/g,类胡萝卜素及总酚含量分别提升了6.492 mg/g(约29倍)及17.970μg/g(约1.6倍),显著高于其他样品;栀子粕前处理方式不同,对浸泡后大豆油的理化性质影响较小。浸泡后的大豆油对过氧化值和共轭二烯值的抑制效果显著。因此选择湿热处理作为栀子粕最佳前处理方式。(2)筛选了栀子果浸泡大豆油原材料,明确了栀子果浸泡大豆油工艺。对比分析大豆油浸泡栀子果及栀子粕后活性成分含量变化,并通过PC12细胞保护效果研究筛选最佳浸泡原材料,从而明确栀子果浸泡大豆油工艺。结果显示,浸泡焦-山栀子果后大豆油藏红花素Ⅰ和京尼平苷含量最高,分别从0提升至16.345和14.882μg/g;浸泡焦-水栀子果后大豆油藏红花酸含量最高,从0提升至13.448μg/g,同时对大豆油类胡萝卜素和总酚的提升效果最好,分别提升了14.703 mg/g(提升了约54倍)及16.149μg/g(提升了约1.3倍);在PC12细胞保护效果研究中,浸泡焦-水栀子果、湿热-栀子粕及生-栀子粕后的大豆油具备一定的PC12细胞保护效果,细胞存活率分别提高了11.56%、6.01%及5.23%,浸泡焦-水栀子果的大豆油对PC12细胞保护效果最好。通过主成分分析得出,浸泡焦-水栀子果后的大豆油在主成分1中特征值最高,与PC12细胞保效果呈显著正相关,进一步说明浸泡焦-水栀子果后的大豆油具有良好的PC12细胞保护效果,因此选择焦-水栀子果为最佳浸泡原材料。(3)主要探究了栀子果浸泡不同食用油后活性成分含量变化及PC12细胞保护效果。以焦-水栀子果为原料浸泡葵花籽油、大豆油、玉米油、花生油、橄榄油、菜籽油,对不同浸泡油进行综合评价。结果显示,花生油浸泡焦-水栀子果后藏红花素Ⅰ、藏红花酸及京尼平苷含量分别从0提升至26.935、41.584及55.036μg/g,显著高于其他浸泡油;浸泡焦-水栀子果后可以显著提高葵花籽油、玉米油、大豆油及花生油的DPPH清除能力,其中花生油DPPH清除能力提升了5.543μmo L TEA/100g(约1倍),显著高于其他浸泡油;大豆油、橄榄油、葵花

关键词：栀子果浸泡工艺食用油藏红花酸 PC12细胞保护作用

逆向混改下民营医药企业绩效比较研究 ——以康恩贝和九州通为例

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逆向混改下民营医药企业绩效比较研究 ——以康恩贝和九州通为例

作者：骆涵福建农林大学

学位级别：硕士

连续并购企业估值方法优化问题研究 ——以美的集团为例

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连续并购企业估值方法优化问题研究 ——以美的集团为例

作者：骆玉竹兰州财经大学

学位级别：硕士

企业通过并购能够获得专利技术、品牌渠道等资产,从而提升自身的综合竞争力,越来越多的制造业企业在并购成功后进行连续并购的趋势增强。但是一定时期内进行多次并购活动会导致企业价值的波动。目前我国针对连续并购企业价值的研究较少... 详细信息

企业通过并购能够获得专利技术、品牌渠道等资产,从而提升自身的综合竞争力,越来越多的制造业企业在并购成功后进行连续并购的趋势增强。但是一定时期内进行多次并购活动会导致企业价值的波动。目前我国针对连续并购企业价值的研究较少,常用的传统估值方法对企业价值大多偏向整体分析,并不适用于评估连续并购后产生多个业务分支的企业价值。企业通过连续并购可以形成具有多元化特征的商业模式,产生复杂的协同效应,影响企业的盈利、价值创造,从而影响企业价值。因此,可以将商业模式分析融入企业估值方法,对传统的估值方法进行优化,使连续并购企业价值评估贴合企业的内在价值。美的集团是通过连续并购实现商业模式变革的代表性企业,本文选取美的集团为典型案例,应用修正的分部估值方法对其企业价值进行评估。文章对美的集团美的集团并购活动进行梳理和分析。对比分析传统方法计算得出美的集团价值,分析传统方法的不足,并提出优化方案——根据美的集团连续并购后形成的商业模式进行业务模块划分和协同价值影响因素的确定,根据各业务模块的业务活动特征及行业特征选择合适的评估方法,在分别评估各业务板块的价值后,估算美的集团业务模块之间产生的协同效应。最后,对美的集团连续并购对企业内在价值的影响进行综合评价,验证其对传统估值方法的优化作用。通过研究,本文可以得到以下结论:首先,运用商业模式分析企业,可以得到企业业务特征以及各业务板块的协同价值的主要影响因素,用以确认各业务板块之间协调关系系数的调整。其次,融入商业模式分析优化后的分部估值方法灵活性、包容性强的特点比一般的传统方法更加适合连续并购后业务趋向多样化的企业,既减少了单一评估方法与部分业务板块契合不足所造成的误差,又体现了企业业务板块之间的协同价值。通过对连续并购资产相关度分析,针对涉及业务进行调整,相比于传统的成本法、市场法和收益法,加入了对企业连续并购经济活动的考虑,让评估的价值更加贴合企业的内在价值。最后,使用修正分类加总的方法要针对企业业务行业的特征,同时,要注意企业的业务与被评估企业的业务板块相似,但不可与其他业务板块相重合,以免造成更大的误差。

关键词：连续并购商业模式修正分类加总方法企业价值评估

数字经济对资源型城市低碳转型的影响及作用路径

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中国人口·资源与环境 2024年第6期34卷 56-64页

作者：骆行刘子俊田云重庆大学公共管理学院重庆400044 中南财经政法大学工商管理学院湖北武汉430073 WTO与湖北发展研究中心湖北武汉430073

数字经济因其“绿色属性”被认为有助于加速城市的低碳转型。然而,对于产业结构单一、能耗高的资源型城市,如何利用数字经济实现低碳转型,仍是一个关键问题。鉴于此,该研究以2011—2020年中国111个资源型城市的面板数据为样本,采用双向... 详细信息

数字经济因其“绿色属性”被认为有助于加速城市的低碳转型。然而,对于产业结构单一、能耗高的资源型城市,如何利用数字经济实现低碳转型,仍是一个关键问题。鉴于此,该研究以2011—2020年中国111个资源型城市的面板数据为样本,采用双向固定效应模型分析数字经济对资源型城市低碳转型的影响及作用路径,并从城市类型和经济发展两个角度进行异质性分析。研究发现:(1)数字经济对资源型城市的低碳转型具有显著的积极作用。通过构造Bartik工具变量处理可能的内生性问题后,结论仍然成立。随后,通过3种不同方式进行稳健性检验,均证实这一结论的稳健性。(2)路径分析结果揭示,降低资源错配和提高劳动生产率是数字经济推动资源型城市低碳转型的重要路径。(3)异质性分析表明,数字经济的低碳转型效应只在衰退型和再生型资源型城市中才有体现,在成长型和成熟型的资源型城市中并不显著。此外,在经济发展程度高的资源型城市中,数字经济的低碳转型效应更加明显。根据该结论提出以下政策建议:一是政府必须充分认识并重视数字经济在资源型城市低碳转型中的催化作用;二是充分发挥数字经济在推进资源型城市低碳转型的资源配置效应和劳动生产效应;三是针对资源型城市的发展特征和状况,制定差异化的数字经济发展策略和低碳转型措施。

关键词：数字经济资源型城市低碳转型碳排放强度

基于热舒适的湿热地区滨水露营地树种选择与布局策略研究

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基于热舒适的湿热地区滨水露营地树种选择与布局策略研究

作者：骆心仪广州大学

学位级别：硕士

在全球气候变暖的大背景下,湿热地区夏季高温高湿的独特气候特征使得滨水露营地的热舒适度问题愈发受到关注,同时给露营地的规划和设计带来了挑战。滨水绿地作为城市居民重要的休闲放松场所之一,其热环境质量的优劣直接影响到游客的体... 详细信息

在全球气候变暖的大背景下,湿热地区夏季高温高湿的独特气候特征使得滨水露营地的热舒适度问题愈发受到关注,同时给露营地的规划和设计带来了挑战。滨水绿地作为城市居民重要的休闲放松场所之一,其热环境质量的优劣直接影响到游客的体验和满意度。因此,本研究以湿热地区滨水露营地为研究对象,通过综合运用实地监测、问卷调查、软件模拟等多种研究方法,深入探讨了露营地的局部气候条件、露营者行为以及树木种类和种植布局对露营地热舒适的影响,并通过生理等效温度(Physiological equivalent temperature,PET)评估了室外露营环境的舒适性。结果表明:(1)空气温度是影响露营者热感觉最关键的因素,露营者对高温、强太阳辐射和低风速的环境普遍表示不满。(2)露营地的中性PET为26.80℃,可接受的PET上限为36.65℃。在天空可视因子(Sky view factor,SVF)较小的空间,露营者对热环境的适应性更强。(3)当PET高于30.61℃时,露营者开始感受到热应力;高于53.5℃时,达到极强热应力水平。(4)露营者倾向在SVF较低的空间进行低强度活动,而在SVF较高的空间进行中高强度活动。高大的阔叶树下、靠近水域且能容纳不同强度活动的空间以及树木呈U型列植和片植全遮荫的空间最受欢迎。(5)ENVI-met软件模拟的热指数高估了露营者的实际热感觉。通过对比分析模拟与实际测量的热指数,对ENVI-met软件输出的热指数模型进行修正,以提高热舒适预测的准确性。(6)大冠幅、分枝点较低的树木能更有效地改善室外热舒适,树木片植或U型列植的布局方式相较于其他布局能提供更好的热舒适性。基于研究结果,本研究针对湿热地区户外露营地提出了设计优化建议,包括树种的选择、种植方式的优化以及露营地活动空间的合理划分等,旨在满足受访者对露营环境的偏好。其中,建议选择有较大冠幅和分枝点适中的树木,并采用片植或U型列植种植方式,以提升遮阳和通风效果。此外,应根据环境偏好划分露营地活动空间,并优化使用方式及提出环保措施。本研究的结果有助于城市规划师和管理部门了解和预测湿热地区露营者的热舒适和热适应行为,为创造舒适、健康的滨水露营地提供了设计参考,以缓解夏季露营地高温问题,提高滨水露营地空间的品质。同时,为推动露营旅游的可持续发展以及未来的相关研究提供了一定的借鉴。

关键词：热舒适度 ENVI-met模型树种选择与应用方式湿热地区滨水露营地设计

MnO2基压电自充电超级电容器的制备及其特性研究

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MnO2基压电自充电超级电容器的制备及其特性研究

作者：孙骆南昌航空大学

学位级别：硕士

调频连续波雷达人体生命体征检测系统研究与实现

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调频连续波雷达人体生命体征检测系统研究与实现

作者：骆宇西安理工大学

学位级别：硕士

呼吸、心跳是人体最为基本的生命体征,是判断人体生命活动和状态的基础。心血管以及呼吸系统疾病一直是慢性病致死原因的第一大要素,随着公众健康意识的增强以及电子产业不断地发展,人们对于生命体征信息的关注愈发强烈。针对传统检测... 详细信息

呼吸、心跳是人体最为基本的生命体征,是判断人体生命活动和状态的基础。心血管以及呼吸系统疾病一直是慢性病致死原因的第一大要素,随着公众健康意识的增强以及电子产业不断地发展,人们对于生命体征信息的关注愈发强烈。针对传统检测设备使用不便、场景受限等问题,本文采用调频连续波雷达进行非接触生命体征检测,其具有舒适度高、隐私性强、检测精度高以及全天候工作等优点。针对现有雷达生命体征检测算法存在自适应差、实时性弱以及模态混叠等问题,本文通过一系列算法对生命体征信号进行去噪、分离以及提取等操作,提高了雷达生命体征检测的实时性以及精确度。最后,设计开发出一套基于毫米波雷达的生命体征检测系统,实现对人体呼吸、心率以及心率变异性特征参数的实时检测。本课题主要的研究内容如下:1.针对雷达回波信号中存在大量静态、动态噪声问题,对雷达回波信号进行一系列预处理。首先,通过距离维傅里叶变换算法,确定人体目标的距离信息;其次,针对固定门限法在去除静态背景固体噪声是会出现边缘虚警的问题,本文通过改进的GO-CFAR算法对固体背景噪声进行抑制,有效解决边缘虚警问题;再次,针对I/Q双通道接收雷达回波信号会出现相位缠绕问题,对反正切函数二、三象限进行相位补偿,完成相位解缠处理;最后,针对呼吸谐波以及其他噪声会淹没心跳频率等问题,通过LMS自适应滤波器对其进行滤波处理。2.针对传统生命体征检测算法自适应差以及现有模态分解算法模态混叠等问题,本文提出一种SSA-FE-EWT的生命体征分离算法;通过SSA算法以及FE值不断优化EWT算法的分解效果,获取IMF分量频率更加纯净的呼吸、心跳信号;并对分解后的呼吸、心跳信号进行频域插值处理,提取更加精确的生命体征峰值频率,计算出更加精确的心跳频率以及呼吸频率;本文还通过HRV特征值计算对心跳信号进行进一步的处理,获取人体的心率变异性信息。3.针对现有接触式以及非接触式生命体征检测系统存在的缺点进行分析,本文设计并开发出一套基于调频连续波雷达的生命体征检测系统。该系统可以实时检测人体的呼吸率、心率以及心率变异性特征参数,并可在QT界面、OLED屏幕以及云端进行数据以及波形的实时显示,并对检测参数异常设有阈值报警功能。最终通过和华为手环进行实验,实验结果验证了本文所提出的生命体征检测算法以及生命体征检测系统的有效性以及可行性。

关键词：调频连续波雷达生命体征检测算法非接触启发式优化算法经验小波变换嵌入式