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骨髓基质细胞条件培养液通过p38信号转导通路诱导中脑神经干细胞分化

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第37期11卷 7329-7332页

作者：顾平温雅马芹颖王彦永崔冬生王铭维河北医科大学第一医院河北省脑老化与认知神经科学实验室

目的:骨髓基质细胞条件培养液能够诱导中脑神经干细胞分化为高比例神经元,但具体机制尚不十分清楚。选择p38信号转导通路作为观察切入点,剖析其在诱导分化途径中所扮演的角色。方法:实验于2006-04/2007-03在河北省脑老化与认知神经科学... 详细信息

目的:骨髓基质细胞条件培养液能够诱导中脑神经干细胞分化为高比例神经元,但具体机制尚不十分清楚。选择p38信号转导通路作为观察切入点,剖析其在诱导分化途径中所扮演的角色。方法:实验于2006-04/2007-03在河北省脑老化与认知神经科学实验室完成。①实验方法:将SD大鼠麻醉后处死,分离股骨和胫骨,冲洗骨髓腔,将洗出的细胞悬液离心,悬浮后接种,培养48h后弃去未贴壁细胞,更换新的培养基,6d左右可进行传代,约铺满85%瓶底后弃去培养液,更换为含2%B27的Neurobasal培养液,24h后经过离心的上清液即为骨髓基质细胞条件培养液。取新生SD大鼠中脑,机械分散成单细胞后离心弃上清,加入培养液分散过滤,接种时加入含2%B27的DMEM/F12培养基和20μg/L碱性成纤维细胞生长因子,7d左右的单个神经干细胞便可增殖形成球体。将第2～3代神经干细胞球种植于预先包被多聚赖氨酸的培养皿中,贴壁后更换培养液。设立对照组和抑制剂组,均加入骨髓基质细胞条件培养液,此外抑制剂组还加入p38信号转导通路抑制剂SB203580至终浓度4μmol/L。②实验评估:第7天进行免疫细胞化学染色,检测表达微管相关蛋白2的神经元与表达胶质原纤维酸性蛋白的星形胶质细胞在分化细胞中所占的比例。结果:①神经干细胞分化过程中的形态学变化及p38信号转导通路抑制剂的影响:加入抑制剂后24h,光镜下可见神经干细胞长出的细胞有两种类型:一类细胞体积较小,边缘整齐,立体感强,周围有光晕并在两极有突起,免疫荧光染色显示这类细胞微管相关蛋白2呈阳性表达,即为神经元;另一类细胞突起较粗大,不规则,多聚集在神经干细胞球的中央,呈放射状排列,免疫荧光染色表明这类细胞为胶质原纤维酸性蛋白阳性的星形胶质细胞。②神经元及星形胶质细胞在分化细胞中所占的比例:p38信号转导通路抑制剂作用于神经干细胞7d时,从神经干细胞分化成神经元的比例明显低于对照组(P<0.01),分化成星形胶质细胞的比例明显高于对照组(P<0.05)。结论:骨髓基质细胞条件培养液在促进神经干细胞分化为神经元的同时,能够抑制其分化为星形胶质细胞,提示骨髓基质细胞分泌的可溶性分子可能是通过p38信号转导通路起作用的。

关键词：转导干细胞神经元细胞分化

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骨髓间充质干细胞分泌的蛋白及其功能

中国组织工程研究与临床康复 2009年第14期13卷 2763-2766页

作者：马晓伟马芹颖王彦永顾平王铭维河北医科大学第一医院神经内科河北省脑老化与认知神经科学重点实验室河北省石家庄市050031

骨髓间充质干细胞的主要功能是支持和营养造血细胞,其提供的微环境由其分泌的可溶性物质、细胞表面分子以及细胞外基质组成,这三者中研究较多并且更有现实意义的是骨髓间充质干细胞分泌的可溶性物质。骨髓间充质干细胞除了可以分泌一些... 详细信息

骨髓间充质干细胞的主要功能是支持和营养造血细胞,其提供的微环境由其分泌的可溶性物质、细胞表面分子以及细胞外基质组成,这三者中研究较多并且更有现实意义的是骨髓间充质干细胞分泌的可溶性物质。骨髓间充质干细胞除了可以分泌一些造血功能必须的细胞因子,如白细胞介素6、白细胞介素7、白细胞介素8、白细胞介素11、白细胞介素12、白细胞介素14、白细胞介素15、白血病抑制因子、粒细胞集落刺激因子、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、巨噬细胞集落刺激因子和干细胞因子,长期支持造血干细胞的造血功能。还可以分泌许多神经营养因子,如脑源性神经营养因子、胶质源性神经营养因子、神经生长因子、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、睫状神经营养因子、肝细胞生长因子和血小板衍生的生长因子等,这些因子可以参与中枢神经系统的神经再生,促进损伤脑组织的生存与重塑。

关键词：骨髓基质细胞分泌功能

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线粒体功能障碍在阿尔茨海默病发病中的作用

临床荟萃 2012年第4期27卷 349-352页

作者：强静马芹颖王铭维河北医科大学第一医院神经内科河北省脑老化与认知神经科学实验室河北石家庄050031

阿尔茨海默病（AD）是一种常见的老年中枢神经系统退行性疾病,其主要的组织病理学特点是神经元的大量丢失和由病理性淀粉样蛋白（amyloid-β,Aβ）集聚而形成的细胞外老年斑的沉积,以及细胞内高度磷酸化的tau蛋白所形成的神经元纤维缠结... 详细信息

阿尔茨海默病（AD）是一种常见的老年中枢神经系统退行性疾病,其主要的组织病理学特点是神经元的大量丢失和由病理性淀粉样蛋白（amyloid-β,Aβ）集聚而形成的细胞外老年斑的沉积,以及细胞内高度磷酸化的tau蛋白所形成的神经元纤维缠结（neurofibrillary tangles,NFTs）＾[1]。

关键词：阿尔茨海默病线粒体线粒体功能障碍

骨髓基质细胞条件培养液诱导神经干细胞分化的信号转导机制

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细胞生物学杂志 2009年第3期31卷 424-428页

作者：马芹颖温雅顾平王彦永王铭维崔冬生刘力河北医科大学第一医院神经内科石家庄050031 河北省脑老化与认知神经科学实验室石家庄050031

研究MAPK信号转导通路在骨髓基质细胞条件培养液诱导神经干细胞分化中的作用及机制。用骨髓基质细胞条件培养液培养神经干细胞,并在培养体系中加入MAPK信号转导通路抑制剂PD98059(ERK1/2通路抑制剂)、SB203580(p38通路抑制剂)和genistin... 详细信息

研究MAPK信号转导通路在骨髓基质细胞条件培养液诱导神经干细胞分化中的作用及机制。用骨髓基质细胞条件培养液培养神经干细胞,并在培养体系中加入MAPK信号转导通路抑制剂PD98059(ERK1/2通路抑制剂)、SB203580(p38通路抑制剂)和genistin(JNK通路抑制剂),7天后经免疫荧光染色鉴定其后代中神经元和星形胶质细胞的比例,并将骨髓基质细胞条件培养液进行蛋白质微阵列检测。结果发现与对照组相比,PD98059和SB203580组神经干细胞分化为神经元比例降低,而星形胶质细胞比例增高,蛋白质微阵列测检发现骨髓基质细胞条件培养液中含有IL-4、IL-6、LIX和TNF-α4种细胞因子。研究结果显示骨髓基质细胞分泌的IL-4、IL-6、LIX和TNF-α4种细胞因子可能通过ERK1/2和p38信号转导通路调节神经干细胞的分化。

关键词： MAPK信号转导通路神经干细胞骨髓基质细胞细胞因子蛋白质微阵列分析

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骨髓基质细胞分泌蛋白的蛋白质质谱分析

解剖学报 2010年第1期41卷 60-64页

作者：马芹颖顾平王彦永王铭维崔冬生温雅刘力河北医科大学第一医院神经内科石家庄050031 河北省脑老化与认知神经科学实验室石家庄050031

目的通过Shotgun蛋白质组学分析,初步检测骨髓基质细胞(BMSCs)条件液中可能含有的蛋白质。方法将BMSCs条件液混匀后经超滤浓缩分为大于5kD和小于5kD两部分,并培养神经干细胞(NSCs),观察其后代中神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的比... 详细信息

目的通过Shotgun蛋白质组学分析,初步检测骨髓基质细胞(BMSCs)条件液中可能含有的蛋白质。方法将BMSCs条件液混匀后经超滤浓缩分为大于5kD和小于5kD两部分,并培养神经干细胞(NSCs),观察其后代中神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的比例,鉴定出能调节NSCs分化的部分,并进行Shotgun蛋白质组学分析。结果BMSCs条件液分子量大于5kD的部分可以调节NSCs向神经元和少突胶质细胞方向分化,这部分条件液先经过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)发现大部分蛋白集中在14kD以上,将蛋白条带酶解以后,经Shotgun分析共鉴定到456种蛋白质,其中154个相似蛋白质,17个假想蛋白质,56个未知蛋白质,剩余的229个蛋白质中大多为细胞骨架蛋白、分泌蛋白、信号转导蛋白、酶类和转运蛋白等。结论BMSCs分泌的多种蛋白质对NSCs的分化起调节作用,明确了BMSCs条件液中可能含有的成分。

关键词：骨髓基质细胞神经干细胞 Shotgun蛋白质组学分析

基于游戏的脑电神经反馈训练对认知功能改善作用的研究

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诊断学理论与实践 2022年第1期21卷 41-45页

作者：马少辰郭昕王铭维王惠君余启军苏文月王华龙马芹颖河北医科大学第一医院神经内科河北石家庄050031 河北省脑老化与认知神经科学重点实验室河北石家庄050031 秦皇岛市惠斯安普医学系统股份有限公司河北秦皇岛066000

目的:采用基于游戏的脑电神经反馈系统训练认知障碍患者,观察其认知功能的改善状况。方法:纳入以记忆力下降为主的认知障碍患者52例,先对其进行简易精神状态检查量表(Mini-Mental State Examination,MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(Montre... 详细信息

目的:采用基于游戏的脑电神经反馈系统训练认知障碍患者,观察其认知功能的改善状况。方法:纳入以记忆力下降为主的认知障碍患者52例,先对其进行简易精神状态检查量表(Mini-Mental State Examination,MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(Montreal Cognitive Assessment,MoCA)、阿尔茨海默病评定量表-认知量表(Alzheimer′s Disease Assessment Scale-Cognitive section,ADAS-cog)评估。5 d后,对其进行连续10 d的脑电神经反馈“意念力蚂蚁”游戏训练,每天训练30 min。在训练前、训练第10天采集患者的脑电图,训练完成后,再次评估患者的MMSE、MoCA、ADAS-cog评分。结果:经过训练,患者的MMSE、MoCA、ADAS-cog量表总分提高,训练前得分分别为(23.10±2.82)分、(18.63±4.10)分、(14.76±5.30)分,训练后分别为(26.06±2.95)分、(21.88±3.94)分、(12.15±5.15)分。患者的认知功能总体改善,其中记忆力改善最为明显,训练前MMSE、MoCA、ADAS-cog量表记忆力部分得分分别为(1.55±0.77)分、(1.33±1.28)分、(4.35±1.11)分,训练结束后的MMSE、MoCA、ADAS-cog量表记忆力部分得分分别为(2.16±0.80)分、(2.29±1.34)分、(3.93±1.30)分,训练前、后差异有统计学意义(P<0.001),同时对患者的脑电复杂度进行计算分析,发现其脑电复杂度提高,以左侧前额叶改善为主。结论:基于游戏的脑电神经反馈系统训练可显著提高认知障碍患者的认知功能,并能提高其左侧前额叶的脑电复杂度。

关键词：脑电神经反馈记忆力下降认知障碍

骨髓基质细胞条件培养液调节神经干细胞分化有效成分的蛋白质微阵列分析

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解剖学报 2008年第6期39卷 845-849页

作者：顾平马芹颖王彦永温雅王铭维崔冬生刘力耿媛河北医科大学第一医院神经内科石家庄050031 河北省脑老化与认知神经科学实验室石家庄050031

目的检测骨髓基质细胞条件培养液(N-CM)中诱导神经干细胞(NSCs)向神经元方向分化的细胞因子,探讨骨髓基质细胞(BMSCs)调节NSCs分化的机制。方法将收集到的N-CM混匀后经超滤浓缩分为大于5kD和小于5kD两部分,用这两部分培养液分别培养NSCs... 详细信息

目的检测骨髓基质细胞条件培养液(N-CM)中诱导神经干细胞(NSCs)向神经元方向分化的细胞因子,探讨骨髓基质细胞(BMSCs)调节NSCs分化的机制。方法将收集到的N-CM混匀后经超滤浓缩分为大于5kD和小于5kD两部分,用这两部分培养液分别培养NSCs,确定其中能促进NSCs分化为高比例神经元的部分并进行大鼠蛋白质微阵列检测。结果N-CM分子量大于5kD的部分可以促进NSCs分化为高比例神经元,并通过蛋白质微阵列检测,与单纯骨髓基质培养液相比,有7种细胞因子的表达量上调了1.5倍,分别是CINC-3、CNTF、IFN-γ、IL-1α、MCP-1、TIMP-1和VEGF。结论BMSCs分泌的可溶性分子对NSCs分化为神经元有促进作用,其中某些分子量大于5KD的细胞因子可能在这一调节作用中发挥效应。

关键词：神经干细胞骨髓基质细胞条件培养液蛋白质微阵列细胞因子超滤浓缩免疫组织化学

磁刺激对小鼠原代海马神经元突触素、生长相关蛋白及脑源性神经营养因子表达的影响

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第二军医大学学报 2011年第10期32卷 1096-1102页

作者：马隽张展翅崔慧先王铭维王彦永马芹颖河北医科大学基础医学院石家庄050017 河北省脑老化与认知神经科学实验室石家庄050017 河北体育学院石家庄050001

目的观察磁刺激对原代海马神经元形态及突触素(SYN)、生长相关蛋白43(GAP43)、脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,探讨磁刺激对突触可塑性的影响及可能机制。方法原代海马神经元随机分为对照组、假刺激组及40%(1Hz,0.76T)、60%(1Hz,1.... 详细信息

目的观察磁刺激对原代海马神经元形态及突触素(SYN)、生长相关蛋白43(GAP43)、脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,探讨磁刺激对突触可塑性的影响及可能机制。方法原代海马神经元随机分为对照组、假刺激组及40%(1Hz,0.76T)、60%(1Hz,1.14T)、80%(1Hz,1.52T)最大磁刺激输出强度组,各刺激组自细胞接种后第2～6天接受磁刺激,连续5d;假刺激组置于相同磁场装置环境,但不接受磁刺激。各组细胞于第7天相同时间取材。采用扫描电镜、细胞免疫荧光法、蛋白质印迹及RT-PCR等方法观察神经元形态变化及SYN、GAP43与BDNF蛋白、mRNA的表达。结果 40%强度组神经元突起长度增长、胞间神经联系增多,SYN免疫反应性、BDNF免疫反应性及蛋白表达均高于对照组(P<0.05,P<0.01),GAP43免疫反应性及蛋白水平未见明显升高,SYN、GAP43与BDNF mRNA表达量高于对照组(P<0.05);60%强度组突起长度与数量增加(P<0.01)、交织成密集网络,SYN、GAP43与BDNF免疫反应性、蛋白及mRNA表达量均高于对照组(P<0.01);80%强度组突起数目、长度增加,同时有细胞损伤现象,GAP43免疫反应性、BDNF免疫反应性及蛋白水平高于对照组(P<0.05,P<0.01),SYN免疫反应性及蛋白表达与对照组相比差异无统计学意义,SYN、GAP43及BDNF mRNA表达增加(P<0.05,P<0.01)。结论磁刺激通过促进原代海马神经元BDNF的合成或分泌,上调SYN、GAP43的表达,影响神经元形态,可能在调控突触可塑性、促进神经网络构建方面发挥重要作用;不同磁刺激参数刺激效果不同。

关键词：磁刺激突触神经网原代海马神经元

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狂犬病误诊为病毒性脑炎一例分析

临床误诊误治 2013年第11期26卷 6-7页

作者：张永志马芹颖王彦永顾平河北医科大学附属第一医院神经内科石家庄050031

目的分析狂犬病的临床表现、发病机制及易误诊原因,以期引起临床医生的重视。方法回顾性分析狂犬病误诊为病毒性脑炎1例的临床资料。结果本例因触水后有汗毛竖起感、发作性步态不稳、视物成双、精神异常就诊。于外院影像学检查诊断为脑... 详细信息

目的分析狂犬病的临床表现、发病机制及易误诊原因,以期引起临床医生的重视。方法回顾性分析狂犬病误诊为病毒性脑炎1例的临床资料。结果本例因触水后有汗毛竖起感、发作性步态不稳、视物成双、精神异常就诊。于外院影像学检查诊断为脑动脉供血不足,予相关治疗后无好转。转我院,经脑电图、痰涂片等医技检查诊断为:发热原因待查?病毒性脑炎。予对症治疗无缓解,追问病史有狗抓伤史并未注射狂犬疫苗,考虑狂犬病。转传染病院治疗,1 d后因呼吸及循环功能衰竭死亡。结论临床遇及狂犬病可疑病例时,要详细追问病史,并结合狂犬病特征性症状进行诊断,以减少误诊。

关键词：狂犬病误诊脑炎,病毒性