检索结果-南通市图书馆

作者：马少鸿广东海洋大学

学位级别：硕士

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是石斑鱼弧菌病主要病原,常引起患病鱼深层皮肤溃疡、胃肠疾病和眼部病变,导致石斑鱼高发病率和死亡率,造成重大经济损失。目前在石斑鱼养殖中主要应用抗生素治疗弧菌病,但抗生素的滥用导致耐药细菌的出现和... 详细信息

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是石斑鱼弧菌病主要病原,常引起患病鱼深层皮肤溃疡、胃肠疾病和眼部病变,导致石斑鱼高发病率和死亡率,造成重大经济损失。目前在石斑鱼养殖中主要应用抗生素治疗弧菌病,但抗生素的滥用导致耐药细菌的出现和药物残留等生态问题,影响石斑鱼的食品安全。疫苗接种是一种防控石斑鱼弧菌病和减少抗生素使用的替代选择,因此开发安全有效的哈氏弧菌疫苗将有较好的市场前景。本研究通过研究哈维氏弧菌鞭毛基体蛋白FlgE的免疫原性并制备亚单位疫苗和核酸疫苗,并通过添加壳寡糖和油佐剂进一步评价疫苗的效果,研究结果将为下一步研制抗弧菌商用型疫苗奠定基础。主要结果如下:(1)基于哈维氏弧菌全基因组中克隆flgE基因,生物信息学分析表明flgE基因全长1200bp,编码399个氨基酸,相对分子量为41.44 ku,理论等电点p I为4.58,无信号肽。亚细胞定位预测FlgE是一种细胞外蛋白,N-C端为一个FlgE超家族结构域。通过多重序列比对比较分析发现,FlgE氨基酸序列较为保守,与其它弧菌属同源性达到85%以上。将哈维氏弧菌flgE基因转入原核表达载体pET28a中构建重组表达载体pET28a-flgE,转入到大肠杆菌BL21(DE3)进行原核表达,对重组菌株表达时间、温度和异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)浓度表达条件进行优化,使用镍柱亲和层析纯化获得重组FlgE蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blotting分析和验证重组FlgE蛋白纯化效果。(2)将纯化后的重组FlgE蛋白用PBS稀释后与壳寡糖(Chitosan Oligosaccharide,COS)及油佐剂混合,用PBS组作为对照,设置PBS组、FlgE蛋白组、FlgE蛋白+COS组、FlgE蛋白+OIL组和FlgE蛋白+COS+OIL组腹腔注射免疫珍珠龙胆石斑鱼(♀***×♂***),注射石斑鱼蛋白终浓度为25μg/尾,壳寡糖终浓度10μg/尾,油佐剂与抗原比例为7:3(W/W)。在免疫后第7、14、21、28、35和42d抽取的试验石斑鱼血液并离心获得血清,测定血清中过氧化氢酶(Catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和溶菌酶(Lysozyme,LZM)酶活性,通ELISA检测抗体效价;提取肝脏、头肾、脾脏及胸腺组织的总m RNA后应用qRT-PCR测定CD8-α、TNF-α和My D88等免疫相关基因的转录水平;最后用100μL 5.7076×10cfu/m L的哈维氏弧菌对免疫后6w的试验石斑鱼进行攻毒并观察14d内的死亡情况。结果显示,免疫后各疫苗组均能提高血清中CAT、SOD和LZM酶活性及Ig M特异性抗体的水平,且呈先上升后缓慢下降的时间依赖关系,含有COS组酶活水平和抗体较其它疫苗组上调更高,含有OIL佐剂的疫苗组在4-6w显著高于其他试验组,其中FlgE+COS+OIL组酶活和抗体水平在各时期均显著高于其他试验组。qRT-PCR结果显示免疫组相对对照组的免疫基因表达水平显著上调,FlgE组和FlgE+COS达到峰值的时间为3-4w。含油佐剂组达到峰值的时间为5-6w,表明不同佐剂的疫苗组能不同程度地刺激组织中免疫相关基因的表达,其中FlgE+COS+OIL组各免疫基因上调显著高于其他试验组。FlgE蛋白组、FlgE蛋白+COS组、FlgE蛋白+OIL组和FlgE蛋白+COS+OIL组相对免疫保护率RPS(Relative percent survival)分别为50%、66.6%、66.7%和77.7%。实验结果表明,重组亚单位疫苗FlgE能增强石斑鱼抗哈维氏弧菌的免疫保护力,且添加COS和OIL佐剂能进一步増强亚单位疫苗的免疫保护效果。(3)构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-flgE,通过与COS及油佐剂的搭配设置pcDNA3.1组、p FlgE组、p FlgE+COS组、p FlgE+OIL组和p FlgE+COS+OIL组,注射石斑鱼质粒终浓度为25μg/尾,壳寡糖终浓度10μg/尾,油佐剂与抗原比列为7:3(W/W)。肌肉注射免疫石斑鱼后检测血清指标和组织中免疫基因转水平。免疫6w后使用100μL 5.7076×10cfu/m L的哈维氏弧菌攻毒,结果显示,相比于空质粒组,接种p FlgE组、p FlgE+COS组、p FlgE+OIL组和p FlgE+COS+OIL组的石斑鱼RPS分别为56%、68%、76%和88%。表明疫苗组能有效提高石斑鱼的免疫保护力,且p FlgE+COS+OIL组的免疫保护力在疫苗组中最高。免疫后各疫苗组石斑鱼

关键词：哈维氏弧菌 FlgE 疫苗免疫佐剂

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主动脉弓降部疾病的外科治疗

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南方医科大学学报 2008年第4期28卷 654-657页

作者：马少鸿范瑞新吴若彬郑少忆广东省人民医院广东省心血管病研究所心血管外科广东广州510100

目的总结需要外科手术的主动脉弓降部疾病的治疗方法。方法对2005～2007接受外科手术治疗的42例主动脉弓降部疾病作回顾性分析。结果病因包括主动脉夹层(DebakeyIII型)12例、真性动脉瘤13例、先天性主动脉缩窄12例(合并动脉导管未闭1例... 详细信息

目的总结需要外科手术的主动脉弓降部疾病的治疗方法。方法对2005～2007接受外科手术治疗的42例主动脉弓降部疾病作回顾性分析。结果病因包括主动脉夹层(DebakeyIII型)12例、真性动脉瘤13例、先天性主动脉缩窄12例(合并动脉导管未闭1例)、假性动脉瘤3例以及降主动脉腔内支架术后内漏2例。急诊手术5例,均为主动脉夹层DebakeyIII型破入胸腔,死亡2例;限期、择期手术37例,死亡2例(均为动脉瘤),死亡率5.4%。术后永久性神经系统并发症1例,可逆性神经系统并发症5例。手术方式包括非体外循环下行人造血管分流术12例(同时行动脉导管切断缝合术1例)、深低温停循环下行左半弓+近段降主动脉置换10例(同时行食道造瘘术1例)、近中段降主动脉置换17例、次全降主动脉置换3例。结论成人主动脉缩窄进行人造血管分流术矫治,手术简化、效果确切;主动脉弓降部动脉瘤大多需要在深低温停循环下进行手术治疗,根据病变范围决定降主动脉置换长度,熟练的外科吻合技术和深低温停循环技术是减少术后神经系统并发症的关键。

关键词：主动脉疾病/外科学弓降部深低温停循环

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戏曲苑和戏曲舞台上的文史知识

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文史知识 1998年第7期 44-45页

作者：马少鸿

文章千载事, 史学鉴古今。知音遍寰宇, 识我中华魂。《文史知识》创刊五周年时,我曾写过这首贺诗。她确实是一个很有特色、很有影响的刊物,不仅是青年人了解祖国灿烂的古代文化的理想的读物,而且对于研究、教学者,也有参考价值。看了今... 详细信息

文章千载事, 史学鉴古今。知音遍寰宇, 识我中华魂。《文史知识》创刊五周年时,我曾写过这首贺诗。她确实是一个很有特色、很有影响的刊物,不仅是青年人了解祖国灿烂的古代文化的理想的读物,而且对于研究、教学者,也有参考价值。看了今年的几期,我感到这个刊物又恢复了当年的活力,令人欣慰。现在,《文史知识》要开办"戏曲苑"这样一个新的栏目,以介绍戏曲舞台上的文史知识,这是一件非常有意义的举措。戏曲是中国源远流长的民族文化的重要组成部分,从参军戏、元杂剧、明传奇,到昆曲、京剧及各种地方戏曲,既历史悠久,又丰富多彩。在世界戏剧文化历史上占有极其重要的地位。

关键词：文史知识戏曲舞台地方戏曲重要组成部分参考价值历史悠久民族文化元杂剧青年人参军戏

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急性主动脉夹层及夹层动脉瘤的外科治疗

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广东医学 2007年第8期28卷 1254-1256页

作者：马少鸿吴若彬范瑞新郑少忆广东省人民医院心血管病研究所心外科广州510100

目的总结急性主动脉夹层及夹层动脉瘤的外科治疗经验.方法急性主动脉夹层及夹层动脉瘤患者50例,行Bentall手术（或＋升主动脉置换）共12例（同时行二尖瓣成形2例）,升主动脉置换（或＋Bentall）＋部分弓置换共11例（其中同时行二尖瓣... 详细信息

目的总结急性主动脉夹层及夹层动脉瘤的外科治疗经验.方法急性主动脉夹层及夹层动脉瘤患者50例,行Bentall手术（或＋升主动脉置换）共12例（同时行二尖瓣成形2例）,升主动脉置换（或＋Bentall）＋部分弓置换共11例（其中同时行二尖瓣成形1例）,升主动脉置换（或＋Bentall/主动脉瓣成形）＋全弓置换8例,升主动脉置换（或＋Bentall）＋全弓置换＋降主动脉血管内支架植入3例,主动脉瓣成形＋升主动脉置换5例,Bentall（或＋升主动脉置换＋部分弓置换）＋冠脉搭桥术3例,Wheat＋弓置换2例,降主动脉人造血管置换6例.所有夹层手术均在深低温停循环下进行.40例Standford A型通过右锁骨下动脉插管进行选择性脑灌注.结果所有病例手术均成功,术后死亡5例.死于多器官功能衰竭、脑部并发症1例,死于消化道出血、急性肾功能衰竭1例,死于低心排综合征1例,术后因吻合口出血、远端动脉瘤破裂死于失血性休克各1例.其余均顺利恢复出院,随访6～36 个月,所有患者生活工作正常.远期因远端夹层进展行再次手术2例.结论在深低温停循环下、同时通过右锁骨下动脉进行选择性脑灌注应可以成为升、弓主动脉夹层手术的基本方法,可使远端吻合在开放下进行、并充分保证脑部灌注;Standford B型夹层仅有少数病例需要外科手术;依夹层撕裂范围及破口位置决定手术方式是保证手术效果的关键.

关键词：主动脉夹层动脉瘤外科手术

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388例主动脉瘤外科治疗体会

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南方医科大学学报 2008年第12期28卷 2284-2286页

作者：马少鸿范瑞新吴若彬郑少忆黄克力范小平广东省人民医院广东省心血管病研究所心血管外科广州广州510100

目的总结388例主动脉瘤的外科手术治疗结果。方法388例病人中男性263例，女性125例，年龄范围为19-73岁，平均50．2±8．3岁。马凡氏综合征139例（其中有58例合并夹层动脉瘤），夹层动脉瘤152例，胸降主动脉瘤50例，腹主动脉瘤29例，胸... 详细信息

目的总结388例主动脉瘤的外科手术治疗结果。方法388例病人中男性263例，女性125例，年龄范围为19-73岁，平均50．2±8．3岁。马凡氏综合征139例（其中有58例合并夹层动脉瘤），夹层动脉瘤152例，胸降主动脉瘤50例，腹主动脉瘤29例，胸腹主动脉瘤6例，假性动脉瘤12例。手术方式：根据主动脉瘤的类型选择不同的术式。结果388例主动脉瘤病人中治愈出院的为344例，治愈出院率为88．6％。自动出院12例，死亡32例，总死亡率为8.3％，其中马凡氏综合征手术死亡率最低（6．5％），夹层动脉瘤破裂者死亡率最高23％（7／30）。结论及时的外科手术是治疗主动脉瘤的最有效方法。马凡氏综合征和Stanford A型夹层动脉瘤应尽快手术．而stanford B型夹层动脉瘤可根据病情采用药物、血管内支架和外科手术等综合治疗方法。

关键词：主动脉瘤马凡氏综合征夹层动脉瘤外科手术

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主动脉弓手术停循环与脑灌注期间脑区域氧饱和度监测

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中国临床解剖学杂志 2009年第4期27卷 493-496,499页

作者：范小平范瑞新吴若彬郑少忆马少鸿田中国义广东省心血管病研究所心外科广州510080 日本福井大学心血管外科

目的:明确深低温停循环(DHCA)与脑灌注相结合进行主动脉弓手术期间脑区域氧饱和度监测(rSO2)的价值。方法:28位病人的rSO2被监控,数据被统计分析。结果:DHCA的平均停循环时间是(59±17.1)min,外科手术的结果比较满意,住院期间死亡2例,... 详细信息

目的:明确深低温停循环(DHCA)与脑灌注相结合进行主动脉弓手术期间脑区域氧饱和度监测(rSO2)的价值。方法:28位病人的rSO2被监控,数据被统计分析。结果:DHCA的平均停循环时间是(59±17.1)min,外科手术的结果比较满意,住院期间死亡2例,死亡率(5.6%)。虽然全部病人兼有脑灌注支持,rSO2在DHCA期间仍然逐渐下降,平均降到(47±9.7)%,在复温末期又恢复到它的最初水平。有2位病人rSO2降低最明显,在长达83和88min的DHCA之后rSO2分别从57%和56%下降到27%和29%,这2位病人最终发展永久的神经系统损害。我们同时考察了End-rSO2和△-rSO2两个参数,在DHCA期间,脑灌注的灌注流速和这两个参数都存在线性相关。结论:(1)尽管DHCA和一定方式脑灌注的结合能提供大脑更有效的保护,这种保护措施仍然有一个安全的时限;(2)NIRS能实时监控脑rSO2,可用于监测大脑保护是否充分,有利于DHCA下脑灌注参数的调整。

关键词：脑区域氧饱和度近红外分光学深低温停循环脑灌注主动脉弓手术

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基于cpsA基因的海豚链球菌LAMP检测方法的建立

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上海海洋大学学报 2023年第1期32卷 31-39页

作者：孙国荣马少鸿林桂香万小菊黄郁葱简纪常蔡双虎广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088

基于荚膜多糖cpsA基因设计引物,建立海豚链球菌可视化环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以快速检测鱼类养殖中的海豚链球菌。结果表明,LAMP最佳反应条件为65℃反应20 min,镁离子浓度为1.2 mmol/L、dNTP... 详细信息

基于荚膜多糖cpsA基因设计引物,建立海豚链球菌可视化环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以快速检测鱼类养殖中的海豚链球菌。结果表明,LAMP最佳反应条件为65℃反应20 min,镁离子浓度为1.2 mmol/L、dNTPs浓度为0.64 mmol/L、内外引物比例为16∶1。特异性检测结果表明:该方法能特异性检出海豚链球菌,对无乳链球菌和其他14种菌检测结果均呈阴性;灵敏度检测结果表明,该LAMP方法灵敏度为2.12×10^(-5)ng/μL,比PCR检测方法灵敏度高100倍;适用性分析结果表明,该LAMP方法在模板中存在鱼类基因组干扰下也能正确完成检测。研究中建立的LAMP检测方法为海豚链球菌的检测提供一种可视化、灵敏、成本低的快速检测技术。

关键词：海豚链球菌cpsA LAMP 可视化检测

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“杂交手术”治疗主动脉夹层

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中华胸心血管外科杂志 2008年第3期24卷 171-173页

作者：马少鸿张镜芳范瑞新吴若彬黄克力广东省人民医院广东省心血管病研究所心脏外科广州510100

目的总结主动脉夹层病人行人工血管置换同时术中植入血管内支架（即“杂交手术”）的外科经验。方法主动脉夹层6例中急性StandfordA型4例，其中破口分别在升主动脉2例、降主动脉1例，升降主动脉均有破口1例。行升主动脉并全弓置换同时... 详细信息

目的总结主动脉夹层病人行人工血管置换同时术中植入血管内支架（即“杂交手术”）的外科经验。方法主动脉夹层6例中急性StandfordA型4例，其中破口分别在升主动脉2例、降主动脉1例，升降主动脉均有破口1例。行升主动脉并全弓置换同时术中于降主动脉真腔内置入血管内支架（同时行主动脉瓣成型2例、Bentall手术1例）；慢性StandfordB型主动脉夹层2例，均为介入无法完成者，破口较大、均在降主动脉起始部、左锁骨下动脉下方，行近端降主动脉置换同时术中于远端降主动脉真腔内置入血管内支架。术后2周及3个月复查全主动脉螺旋Cr，了解胸腹主动脉、人工血管及血管内支架情况。结果所有病人手术成功，体外循环时间38～228min（平均92min）。StandfordA型夹层升主动脉阻断118～186min（平均136min）、选择性脑灌注33～68min（平均49min）；StandfordB型夹层：1例在上、下半身分别停循环22、28min下完成手术，另1例常温下不停循环、保持下半身灌注完成手术。术后恢复顺利，治愈出院。术后2周及3个月复查主动脉螺旋CT示人工血管血流通畅，血管内支架无内瘘及移位，支架远端主动脉真腔扩大、假腔明显缩小。结论对于夹层撕裂范围广泛、多破口的主动脉夹层病人，行近端夹层动脉瘤切除、人工血管置换同时在远端真腔内植入血管内支架，是一种安全、有效、经济的手术方法。

关键词：主动脉动脉瘤夹层人工血管心脏外科手术支架

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斜带石斑鱼肠道乳酸菌的分离、鉴定及特性分析

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基因组学与应用生物学 2019年第10期38卷 4447-4455页

作者：伍元植韦光本简纪常蔡双虎汤菊芬黄郁葱马少鸿广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室

从健康斜带石斑鱼肠道中分离出3株形态特征不同的菌株,经革兰氏染色、氧化酶及触酶反应筛选出3株革兰氏阳性球菌,通过生化鉴定和16S rRNA测序结果发现他们分别为粪肠球菌、乳酸片球菌和乳酸乳球菌,命名为WYZ-1、WYZ-2和WYZ-3。选取嗜水... 详细信息

从健康斜带石斑鱼肠道中分离出3株形态特征不同的菌株,经革兰氏染色、氧化酶及触酶反应筛选出3株革兰氏阳性球菌,通过生化鉴定和16S rRNA测序结果发现他们分别为粪肠球菌、乳酸片球菌和乳酸乳球菌,命名为WYZ-1、WYZ-2和WYZ-3。选取嗜水气单胞菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈氏弧菌以及大肠杆菌以琼脂扩散法测定WYZ-1、WYZ-2和WYZ-3的抑菌活性,结果表明WYZ-3对大肠杆菌无抑制作用,对溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈氏弧菌和嗜水气单胞菌都有较显著的抑制作用,其中对溶藻弧菌和副溶血弧菌抑菌效果最好,抑菌直径为21.5~23.5 mm;粪肠球菌和乳酸片球菌均对5种致病菌有抑制作用,抑菌直径为9.5~22.5 mm。利用药敏纸片琼脂扩散法检测WYZ-1、WYZ-2和WYZ-3对34种常用抗生素的药敏性,结果表明3株乳酸菌均对氨基糖类、喹诺酮类多数、复方新诺明、多粘菌素B和氨曲南表现为耐药,对青霉素类多数、四环素类、大环内脂类及克林霉素和氯霉素敏感;WYZ-3对头孢类抗生素表现为敏感,WYZ-1和WYZ-2则对大部分头孢类抗生素表现为耐药。本研究表明三株乳酸菌均具有广谱抑菌性和对绝大多数抗生素有耐药性。

关键词：乳酸菌斜带石斑鱼生物特性抑菌谱药敏性

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哈维氏弧菌glyA基因的克隆及原核表达分析

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广东农业科学 2020年第6期47卷 84-90页

作者：孙国荣马少鸿韦光本张依琳谭慧明蔡双虎广东海洋大学水产学院/广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088

【目的】哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是存在于海水中的正常菌群,但近几年大密度养殖使它成为海水鱼致病甚至死亡的原因之一。对哈维氏弧菌ZJ0603株中的glyA基因进行克隆及原核表达分析,以期为下一步研制亚单位疫苗奠定基础。【方法】应... 详细信息

【目的】哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是存在于海水中的正常菌群,但近几年大密度养殖使它成为海水鱼致病甚至死亡的原因之一。对哈维氏弧菌ZJ0603株中的glyA基因进行克隆及原核表达分析,以期为下一步研制亚单位疫苗奠定基础。【方法】应用PCR技术克隆哈维氏弧菌菌株ZJ0603的glyA基因,并对其编码的丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxylmethyltransferase,SHMT)进行理化性质、信号肽、亚细胞定位及高级结构分析。将克隆获得的glyA基因与表达载体pET-28a连接构建重组质粒pET-28a-glyA,然后构建BL21-pET-28a-glyA重组菌株,测序后选取正确的菌株用IPTG诱导并对重组蛋白进行Western blot分析鉴定。对表达重组菌株BL21-pET-28a-glyA的表达条件进行优化以获得大量蛋白。【结果】生物信息学分析结果表明,glyA基因全长为1296 bp,共编码431个氨基酸,SHMT的理论等电点为6.18,不稳定系数为28.66,总平均亲水性为-0.200,整体表现为亲水且分布在细胞质中,预期蛋白分子量为46.60 ku。成功构建表达重组质粒pET-28a-glyA并转入表达菌株中,经IPTG诱导后进行Western blot分析,结果表明成功获得了SHMT重组蛋白。【结论】用控制变量法对表达条件优化后发现,IPTG最佳诱导时间、浓度以及温度分别为4 h、0.4 mmol/L和37℃。

关键词：哈维氏弧菌 glyA基因克隆原核表达条件优化

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