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A型肉毒毒素对挛缩性瘢痕的治疗及机理研究

A型肉毒毒素对挛缩性瘢痕的治疗及机理研究

作者：颜彤彤中国人民解放军医学院

学位级别：硕士

目的：通过观察A型肉毒毒素(botulinum toxin type A, BTXA)对挛缩性瘢痕(scar contracture, SC)的治疗效果及分析不同浓度BTXA对瘢痕组织成纤维细胞(fibroblast, FB)中α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和肌球蛋白-Ⅱ(myosin-Ⅱ)表达水平的影响,同时比较BTXA和曲安奈德(triamcinolone acetonide, TAC)对SC的治疗效果,以期为临床合理应用BTXA治疗挛缩性瘢痕提供理论依据。方法：1.选取10例挛缩性瘢痕患者,每人选取两处挛缩性瘢痕,随机分为BTXA组和空白对照组,注射前测量各组瘢痕长轴长度,并于注射后1、3、6个月再次测量其长度变化。2.从手术切除的SC组织中分离培养原代FB,选取3～5代FB随机分至正常组、低浓度BTXA组(1U/106cells)和高浓度BTXA组(2.5U/106cells)。分别于药物作用后1、4、7天观察FB的生长状况,用免疫印迹法对FB中α-SMA及myosin-Ⅱ的表达量进行测定。3.选取26例SC患者,随机分为BTXA组和TAC组,通过比较前后差值(1次/月,共6个月)评价药物疗效。切取上述各组瘢痕组织行病理学检查,通过HE染色观察形态学改变,免疫组织化学染色观察α-SMA及myosin-Ⅱ的表达情况。结果：1. BTXA组较空白对照组瘢痕挛缩程度明显减轻(P＜0.05),尤以6个月时差异明显(BTXA组和空白对照组长度差值分别为1.103±0.158cm和0.221±0.187cm)。2.分离培养的FB中,正常组生长状态良好;低浓度BTXA组第4天时细胞增殖速度减慢;高浓度BTXA组第4天时细胞部分出现核固缩,第7天时细胞排列较疏松,视野呈现较多凋亡的细胞。α-SMA及myosin-Ⅱ的表达量在第4天时正常组显著高于BTXA作用组,第7天时低浓度BTXA组与高浓度BTXA组间亦存在显著差异,差异有统计学意义(P<0.05)。3. BTXA和TAC分别作用于SC1个月后,BTXA组较TAC组瘢痕挛缩程度明显减轻(P＜0.05),尤以6个月时差异明显(BTXA组和TAC组瘢痕长度差值分别为1.23±0.42cm和0.56±0.33cm。常规HE染色观察到BTXA组瘢痕组织内胶原纤维排列稀疏且规则,瘢痕内成纤维细胞数量较空白对照组减少。免疫组化结果显示BTXA组瘢痕内α-SMA及myosin-Ⅱ的表达量较空白对照组明显减少(P＜0.05)。结论：LBTXA对SC有一定的治疗效果,且副作用小***治疗SC的作用机理主要是BTXA能够促使FB凋亡,促进瘢痕内胶原纤维的重新排列,减少FB中α-SMA及myosin-Ⅱ的表达,且在一定范围内,浓度越高抑制作用越明显。3. BTXA治疗挛缩性瘢痕操作简单、效果优于TAC,值得推广应用。

关键词： A型肉毒毒素挛缩性瘢痕 α平滑肌肌动蛋白肌球蛋白-Ⅱ

MAPK信号通路与病理性瘢痕相关性的研究进展

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中华整形外科杂志 2016年第3期32卷 234-236页

作者：颜彤彤陈敏亮解放军总医院第一附属医院烧伤整形四病区北京100048

病理性瘢痕主要包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩，是人类真皮组织所特有的一种纤维代谢性疾病，其主要特征为过度的纤维化和胶原蛋白的沉积。病理性瘢痕形成原因和患者年龄、发病部位、皮肤张力、色素、感染状态、异物性质、遗传等具有密切的... 详细信息

病理性瘢痕主要包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩，是人类真皮组织所特有的一种纤维代谢性疾病，其主要特征为过度的纤维化和胶原蛋白的沉积。病理性瘢痕形成原因和患者年龄、发病部位、皮肤张力、色素、感染状态、异物性质、遗传等具有密切的关系，然而其确切病因及形成机制目前尚未完全清楚。为探索病理性瘢痕的形成机制及有效治疗手段，国内外学者进行了大量的病理学、遗传学及分子生物学研究。

关键词：病理性瘢痕形成 MAPK信号通路相关性增生性瘢痕代谢性疾病分子生物学瘢痕疙瘩真皮组织

基于全基因组重测序技术检测与瘢痕疙瘩相关基因拷贝数变异的初步研究

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中华外科杂志 2014年第6期52卷 446-449页

作者：刘畅滕国栋陈敏亮马奎颜彤彤解放军医学院北京100853 解放军总医院第一附属医院烧伤整形科

目的利用全基因重测序技术初步探讨与瘢痕疙瘩相关的基因组拷贝数变异（CNV）.方法收集1个瘢痕疙瘩家系,共4代27人,选取该家系中5例（4例瘢痕疙瘩患者,1名健康人）利用Illumina Hiseq 2000进行全基因组重测序,对所获信息进行数据库比... 详细信息

目的利用全基因重测序技术初步探讨与瘢痕疙瘩相关的基因组拷贝数变异（CNV）.方法收集1个瘢痕疙瘩家系,共4代27人,选取该家系中5例（4例瘢痕疙瘩患者,1名健康人）利用Illumina Hiseq 2000进行全基因组重测序,对所获信息进行数据库比对和变异注释.结果通过数据库比对及变异注释分析后获得了与瘢痕疙瘩相关的15个CNV,通过DAVID对筛选出来的15个基因进行基因注释和信号通路分析.共发现5个CNV[生长因子受体结合蛋白7（GRB7）、丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4（MAP4 K4）、丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶15（MAP3K15）、Kruppel样转录因子7（KLF7）和NKx2-2]与瘢痕疙瘩密切相关.这些CNV所涉及的基因与细胞表皮形成与分化、细胞外分泌及细胞黏附有关.结论共发现5个与瘢痕疙瘩相关的CNV,其中MAP3K15和MAP4K4与瘢痕疙瘩关系可能最为密切.

关键词：瘢痕疙瘩变异(遗传学) 基因组,人丝裂原激活蛋白激酶类

基于重测序技术对瘢痕疙瘩形成相关基因结构变异的初步探讨

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中华整形外科杂志 2014年第4期30卷 279-282页

作者：刘畅滕国栋陈敏亮马奎颜彤彤解放军总医院第一附属医院北京100048

目的利用全基因重测序技术初步探讨与瘢痕疙瘩形成相关基因的结构变异.方法选取1个典型瘢痕疙瘩家系,共4代27例,利用全基因组重测序技术,对该家系中5例（4例瘢痕疙瘩患者,1例正常人）基因组DNA进行数据分析,并对所获信息进行数据库比... 详细信息

目的利用全基因重测序技术初步探讨与瘢痕疙瘩形成相关基因的结构变异.方法选取1个典型瘢痕疙瘩家系,共4代27例,利用全基因组重测序技术,对该家系中5例（4例瘢痕疙瘩患者,1例正常人）基因组DNA进行数据分析,并对所获信息进行数据库比对和变异注释.结果通过生物信息学分析、数据库比对及变异注释后,发现了2个与瘢痕疙瘩相关的结构变异.利用靶基因功能分析软件DAVID对筛选出来的结构变异进行注释和信号通路分析,发现人四旋蛋白8（TSPAN8）在所有检测的瘢痕疙瘩患者中,均有一段168 bp的倒置,其包含了TSPAN8基因的第4个外显子.结论 TSPAN8表达的肿瘤细胞,可通过上调血管内皮生长因子及其受体的表达,促进相邻的成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶及尿激酶.此家系中该基因4号外显子的倒置,可能会导致该蛋白在信号转导过程的调节紊乱,从而导致瘢痕疙瘩的形成.

关键词：瘢痕疙瘩全基因组重测序结构变异人四旋蛋白8

干扰人整合素蛋白β5基因表达对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖能力的影响

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中华整形外科杂志 2017年第1期33卷 49-52页

作者：颜彤彤陈敏亮马奎付小兵北京友谊医院 100050 解放军总医院第一附属医院

目的观察干扰人整合素蛋白β5基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖能力的影响，探讨其在瘢痕疙瘩发病中的作用。方法构建干扰整合素蛋白β5慢病毒载体并感染瘢痕疙瘩成纤维细胞，通过PCR及WesternBlot方法观察感染后细胞整合素蛋白β5基因和... 详细信息

目的观察干扰人整合素蛋白β5基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖能力的影响，探讨其在瘢痕疙瘩发病中的作用。方法构建干扰整合素蛋白β5慢病毒载体并感染瘢痕疙瘩成纤维细胞，通过PCR及WesternBlot方法观察感染后细胞整合素蛋白β5基因和蛋白的表达情况；MTT法检测不同时间点细胞的增殖情况。结果慢病毒感染瘢痕疙瘩成纤维细胞后，空白对照组、空载病毒组及慢病毒干扰组中整合素蛋白β5mRNA及蛋白的表达量分别为1．00±0．00、1．08±0．05、0．34±0．01和0．91±0．03、0．93±0．02、0．28±0．07，与空载病毒组及空白对照组比较，慢病毒干扰组中整合素蛋白85mRNA及蛋白的表达量均明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）；慢病毒感染瘢痕疙瘩成纤维细胞后，各组间细胞的增殖情况在接种24h后无显著差异，48h后慢病毒干扰组的增殖较其他2组明显变慢（P〈0．01）。结论整合素蛋白β5基因可促进瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖。

关键词：整合素蛋白β5 瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖

A型肉毒毒素对成纤维细胞中α平滑肌肌动蛋白和肌球蛋白-Ⅱ表达的影响

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中华整形外科杂志 2014年第2期30卷 118-121页

作者：颜彤彤陈敏亮马奎梁黎明刘畅赖林英付小兵解放军总医院304临床部烧伤整形科北京100048 全军创作修复与组织再生重点实验室北京100048

目的探讨不同浓度A型肉毒毒素（botulinum toxin typeA，BTXA）对瘢痕内成纤维细胞中仅平滑肌肌动蛋白（α smooth muscle actin，α-SMA）和肌球蛋白-Ⅱ（myosin-Ⅱ）表达水平的影响。方法从手术切除的挛缩性瘢痕组织中分离培养原代成... 详细信息

目的探讨不同浓度A型肉毒毒素（botulinum toxin typeA，BTXA）对瘢痕内成纤维细胞中仅平滑肌肌动蛋白（α smooth muscle actin，α-SMA）和肌球蛋白-Ⅱ（myosin-Ⅱ）表达水平的影响。方法从手术切除的挛缩性瘢痕组织中分离培养原代成纤维细胞，选取3—5代成纤维细胞随机分为正常组、低浓度BTXA组（1．0U／10^6 cells）和高浓度BTXA组（2．5U／10^6cells），于药物作用后1、4、7d观察成纤维细胞的生长状况，并采用Wsternblot对成纤维细胞中***和myosin-Ⅱ的表达进行测定。结果正常组成纤维细胞生长状态良好；低浓度BTXA组第4天时细胞增殖速度减慢；高浓度BTXA组第4天时细胞部分出现核固缩，第7天时细胞排列较疏松，视野呈现较多凋亡的细胞。α-SMA和myosin—Ⅱ表达在第4天时正常组显著高于BTXA作用组（P〈0．05），第7天时低浓度BTXA组与高浓度BTXA组间比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论BTXA能够促进成纤维细胞凋亡，减少成纤维细胞中n—SMA和myosin—Ⅱ的表达，且在一定范围内，浓度越高抑制作用越明显。

关键词：成纤维细胞肉毒毒素类肌动蛋白类肌球蛋白类

我市出台意见深入推进抓党建促乡村振兴 001

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同种异体富血小板血浆对创面胶原合成的作用及其机制研究

闽东日报

作者：陈小妹颜彤彤

本报讯（陈小妹颜彤彤）为深入贯彻落实习近平总书记关于实施乡村振兴战略和大抓基层的重要论述，扎实推动党建引领脱贫攻坚、乡村振兴、基层治理取得实效，近日，市委出台《关于抓党建促乡村振兴工作的实施意见（试行）》（以下简称...

本报讯（陈小妹颜彤彤）为深入贯彻落实习近平总书记关于实施乡村振兴战略和大抓基层的重要论述，扎实推动党建引领脱贫攻坚、乡村振兴、基层治理取得实效，近日，市委出台《关于抓党建促乡村振兴工作的实施意见（试行）》（以下简称《意见》）。《意见》围绕农村基层党?

关键词：

来源： cnki报纸评论

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中华外科杂志 2017年第4期55卷 303-307页

作者：陈凤超陈民才颜彤彤侯俊杰杨俊革首都医科大学附属北京友谊医院医学美容中心 100050 解放军第三0七医院输血科中国科学院天津工业生物技术研究所

目的探讨同种异体来源的富血小板血浆（PRP）促进创面胶原合成的作用及机制.方法采用7周龄雄性SD清洁级大鼠50只,10只大鼠用来制备富血小板血浆,其余40只大鼠随机分为PRP组和对照组,每组各20只,PRP组大鼠创面涂抹0.1 ml同种异体的PRP... 详细信息

目的探讨同种异体来源的富血小板血浆（PRP）促进创面胶原合成的作用及机制.方法采用7周龄雄性SD清洁级大鼠50只,10只大鼠用来制备富血小板血浆,其余40只大鼠随机分为PRP组和对照组,每组各20只,PRP组大鼠创面涂抹0.1 ml同种异体的PRP,对照组涂抹同等剂量的生理盐水,观察创面再生愈合情况,采用Masson染色分析细胞及组织形态学变化,免疫印迹法检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原的蛋白表达情况;采用实时定量PCR检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原组织mRNA的表达.计量资料的比较采用t检验,组间比较采用单因素方差分析.结果创面形成后第3、6、10、15天,PRP组创面愈合率明显高于对照组（30.33±3.35比18.35±2.04,55.5l±2.74比36.83±2.34,79.64±1.40比56.92± 1.44,86.88±2.12比65.80± 1.76）,差异有统计学意义（t=13.66 ～ 50.48,P值均＜0.05）;Masson染色显示PRP组的创面胶原形成快、纤维粗壮、排列致密;与对照组相比,PRP组细胞Ⅰ型胶原蛋白（1.92±0.09比1.18±0.11）和Ⅲ型胶原蛋白（1.16±0.05比0.74±0.11）表达明显上调,差异有统计学意义（t=22.99,P＜0.01;t=17.62,P＜0.05）;与对照组相比,PRP组在创面形成后第3、6、10、15天的Ⅰ型胶原蛋白（5.17±0.11比1.79±0.18,6.97±0.09比1.96±0.08,6.00±0.26比2.10±0.05,4.95±0.11比3.58±0.09）和Ⅲ型胶原蛋白（2.35 ±0.08比1.44±0.05,3.08±0.05比1.84±0.06,3.48±0.07比2.36±0.09,4.42±0.07比2.77±0.10）的mRNA均表达上调,差异有统计学意义（t=43.37～ 188.37,P值均＜0.01）.结论同种异体富血小板血浆可通过促进Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白合成加速创面愈合.

关键词：富含血小板血浆创面愈合胶原合成机制

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A型肉毒毒素的基础研究及临床应用

中华医学美学美容杂志 2018年第1期24卷 70-72页

作者：颜彤彤赖琳英陈敏亮首都医科大学附属北京友谊医院国际医学院医学美容中心 100053

肉毒毒素是由革兰阳性、产芽孢、厌氧型肉毒梭形菌产生的神经外毒素，根据其抗原性不同，分为A，B，C（C1，C2），D，E，F，G7个血清型，其中对人致病的主要是A，B，E，F型且以A型药效最强。自1989年12月美国国家食品药品管理局（FDA）... 详细信息

肉毒毒素是由革兰阳性、产芽孢、厌氧型肉毒梭形菌产生的神经外毒素，根据其抗原性不同，分为A，B，C（C1，C2），D，E，F，G7个血清型，其中对人致病的主要是A，B，E，F型且以A型药效最强。自1989年12月美国国家食品药品管理局（FDA）正式批准A型肉毒毒素（botulinum toxin typeA，BTX—A）为临床药物以来，BTX-A在临床的应用范围不断扩大，现就BTX—A的基础研究及临床应用如下综述。

关键词： A型肉毒毒素临床应用 BTX-A 食品药品管理局临床药物外毒素抗原性血清型