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表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究

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安徽农业科学 2011年第24期39卷 14899-14901,14974页

作者：李业伟孙程龙韩乃君王颖扈荣良吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122

[目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。[方法]通过RT-PCR方法获得On-derstepoort株H基因,插入pcDNA3.1(+)建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。在此基础上再将报... 详细信息

[目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。[方法]通过RT-PCR方法获得On-derstepoort株H基因,插入pcDNA3.1(+)建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。将p8AAZH与伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Western blot,筛选纯化重组病毒并鉴定目的基因的表达。同时在BHK-21细胞上测定重组病毒的生长曲线。[结果]获得了表达H蛋白的重组伪狂犬病毒,重组病毒与亲本Bartha-K61株的生长曲线、病变特征相一致。[结论]成功构建了表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,H基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,为犬瘟热活病毒载体疫苗的研制与开发打下了基础。

关键词：伪狂犬病毒犬瘟热病毒 H基因病毒载体

免疫组化检测转化生长因子TGF－α和p53基因在非小细胞肺癌中的表达

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中华肿瘤杂志 1996年第2期18卷 84-87页

作者：王虹陈雷林丽明韩乃君孙含笑代金文赵春霞程书钧中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所肿瘤医院病因室

转化生长因子ＴＧＦ－α与肿瘤的发生、发展有着密切关系。作者采用免疫组化方法，检测２６例非小细胞肺癌ＴＧＦ－α及其受体ＥＧＦ－Ｒ和抑癌基因ｐ５３在肺癌中的表达，发现ＴＧＦ－α和ｐ５３的表达均比其相应的癌旁组织高，但ＴＧ... 详细信息

转化生长因子ＴＧＦ－α与肿瘤的发生、发展有着密切关系。作者采用免疫组化方法，检测２６例非小细胞肺癌ＴＧＦ－α及其受体ＥＧＦ－Ｒ和抑癌基因ｐ５３在肺癌中的表达，发现ＴＧＦ－α和ｐ５３的表达均比其相应的癌旁组织高，但ＴＧＦ－α、ＥＧＦ－Ｒ及ｐ５３的高表达与病人的生存率关系不大。结果还提示。

关键词：肺肿瘤免疫组化转化生长因子基因 p53

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禽脑脊髓炎病毒VR株的致病性研究

动物医学进展 2016年第10期37卷 57-59页

作者：王红曹志韩乃君郭伟伟范根成青岛易邦生物工程有限公司/动物基因工程疫苗国家重点实验室山东青岛266114

为探索禽脑脊髓炎病毒强毒VR株对SPF鸡的致病性,开展了不同接种途径和不同日龄SPF鸡的致病力试验。不同接种途径致病力试验结果表明,AEV VR株口服后不能引起发病;刺种、肌肉注射途径接种随着日龄增大,发病率降低;脑内注射途径接种可引... 详细信息

为探索禽脑脊髓炎病毒强毒VR株对SPF鸡的致病性,开展了不同接种途径和不同日龄SPF鸡的致病力试验。不同接种途径致病力试验结果表明,AEV VR株口服后不能引起发病;刺种、肌肉注射途径接种随着日龄增大,发病率降低;脑内注射途径接种可引起试验鸡全部发病。最小致病量试验结果显示,VR株脑内注射攻毒的最小致病量为10^(2.0) EID_(50)。不同日龄SPF鸡的致病力试验结果表明,随着试验鸡日龄的增大,其致病力略有差异,日龄越小,发病率越高。结果表明,AEV VR株脑内攻毒70日龄内SPF鸡的发病率为80%及以上,攻毒剂量为10^(4.0)EID_(50)。

关键词：禽脑脊髓炎病毒VR株接种途径日龄最小致病量致病性

转化生长因子β_1及p53对大鼠气管上皮细胞转化的影响

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基础医学与临床 1999年第5期19卷 46-50页

作者：王虹陈蕾韩乃君戴金文赵春霞程书钧中国医学科学院协和医科大学肿瘤研究所北京100021

本义研究转化生长因子β1（TGF-β1）和P53对致癌物转化的大鼠气管上皮（RTE）细胞的影响。结果表明早期转化的RTE细胞（尚未具致癌性）和恶性转化的RTE细胞（已具致癌性）的条件培养基可以抑制原代RTE细胞的集落形成率（CFE），部分抑... 详细信息

本义研究转化生长因子β1（TGF-β1）和P53对致癌物转化的大鼠气管上皮（RTE）细胞的影响。结果表明早期转化的RTE细胞（尚未具致癌性）和恶性转化的RTE细胞（已具致癌性）的条件培养基可以抑制原代RTE细胞的集落形成率（CFE），部分抑制早期转化RTE细胞的CFE，但对恶性转化的RTE细胞无抑制作用。TGF个；中和抗体可以阻断这种抑制作用，表明条件培养基中可能有TGF-β1。转化RTE细胞分泌TGF-β1可使对后者有抗性作用的细胞具有生长优势。为了评价P53对RTE细胞转化的作用，将野生型，突变型P53分别导人早期转化的RTE，研究表明，野生型P53抑制，而突变型P53促进转染细胞的CFE。突变型P53可能增强TGF-β1的分泌，从而促进转染细胞在裸鼠中癌变。本研究表明突变型P53可能通过TGF-β1自分泌或旁分泌途径促进RTE细胞恶性转化。

关键词：转化生长因子 p53基因 TGF-β1 气管上皮细胞

Construction of Recombinant Pseudorabies Virus Expressing Canine Distemper Virus H Gene and Analysis on Its Biological Characters

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Agricultural Science & Technology 2011年第6期12卷 897-900页

作者：李业伟孙程龙韩乃君王颖扈荣良吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122

[Objective] The aim was to construct a recombinant pseudorabies virus expressing canine distemper virus H gene and investigate its biological characters.[Method] H gene of canine distemper virus（CDV）strain Onderstepoort was produced by RT-PCR,inserted into pcDNA3.1（＋）vector to construct a expression cassette,which was then subcloned into transfer vector p8AA,prior to the insertion of LacZ expression *** resulting new transfer vector was named as ***,p8AAZH was co-transfected with the genome of pseudorabies virus（PRV）Bartha-K61 into BHK-21 cells to enable gene recombination and virus package,and the virus solution was collected as cytopathic effect occurring.A series of procedures including blue plaque purification,PCR identification,observation under electron microscope and Western blot were carried out to screen the recombinant pseudorabies virus and identify the protein expression of target ***,growth curve of the recombinant virus was determined in BHK-21 cells.[Result] The H gene had been inserted into the genome of Bartha-K61 strain,and RPRV-H was the same as Bartha-K61 in the one-step growth curve and cytopathic effect in BHK-21 cells.[Conclusion] The recombinant pseudorabies virus was constructed,and the insertion of H gene did not influence proliferation of recombinant virus,which laid a foundation for development of recombinant canine distemper virus vaccine.

关键词： Pseudorabies virus Canine distemper virus H gene Virus vector

美国在非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗研究中的路线及进展

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病毒学报 2023年第5期39卷 1496-1505页

作者：韩乃君徐天刚戈胜强左媛媛胡永新屈海龙吴晓东王志亮中国动物卫生与流行病学中心青岛266032 青岛市现代生物工程及动物疫病研究重点实验室青岛266032 农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方) 青岛266032

非洲猪瘟病毒疫苗研发是公认的世界性难题,近年来,随着生物信息学技术不断发展和基因操作技术的日趋成熟,通过基因敲除方式制备非洲猪瘟弱毒疫苗的研发路线已经初现曙光,相关研究成果不断涌现,特别是美国科研团队在该领域已取得许多积... 详细信息

非洲猪瘟病毒疫苗研发是公认的世界性难题,近年来,随着生物信息学技术不断发展和基因操作技术的日趋成熟,通过基因敲除方式制备非洲猪瘟弱毒疫苗的研发路线已经初现曙光,相关研究成果不断涌现,特别是美国科研团队在该领域已取得许多积极成果。鉴于国内尚无对美国相关工作的详细报道,本文拟就其研究策略及进展进行综述,以期为我国科研人员开展非洲猪瘟疫苗研究提供借鉴和参考。

关键词：非洲猪瘟病毒基因操作基因缺失活疫苗

非洲猪瘟病毒与天然免疫系统相互作用研究进展

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中国兽医学报 2021年第9期41卷 1879-1886页

作者：屈海龙戈胜强张永强韩乃君孙成友吴晓东王志亮中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032

非洲猪瘟病毒(ASFV)可引起家猪和野猪的出血热,在非洲、欧洲和亚洲持续蔓延,对全球养猪业构成严重威胁。因为没有疫苗,难以有效地控制非洲猪瘟流行。ASFV感染能够诱导宿主的天然免疫,也能够通过调节天然免疫效应分子抑制宿主的天然免疫... 详细信息

非洲猪瘟病毒(ASFV)可引起家猪和野猪的出血热,在非洲、欧洲和亚洲持续蔓延,对全球养猪业构成严重威胁。因为没有疫苗,难以有效地控制非洲猪瘟流行。ASFV感染能够诱导宿主的天然免疫,也能够通过调节天然免疫效应分子抑制宿主的天然免疫机能。现对ASFV感染与天然免疫反应及其免疫抑制的现象与机理进行综述。

关键词：非洲猪瘟病毒(ASFV) 天然免疫干扰素免疫抑制凋亡

人支气管上皮细胞转化过程中凋亡与增殖的改变

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中华肿瘤杂志 1999年第3期21卷 168-170页

作者：王永军童彤郭素平韩乃君白瑾峰程书钧中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所肿瘤医院北京100021

目的　观察凋亡、增殖在人支气管上皮细胞转化中的改变，探讨其有关机理。方法　使用末端脱氧核苷酰转移酶标记凋亡法（ＴＤＴ）、Ｂｒｄｕ掺入法、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ、荧光原位杂交等方法。结果　人永生化支气管上皮... 详细信息

目的　观察凋亡、增殖在人支气管上皮细胞转化中的改变，探讨其有关机理。方法　使用末端脱氧核苷酰转移酶标记凋亡法（ＴＤＴ）、Ｂｒｄｕ掺入法、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ、荧光原位杂交等方法。结果　人永生化支气管上皮细胞Ｙ在无血清培养基连续转代过程中，晚代细胞软琼脂克隆形成率显著增高，并对血清分化产生明显抗性，对表皮生长因子（ＥＧＦ）依赖性有减弱倾向，细胞增殖速度明显加快，顺铂诱导的凋亡发生率显著低于早代细胞。晚代细胞Ｂｃｌ２、ＭＤＭ２、ＣｙｃｌｉｎＤ１及ＰＣＮＡ的蛋白表达水平明显高于早代细胞。晚代细胞染色体主要为异倍体，而早代细胞主要为二倍体。结论　除细胞增殖加快以外，凋亡敏感性降低在人支气管上皮细胞转化中同样起重要作用，可能是导致细胞遗传学改变的重要原因之一。

关键词：支气管上皮细胞细胞凋亡细胞增殖支气管肿瘤

香烟及其亚硝胺NNK诱发大鼠气管上皮细胞转化及异硫氰酸衍生物抑制作用的研究

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癌变．畸变．突变 1996年第1期8卷 5-9页

作者：王虹陈雷项芒蒋原宙韩乃君郭素萍程书钧中国医学科学院肿瘤研究所病因室

利用本室建立的大鼠气管上皮（ＲＴＥ）细胞转化体系，研究了吸烟和肺癌发生的关系以及异硫氰酸衍生物ＰＨＩＴＣ对吸烟诱发肺癌的防护作用。结果表明，香烟烟雾凝集物及其中的亚硝胺ＮＮＫ可以引起ＲＴＥ细胞的转化。采用改进的气管滴... 详细信息

利用本室建立的大鼠气管上皮（ＲＴＥ）细胞转化体系，研究了吸烟和肺癌发生的关系以及异硫氰酸衍生物ＰＨＩＴＣ对吸烟诱发肺癌的防护作用。结果表明，香烟烟雾凝集物及其中的亚硝胺ＮＮＫ可以引起ＲＴＥ细胞的转化。采用改进的气管滴注致癌物的方式，较以往降低了ＮＮＫ引起转化的最低济量，有利于正确评估香烟诱发肺癌的危险性。异硫氰醉衍生物ＰＨＩＴＣ可以抑制ＮＮＫ诱导的ＤＮＡ加成物的形成及ＮＮＫ对ＲＴＥ细胞的转化作用。

关键词： RTE 肺癌 NNK CSC 异硫氰酸衍生物