检索结果-南通市图书馆

中国兽医科学 2020年第11期50卷 1373-1378页

作者：刘心张文超董覃婷刘燚陈樱韦祖樟欧阳康刘欢黄伟坚广西大学动物科学技术学院广西南宁530005 广西中医药大学第一附属医院广西南宁530024

为了建立特异、灵敏及快速的猪星状病毒3型(PAstV3)检测方法并应用于临床检测,根据GenBank登录的PAstV 3序列,在ORF1b保守区设计特异性引物和TaqMan探针;经过反应体系和反应条件优化,对建立的实时荧光定量RT-PCR方法进行敏感性、特异性... 详细信息

为了建立特异、灵敏及快速的猪星状病毒3型(PAstV3)检测方法并应用于临床检测,根据GenBank登录的PAstV 3序列,在ORF1b保守区设计特异性引物和TaqMan探针;经过反应体系和反应条件优化,对建立的实时荧光定量RT-PCR方法进行敏感性、特异性测定,并初步应用于临床粪便样品的检测。结果显示,该方法标准曲线线性关系良好,R2值达到0.997 1;与多种常见的猪病病毒均无交叉反应,特异性良好。与常规PCR相比,该检测方法敏感性是常规PCR方法的100倍,敏感性较高,批内、批间重复性试验的变异系数均小于2.0%,重复性良好。使用该方法对临床收集的30份疑似PAstV3粪便样本进行检测,阳性率为40%,检出率高于常规PCR方法。上述结果表明,该方法的建立为PAstV3的诊断及流行病学调查提供了快速、准确的检测手段。

关键词：猪星状病毒3型 TaqMan探针实时荧光定量PCR

猪星状病毒nsP1a/4蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备

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黑龙江畜牧兽医 2022年第21期 75-79页

作者：刘燚董覃婷朱鑫玥张广欣吴奥祺陈樱欧阳康韦祖樟黄伟坚广西大学动物科学技术学院南宁530004

为了获得猪星状病毒(Porcine astrovirus,PAstV)重组蛋白nsP1a/4和多克隆抗体nsP1a/4,试验采用PCR技术扩增得到nsP1a/4基因片段,通过双酶切技术鉴定重组表达质粒nsP1a/4-pET-32a。利用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞表达重组蛋白nsP1a/4,... 详细信息

为了获得猪星状病毒(Porcine astrovirus,PAstV)重组蛋白nsP1a/4和多克隆抗体nsP1a/4,试验采用PCR技术扩增得到nsP1a/4基因片段,通过双酶切技术鉴定重组表达质粒nsP1a/4-pET-32a。利用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞表达重组蛋白nsP1a/4,通过SDS-PAGE鉴定重组蛋白nsP1a/4表达情况及可溶性。利用Ni-Agarose Resin纯化重组蛋白nsP1a/4,再通过Western-bolt验证。以纯化的重组蛋白nsP1a/4免疫健康新西兰大白兔制备多克隆抗体nsP1a/4,通过Western-bolt检验多克隆抗体nsP1a/4的特异性。结果表明:试验扩增出nsP1a/4基因片段,成功构建出重组表达质粒nsP1a/4-pET-32a,重组蛋白nsP1a/4以包涵体形式在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中大量表达。经Ni-Agarose Resin纯化的重组蛋白nsP1a/4单一,Western-bolt成功鉴定到重组蛋白nsP1a/4,多克隆抗体nsP1a/4能与重组蛋白nsP1a/4发生特异性结合。说明试验成功制备出PAstV的多克隆抗体nsP1a-4。

关键词：猪星状病毒非结构蛋白 nsP1a/4基因原核表达多克隆抗体

猪肠病毒G型实时定量PCR检测方法的建立及初步应用

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中国兽医科学 2020年第5期50卷 563-569页

作者：杨春杰米雪刘雪婷蹇慧刘芳陈樱韦祖樟黄伟坚欧阳康广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

为建立一种能够准确、快速地鉴别猪肠病毒G型的诊断方法,本研究参考猪肠病毒G型的3D基因序列设计1对特异性引物,扩增片段预计大小约为104 bp,将3D基因片段克隆到pMD18-T载体上的阳性重组质粒作为标准品,建立猪肠病毒G型的实时定量PCR检... 详细信息

为建立一种能够准确、快速地鉴别猪肠病毒G型的诊断方法,本研究参考猪肠病毒G型的3D基因序列设计1对特异性引物,扩增片段预计大小约为104 bp,将3D基因片段克隆到pMD18-T载体上的阳性重组质粒作为标准品,建立猪肠病毒G型的实时定量PCR检测方法,并应用到临床样品的检测。研究结果显示,该方法设计的引物具有高度的特异性;标准曲线的Cq值与质粒标准品模板在2.92×10^8copies/μL^2.92×10^2copies/μL范围内,呈良好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-4.023;组内与组间重复性试验显示变异系数很小,在0.26%~1.57%之间。该方法的最低检测限量可达2.92×10 copies/μL。使用本方法对2017-2019年广西部分地区的猪场临床腹泻粪便样品进行检测,猪肠病毒G型阳性检出率为18.42%,说明广西部分地区的猪场存在猪肠病毒G型的感染。本研究成功建立了猪肠病毒G型实时定量PCR检测方法,可用于猪肠病毒G型感染的临床检测。

关键词：猪肠病毒G型实时定量PCR 检测方法

非洲猪瘟病毒B602L基因编码蛋白的多克隆抗体的制备及其在PRRSV活载体中的表达

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中国兽医科学 2024年

作者：罗梦郭子强李佳乐帅文娜李丽薇周艳君姜一峰童武童光志丛雁方韦祖樟高飞广西大学动物科学技术学院中国农业科学院上海兽医研究所扬州大学江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心青岛动保国家工程技术研究中心有限公司上海市兽医生物技术重点实验室

为深入研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)的编码基因B602L，本研究根据ASFV-SY18株的B602L基因序列(MH766894.3)，设计引物合成1 593 bp的B602L基因全长序列，构建pCold-TF-B602L原核重组质粒。将鉴定正确的原核质粒... 详细信息

为深入研究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)的编码基因B602L，本研究根据ASFV-SY18株的B602L基因序列(MH766894.3)，设计引物合成1 593 bp的B602L基因全长序列，构建pCold-TF-B602L原核重组质粒。将鉴定正确的原核质粒转化至感受态细胞，用IPTG诱导表达重组蛋白B602L并通过SDS-PAGE进行验证和分析。用纯化后的pB602L蛋白免疫家兔制备多克隆抗体，测定抗体效价并经Western-blot鉴定其特异性。同时基于本实验室前期研究，构建表达B602L基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)全长感染性克隆。本研究将ASFV B602L基因全长序列插入PRRSV ORF1b和ORF2a之间，转染全长感染性克隆质粒后拯救获得重组病毒rPRRSV-B602L，并对其进行病毒学特性分析。利用制备的多克隆抗体与重组病毒和真核质粒进行Western-blot和IFA验证。结果显示，成功构建pCold-TF-B602L原核质粒，诱导表达的重组蛋白pB602L可与His标签单抗和制备的抗pB602L抗体产生特异性反应，其效价为1∶16 000；成功构建并拯救出重组病毒rPRRSV-B602L，其与亲本病毒具有相似的病毒学特性。本研究拯救的重组病毒可以稳定表达pB602L蛋白，该抗pB602L多克隆抗体能够特异性识别重组病毒表达的蛋白和真核质粒表达的蛋白，具有良好的特异性和反应原性，为进一步探索pB602L蛋白的功能及研制表达ASFV特异性抗原蛋白的重组PRRSV活载体疫苗提供一定的研究基础。

关键词：非洲猪瘟病毒 pB602L蛋白多克隆抗体病毒活载体

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健康与腹泻犬肠道菌群耐药性临床调查研究

黑龙江畜牧兽医（下半月） 2017年第10期 232-234,300页

作者：韦红云黄满周华波黄小武何平赵卫锋李瑞凯何剑桥韦祖樟欧阳康黄伟坚陈樱广西大学动物科学技术学院南宁530004 南宁市华波宠物医院南宁530004 柳州市动物疫病预防控制中心广西柳州545006

为了解健康犬与腹泻犬肠道菌群对不同抗生素的耐药情况,笔者对2015年11月份—2016年1月份间采集的南宁市129份腹泻宠物犬粪便样品及40份健康犬粪便样品进行了细菌鉴别培养、革兰氏染色镜检和形态观察及耐药性分析。结果表明:健康与腹泻... 详细信息

为了解健康犬与腹泻犬肠道菌群对不同抗生素的耐药情况,笔者对2015年11月份—2016年1月份间采集的南宁市129份腹泻宠物犬粪便样品及40份健康犬粪便样品进行了细菌鉴别培养、革兰氏染色镜检和形态观察及耐药性分析。结果表明:健康与腹泻犬肠道菌群的革兰氏染色特性及耐药性都存在差异,其中腹泻犬肠道菌群以革兰氏阳性菌为主,对呋喃唑酮最敏感,而健康犬肠道菌群以革兰氏阴性菌为主,对头孢噻肟钠最敏感;此外,对129份腹泻犬的肠道菌群分析发现,幼犬最易出现腹泻(占75%),其次是青年犬(占19%),而幼年犬对呋喃唑酮最为敏感;犬肠道菌群的形态及其耐药性会因生长阶段不同而不同。

关键词：犬健康与腹泻肠道菌群耐药性抗生素

猪肠病毒G型部分VP1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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中国动物传染病学报 2024年第3期32卷 178-182页

作者：边金妮黄诗婷许佳乐米雪王奕斐杜琛陈樱韦祖樟黄伟坚欧阳康广西大学动物科学技术学院动物传染病与分子免疫学实验室南宁530005

本研究扩增猪肠病毒G型(EV-G)的部分VP1基因,将其克隆至原核表达载体,并对其进行诱导表达,获得重组蛋白并制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验对其进行验证。结果表明,本研究制备的兔抗EV-G-VP1多克隆... 详细信息

本研究扩增猪肠病毒G型(EV-G)的部分VP1基因,将其克隆至原核表达载体,并对其进行诱导表达,获得重组蛋白并制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验对其进行验证。结果表明,本研究制备的兔抗EV-G-VP1多克隆抗体具有良好的免疫原性和反应性,可以特异性识别EV-G感染Marc-145细胞表达的VP1蛋白,为猪肠病毒G型免疫学检测方法的建立提供良好的生物学材料。

关键词：猪肠病毒G型部分VP1蛋白原核表达多克隆抗体

2014—2016年广西部分地区猪瘟病原和血清学调查

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黑龙江畜牧兽医 2018年第14期 89-92页

作者：季程远覃一峰谢欣方庆励秦树英刘芳陈樱韦祖樟欧阳康黄伟坚广西大学动物科学技术学院

为了解近年来广西部分地区猪群猪瘟病毒感染情况,为猪场制订合理的防控措施提供依据,试验于2014—2016年对广西部分地区362份组织样品进行猪瘟的病原学检测,对2 994份血清进行猪瘟的抗体检测。结果表明：2014—2016年广西部分地区猪瘟... 详细信息

为了解近年来广西部分地区猪群猪瘟病毒感染情况,为猪场制订合理的防控措施提供依据,试验于2014—2016年对广西部分地区362份组织样品进行猪瘟的病原学检测,对2 994份血清进行猪瘟的抗体检测。结果表明：2014—2016年广西部分地区猪瘟病原阳性率分别是10.80%、7.78%、9.38%,血清抗体阳性率分别是64.86%、70.56%、86.56%,广西部分地区猪瘟的病原阳性率整体平稳,而抗体阳性率呈上升趋势。2014—2016年春季病原阳性率为13.10%,血清抗体阳性率为67.53%,夏季分别为8.62%和73.48%,秋季分别为8.97%和74.77%,冬季分别为11.90和81.06%,春、冬季节的猪瘟病原发病率略高于夏、秋季节。说明猪瘟持续性地对广西部分地区养猪业造成威胁,需要通过加强猪瘟免疫来积极应对。

关键词：猪瘟病毒病原检测血清检测流行病学抗体免疫

2020-2022年广西地区猪圆环病毒3型检测及遗传进化分析

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中国动物传染病学报 2023年

作者：刘文波李思雨庞燕丽陈国昌刘嘉琪覃建光覃一峰陈樱欧阳康黄伟坚黄稳妃韦祖樟广西大学动物科学技术学院广西壮族自治区兽用生物制品工程研究中心广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室广西高校动物疫病预防与控制重点实验室广西农业职业技术大学动物科学技术系

为了解广西地区猪圆环病毒3型（Porcine circovirus 2， PCV2）的流行病学特点及遗传变异情况，本研究对2020-2022年采自广西不同地区屠宰场健康猪组织（肝、脾、肺、淋巴结等）和血清样品68份以及规模养猪场或散养户猪场的病死猪组织... 详细信息

为了解广西地区猪圆环病毒3型（Porcine circovirus 2， PCV2）的流行病学特点及遗传变异情况，本研究对2020-2022年采自广西不同地区屠宰场健康猪组织（肝、脾、肺、淋巴结等）和血清样品68份以及规模养猪场或散养户猪场的病死猪组织和血清样品162份，进行PCR检测。随机选取部分PCV3阳性样品进行全基因测序，并与GenBank中收录的23株参考序列进行比对和遗传进化分析。结果显示：PCV3阳性率为17.83%，对随机选取的24份PCV3阳性样品进行扩增测序，经遗传变异分析国内主要流行PCV3a和PCV3b两个基因型，在14株PCV3a毒株中，其中1株属于PCV3a-1亚型，7株属于PCV3a-2亚型，6株属于PCV3a-IM亚型，另外10株属于PCV3b亚型。2020-2021年，广西流行优势毒株为PCV3a，2022年，PCV3b替代PCV3a成为优势毒株。全基因组相似性分析显示24株PCV3基因序列与参考毒株的相似性为98.6%-99.8%。对PCV3毒株的Cap蛋白进行氨基酸比较分析，结果显示Cap蛋白共有4个高突变区，有2个高突变区是位于T细胞抗原表位区，这些突变可能对病毒的感染性和抗原性有所影响。值得注意的是，Cap蛋白的24和27位氨基酸残基的突变与PCV3的分型密切相关。研究结果有助于了解广西地区的PCV3流行情况和遗传进化动态。

关键词：猪圆环病毒3型 Cap 全基因组扩增遗传进化分析

凸隆病毒PLpro基因自然重组于猪肠病毒G型的发现

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中国兽医科学 2022年第11期52卷 1430-1436页

作者：黄诗婷洪大林秦秋英许佳乐边金妮陈樱韦祖樟黄伟坚欧阳康广西大学动物科学技术学院动物传染病与分子免疫学实验室广西南宁530005

为调查广西地区猪肠病毒G型(EV-G)基因组中是否存在PLpro基因的自然插入,并获得序列信息,本研究对2019—2021年广西区内347份临床腹泻样品进行EV-G PLpro基因的监测,发现32份EV-G阳性,其中4份EV-G阳性样品含有PLpro基因。扩增PLpro基因... 详细信息

为调查广西地区猪肠病毒G型(EV-G)基因组中是否存在PLpro基因的自然插入,并获得序列信息,本研究对2019—2021年广西区内347份临床腹泻样品进行EV-G PLpro基因的监测,发现32份EV-G阳性,其中4份EV-G阳性样品含有PLpro基因。扩增PLpro基因及VP1基因序列分析结果显示,4株PLpro序列与EV-G PLpro参考序列中均存在具有去泛素化酶活性的催化三联体残基,且蛋白两端都有3C蛋白酶水解位点,负责将外源蛋白水解至基因组外完成翻译。VP1基因序列分析结果显示,4株分别为EV-G1、EV-G10和EV-G14基因型。本研究首次在我国发现EV-G10及EV-G14基因型毒株的基因组中存在PLpro基因的插入,该结果为初步明确广西区内EV-G-PLpro毒株的流行概况及其遗传演化特点提供了数据支持。

关键词：猪肠病毒G型 PLpro蛋白酶自然重组基因分析