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一株耐高氨氮菌株的筛选及脱氮性能研究

广西科学 2024年第3期31卷 478-485页

作者：刘庆宇杨雯婷盘兆慧韦爽潘世优韦宇拓广西大学生命科学与技术学院广西南宁530004 广西柏湾农牧有限公司广西南宁530201

硝化反硝化生物脱氮被认为是目前有效的氨氮废水处理技术之一,其关键是高效脱氮微生物的筛选。本研究从养猪厂污水处理池中筛选异养硝化好氧反硝化细菌,并探究其生长性能和脱氮性能。结果筛选出一株异养硝化好氧反硝化细菌Acinetobacter... 详细信息

硝化反硝化生物脱氮被认为是目前有效的氨氮废水处理技术之一,其关键是高效脱氮微生物的筛选。本研究从养猪厂污水处理池中筛选异养硝化好氧反硝化细菌,并探究其生长性能和脱氮性能。结果筛选出一株异养硝化好氧反硝化细菌Acinetobacter junii YQ-1,当温度为30℃、转速为200 r/min、初始pH值为8、接种量为2.0%(V/V)、培养时间为48 h时,菌株YQ-1具有最高的菌体密度(OD_(595)=0.999),且脱氮效果最好。在最佳生长条件下,当初始氨氮浓度、亚硝态氮和硝态氮浓度均为200 mg/L时,菌株YQ-1在48 h对这3种形式氮素的降解率分别达到89.73%、63.51%和70.19%。且当氨氮浓度为1000 mg/L时,菌株YQ-1仍能较好地生长,其生长情况符合BidoseResp模型,培养基中化学需氧量(Chemical Oxygen Demand,COD)变化情况符合ExpDec2模型,培养基中化学需氧量(Chemical Oxygen Demand,COD)的减少速率与菌株YQ-1的生长速率呈正相关关系。本研究为异养硝化好氧反硝化菌处理高浓度氨氮污水的实际应用提供了参考。

关键词：氨氮生物脱氮硝化反硝化 Acinetobacter junii 降解性能

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Lactobacillus diolivorans二醇脱水酶的分离纯化与酶学性质

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化工学报 2006年第12期57卷 2938-2942页

作者：孟晓蕾齐向辉韦宇拓黄日波广西大学广西亚热带生物资源保护利用重点实验室广西南宁530004 南宁中诺生物工程公司广西南宁530003

1，3-丙二醇（1，3-propanediol，1，3-PD）是一种重要的化工和医药中间体原料，是良好的溶剂、抗冻剂或保护剂，是聚酯——聚对苯二甲酸丙二醇酯（PTT）和聚氨酯的单体，可在地毯、纺织、工程塑料等领域中广泛应用，也可用于食品、化... 详细信息

1，3-丙二醇（1，3-propanediol，1，3-PD）是一种重要的化工和医药中间体原料，是良好的溶剂、抗冻剂或保护剂，是聚酯——聚对苯二甲酸丙二醇酯（PTT）和聚氨酯的单体，可在地毯、纺织、工程塑料等领域中广泛应用，也可用于食品、化妆品和制药等行业食品．当前化工合成是生产1，3-丙二醇的主要方法，

关键词： Lactobacillus diolivorans 二醇脱水酶辅酶B12 甘油脱水酶

马链球菌透明质酸合成酶基因的分子克隆及表达

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工业微生物 2003年第2期33卷 4-8页

作者：凌敏黄日波黄鲲韦宇拓广西大学生物技术实验中心发酵与酶工程研究所南宁530005

根据Streptococcus equisimilis、Streptococcus pyogenes、Streptococcus uberis三种链球菌透明质酸合成酶(seHAS、spHAS、suHAS)基因的高度保守区，设计一对简并引物，用两次PCR从Streptococcus equi的总DNA中扩增出sqHAS基因。构建表达质粒pSE-sqHAS并转化大肠杆菌DH5α，诱导培养后在细胞膜中检测到sqHAS蛋白及活性。利用携带该酶的细胞膜以UDP-GlcA和UDP-GlcNAc为底物在体外合成了分子量为3.6×10~6Da的HA，分别是发酵法生产和提取法生产的HA的分子量的2.5倍和5倍左右。马链球菌透明质酸合成酶基因的克隆及表达，国内外文献尚未见报道。本研究为体外酶法生产透明质酸做了初步探索。

关键词：马链球菌透明质酸合成酶基因克隆表达

Lactobacillus diolivorans二醇脱水酶激活因子基因的克隆、测序与功能鉴定

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生物化学与生物物理进展 2007年第1期34卷 87-92页

作者：孟晓蕾唐悦齐向辉韦宇拓黄日波广西大学广西亚热带生物资源保护利用重点实验室南宁530004 广西大学生命科学与技术学院南宁530004

根据二醇脱水酶与甘油脱水酶的激活因子基因序列同源性分析,设计简并引物从***基因组DNA中扩增出了假定的二醇脱水酶激活因子基因(gldG、gldH)全序列,补全了GenBank中该基因序列的未知部分,构建了表达质粒pSE-gldGH,以***21为宿主,进行... 详细信息

根据二醇脱水酶与甘油脱水酶的激活因子基因序列同源性分析,设计简并引物从***基因组DNA中扩增出了假定的二醇脱水酶激活因子基因(gldG、gldH)全序列,补全了GenBank中该基因序列的未知部分,构建了表达质粒pSE-gldGH,以***21为宿主,进行诱导表达.表达产物的变性与非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明:gldGH表达产生68ku、13ku两个蛋白质,它们经金属螯合亲和层析与凝胶过滤得到共纯化,纯化产物即假定的激活因子为分子质量约325ku的蛋白质聚合体,由这两个蛋白质以等摩尔量组成,因此假定的激活因子可能为α4β4亚基结构.以***二醇脱水酶为对象,进行激活实验,结果证实gldGH表达产物具备二醇脱水酶激活因子的功能.

关键词：二醇脱水酶激活因子功能鉴定 1,3-丙二醇 Lactobacillus diolivorans

褐色喜热裂孢菌Thermobifida fusca产麦芽糖α-淀粉酶基因的克隆表达及酶学性质研究

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食品工业科技 2013年第24期34卷 214-218,231页

作者：薛蓓王治宾刘振东韦宇拓西藏农牧学院食品科学学院西藏林芝860000 成都蓉生药业有限责任公司四川成都610041 广西大学微生物及植物遗传工程教育部重点实验室广西南宁530003

以***基因组DNA为模板,PCR分别扩增不包括和包括其基因前段信号肽的产麦芽糖淀粉酶的基因片段tfa和sptfa,并克隆至表达载体pSE380上,获得重组质粒pSE380-tfa和pSE380-sptfa,以大肠杆菌JM109为宿主细胞大量表达融合蛋白,利用金属镍亲和... 详细信息

以***基因组DNA为模板,PCR分别扩增不包括和包括其基因前段信号肽的产麦芽糖淀粉酶的基因片段tfa和sptfa,并克隆至表达载体pSE380上,获得重组质粒pSE380-tfa和pSE380-sptfa,以大肠杆菌JM109为宿主细胞大量表达融合蛋白,利用金属镍亲和层析对菌株JM109/pSE380-tfa表达的α-淀粉酶进行纯化,SDS-PAGE显示纯化蛋白的分子量约为64ku,K m值为1.305mg/mL,最适反应温度为60℃,最适pH为7.0;检测到菌株JM109/pSE380-sptfa的培养基上清有相当一部分酶活。本研究麦芽糖α-淀粉酶与可溶性淀粉反应,经HPLC检测产物均为麦芽三糖、麦芽糖和葡萄糖的混合物。因此麦芽糖α-淀粉酶在生产高麦芽糖浆上起到了一定的作用。

关键词：褐色喜热裂孢菌麦芽糖α-淀粉酶基因信号肽克隆表达麦芽糖酶学性质

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产甘油基因工程菌的构建

化学通报 2004年第12期67卷 925-929页

作者：杜丽琴韦宇拓黄鲲陈发忠黄日波广西大学生命科学与技术学院发酵与酶工程研究所南宁530005

利用途径工程的基本原理 ,在大肠杆菌中构建一条产甘油的新代谢途径。从酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae INVSc1菌株总 DNA克隆 3-磷酸甘油脱氢酶基因 (gpdl)和 3-磷酸甘油酯酶基因 (hor2 ) ,构建由两个杂合启动子 trc启动基因的双表... 详细信息

利用途径工程的基本原理 ,在大肠杆菌中构建一条产甘油的新代谢途径。从酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae INVSc1菌株总 DNA克隆 3-磷酸甘油脱氢酶基因 (gpdl)和 3-磷酸甘油酯酶基因 (hor2 ) ,构建由两个杂合启动子 trc启动基因的双表达盒的重组质粒 p GEM- Cgpd1- Chor2 ,后者转入E. coli JM10 9菌株 ,构建的重组菌株就具有一条直接将葡萄糖转化为甘油的新代谢途径 ,将该重组菌株以葡萄糖为底物进行摇瓶发酵 ,甘油产率为 1.18g/ L。该研究结果为进一步构建生产 1,3-丙二醇工程菌打下了基础。

关键词：甘油杂合葡萄糖构建研究结果表达重组质粒重组菌株基因工程菌磷酸

蔗糖富集环境土壤微生物宏基因组分析及蔗糖水解相关酶基因克隆

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应用与环境生物学报 2010年第3期16卷 403-407页

作者：杜丽琴庞浩胡媛媛韦宇拓黄日波广西大学生命科学与技术学院广西亚热带生物资源保护利用重点实验室南宁530005 广西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心南宁530004

蔗糖水解酶是蔗糖转化生成生物质能源的关键酶,且还具有重要的转糖苷功能.针对蔗糖富集的土壤环境,利用未培养的宏基因组技术对蔗糖水解相关的酶基因进行克隆.首先使用微生态分子技术对蔗糖富集的土壤样品进行分析,在可信区间为95%的情... 详细信息

蔗糖水解酶是蔗糖转化生成生物质能源的关键酶,且还具有重要的转糖苷功能.针对蔗糖富集的土壤环境,利用未培养的宏基因组技术对蔗糖水解相关的酶基因进行克隆.首先使用微生态分子技术对蔗糖富集的土壤样品进行分析,在可信区间为95%的情况下,样品覆盖率为20%(C指数为0.2),Species richness指数为235.0,Shannon index为5.2889,说明这个蔗糖富集样品中的微生物来源具有广泛性.然后使用宏基因组技术构建这个土壤样品中微生物的DNA文库,成功构建一个包含约100000个克隆的大片段DNA Fosmid文库.对文库中的Fosmid质粒进行随机测序,发现质粒的外源DNA与已报道的DNA都没有同源性,文库所克隆的DNA都来源于仍没有被研究的微生物.使用蔗糖作为唯一碳源对文库进行筛选,获得了能水解蔗糖的克隆.在蔗糖水解能力最强的两个克隆中所包含的蔗糖水解酶与GenBank数据库中已知蔗糖酶的相似性分别为38%和68%.

关键词：宏基因组环境DNA DNA文库细菌多样性统计技术蔗糖水解酶

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途径工程生产1,3-丙二醇的研究进展

现代化工 2004年第11期24卷 24-26页

作者：杨登峰韦宇拓杜丽琴黄日波广西大学生物技术实验中心广西南宁530005

利用基因工程技术生产1,3-丙二醇,特别是途径工程的利用已取得了重大突破.利用生物技术生产1,3-丙二醇的成本比化学法的低25%,它将逐步实现工业化生产.介绍了一步法生产1,3-丙二醇的超级基因工程菌所需的3-磷酸甘油脱氢酶(GPD1)、甘油3... 详细信息

利用基因工程技术生产1,3-丙二醇,特别是途径工程的利用已取得了重大突破.利用生物技术生产1,3-丙二醇的成本比化学法的低25%,它将逐步实现工业化生产.介绍了一步法生产1,3-丙二醇的超级基因工程菌所需的3-磷酸甘油脱氢酶(GPD1)、甘油3-磷酸酶(GPP2)、甘油脱水酶(dhaB)和1,3-丙二醇氧化还原酶(dhaT),并对关键酶dhaB进行了分析,同时介绍了穿梭质粒和甘油-3-磷酸酶积累对生产的影响.最后,对今后的研究重点和策略进行了探讨.

关键词： 1 3-丙二醇基因工程菌途径工程甘油脱水酶

运动发酵单胞菌乙醇脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

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工业微生物 2004年第1期34卷 17-20页

作者：陆坚韦宇拓黄鲲黄日波广西大学生物技术实验中心广西南宁530005

采用PCR技术 ,以基因组DNA为模板克隆得到运动发酵单胞菌 (Zymomonasmobilis)乙醇脱氢酶 (alcoholdehydrogenaseⅡ )基因adhB ,连接到表达载体 pSE380上 ,得到重组质粒 pSE adhB。将此重组质粒转化到大肠杆菌菌株DH5α中 ,重组菌株经IPT... 详细信息

采用PCR技术 ,以基因组DNA为模板克隆得到运动发酵单胞菌 (Zymomonasmobilis)乙醇脱氢酶 (alcoholdehydrogenaseⅡ )基因adhB ,连接到表达载体 pSE380上 ,得到重组质粒 pSE adhB。将此重组质粒转化到大肠杆菌菌株DH5α中 ,重组菌株经IPTG诱导后 ,在乙醛指示平板检测到乙醇脱氢酶活性。SDS PAGE电泳结果显示出明显的 4 0KD特异性蛋白质条带。重组菌株经诱导培养 ,每毫升发酵液酶活力为 5u。

关键词：运动发酵单胞菌乙醇脱氢酶克隆诱导表达大肠杆菌