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以木糖异构酶基因作为选择标记的花生遗传转化

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核农学报 2012年第3期26卷 444-448,483页

作者：丁霄隋炯明王晶珊乔利仙青岛农业大学生命科学学院/山东省高校植物生物技术重点实验室山东青岛266109

用木糖异构酶基因xylA替换掉pCAMBIA1301中的潮霉素磷酸转移酶基因(hygromycin-B-phosphotransferase,Hpt),构建了植物表达载体pCAMBIA1301-xylA。再利用农杆菌介导法将pCAMBIA1301-xylA导入花生,转移到添加蔗糖(5g/L)和不同浓度木糖(5,10,20,30g/L)的体胚诱导及体胚萌发培养基上培养。对外植体成苗率及转基因阳性率进行统计,结果表明,当木糖浓度为10g/L时,诱导成苗率为15.25%,再生植株生长健壮,且转基因阳性率高达77.27%,最终确定10g/L为最适木糖筛选浓度。该筛选方法利用木糖作为筛选剂,可以避免利用抗生素筛选可能造成的安全隐患,转化效率高,是一种安全、高效的筛选方法。

关键词：花生木糖异构酶基因农杆菌介导法遗传转化

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花生fw2.2基因的克隆及遗传转化

核农学报 2011年第6期25卷 1123-1128,1210页

作者：刘强王晶珊乔利仙赵春梅隋炯明青岛农业大学生命科学学院青岛市主要农作物创新与应用重点实验室山东青岛266109

fw2.2基因是影响番茄果重的一个重要数量性状基因,在心皮的细胞分裂中起负调控作用。本研究以番茄fw2.2基因的序列为探针,从花生EST数据库中筛选同源序列。根据花生的EST拼接序列设计引物对花生进行扩增,目标产物测序后,将推测的氨基酸... 详细信息

fw2.2基因是影响番茄果重的一个重要数量性状基因,在心皮的细胞分裂中起负调控作用。本研究以番茄fw2.2基因的序列为探针,从花生EST数据库中筛选同源序列。根据花生的EST拼接序列设计引物对花生进行扩增,目标产物测序后,将推测的氨基酸序列与其他植物fw2.2基因编码的氨基酸序列进行比对,同源性为34.78%～66.85%。半定量RT-PCR结果表明,该基因在野生种和栽培种中的表达存在差异。将fw2.2基因连接到植物表达载体,通过农杆菌介导法转化花生品种花育23号,获得了12个PCR阳性的独立转化子。

关键词：花生 fw2.2基因克隆转化

马铃薯卷叶病毒缺失突变CP基因的原核表达及抗血清的制备

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园艺学报 2012年第10期39卷 1949-1957页

作者：隋炯明何心凤郭真李广存王晶珊郭宝太青岛农业大学生命科学学院山东省植物生物技术高校重点实验室山东青岛266109 山东省农业科学院蔬菜研究所济南250100

利用RT-PCR扩增马铃薯卷叶病毒(PLRV)外壳蛋白(CP)基因(PLRV-CP),回收大小约630bp的特异性扩增片段并进行T-A克隆,测序表明该基因长度为627bp,与已报道的36个PLRV-CP基因的核苷酸序列的同源性大于96%。以pBAD/Thio-TOPO为起始载体,构建... 详细信息

利用RT-PCR扩增马铃薯卷叶病毒(PLRV)外壳蛋白(CP)基因(PLRV-CP),回收大小约630bp的特异性扩增片段并进行T-A克隆,测序表明该基因长度为627bp,与已报道的36个PLRV-CP基因的核苷酸序列的同源性大于96%。以pBAD/Thio-TOPO为起始载体,构建了PLRV-CP基因的原核表达载体pBAD-LRCP。以pBAD-LRCP为模板,用PCR法删除了该基因富含精氨酸稀有密码子的第52～177核苷酸,获得了PLRV缺失突变CP基因的原核表达载体pBAD-LRCP-126。用阿拉伯糖诱导工程菌TOP10(pBAD-LRCP-126),获得了34kD的诱导表达的融合蛋白(重组CP)。用镍离子亲和层析法从包涵体中纯化出了高纯度的重组CP,用纯化的重组CP作抗原免疫家兔获得了PLRV特异性的抗血清,间接ELISA检测显示效价为1︰12800。本研究结果为利用重组CP作抗原大量制备PLRV抗血清奠定了基础。

关键词：马铃薯卷叶病毒 CP基因缺失突变原核表达抗血清

花生AhRab7基因的克隆及其原核表达研究

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植物遗传资源学报 2013年第4期14卷 686-693页

作者：向小华宋琳裴玉贺郭新梅隋炯明宋希云青岛农业大学农学与植保学院/青岛市主要农作物种质资源创新与应用重点实验室青岛266109 青岛农业大学生命科学学院/植物生物技术重点实验室青岛266109

为了研究花生小G蛋白AhRab7基因在大肠杆菌中的表达模式及与高盐胁迫的关联性,采用RT-PCR技术从花生(Arachis hypogaea L.)品种花育20中克隆了AhRab7(7-1、7-2)的cDNA全长序列,通过核苷酸序列和氨基酸序列分析结果表明AhRab7(7-1、7-2)... 详细信息

为了研究花生小G蛋白AhRab7基因在大肠杆菌中的表达模式及与高盐胁迫的关联性,采用RT-PCR技术从花生(Arachis hypogaea L.)品种花育20中克隆了AhRab7(7-1、7-2)的cDNA全长序列,通过核苷酸序列和氨基酸序列分析结果表明AhRab7(7-1、7-2)的cDNA全长分别为872 bp、816 bp,分别含1个621 bp、618 bp大小的开放阅读框(ORF,open readingframe),拟编码氨基酸数分别为206aa、205aa。将携带完整的ORF序列连入表达载体pET-28a(+)中,经IPTG诱导后进行耐盐性测定,结果表明两种全长重组酶(分别含pET-28a-Rab7-1和pET-28a-Rab7-2的重组质粒)均具有正常酶活性,明显缓解了高盐环境(5.5%～10%NaCl溶液)对大肠杆菌的生长胁迫,而对照组(含空载体pET-28a)未能检测出相同的酶活性,结果表明AhRab7基因表达可以显著缓解高盐胁迫影响。目的基因经IPTG诱导后高效表达,SDS-PAGE电泳检测到目标蛋白的大小为23kDa,与预测结果一致。这为后期探讨花生对盐胁迫及其他非生物胁迫的研究奠定了一定的基础。

关键词：花生 Rab7基因克隆原核表达盐胁迫

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稻米淀粉粘滞性谱特征的表现及其遗传

中国水稻科学 2004年第5期18卷 384-390页

作者：李欣张蓉隋炯明梁国华沈新平严长杰顾世梁顾铭洪扬州大学农学院农学系江苏扬州225009

通过对水稻F2 无性系群体及大量品种 (系 )的RVA谱的测定 ,研究了稻米淀粉RVA谱的类型及遗传。结果表明 :(1)RVA谱可分为A～F六种类型 ,糯稻的特征图谱为A型 ,籼稻的特征图谱有B、C、D、E、F五种类型 ,粳稻有D、E、F三种类型。 (2 )稻... 详细信息

通过对水稻F2 无性系群体及大量品种 (系 )的RVA谱的测定 ,研究了稻米淀粉RVA谱的类型及遗传。结果表明 :(1)RVA谱可分为A～F六种类型 ,糯稻的特征图谱为A型 ,籼稻的特征图谱有B、C、D、E、F五种类型 ,粳稻有D、E、F三种类型。 (2 )稻米的表观直链淀粉含量 (AAC)不同 ,RVA谱则不同。稻米的AAC相同 ,RVA谱也可不同 ,在低、中AAC类型中 ,RVA谱的差异能反映品种食味品质的差异。(3) 4个杂交稻组合的RVA谱表现出相同的特点 ,除最高粘度和起浆温度外 ,其他特征值均介于双亲之间 ,表明杂交稻米品质改良要求不育系与恢复系的改良同步进行。 (4)在F2 无性系群体中 ,RVA谱各特征均呈连续分布 ,最高粘度是典型的数量性状遗传 ,热浆粘度、冷胶粘度、崩解值、消减值、回复值都可能是由一对主效基因和若干微效基因共同控制的遗传。

关键词：水稻稻米淀粉粘滞性食味品质遗传 RVA谱

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水稻半矮秆基因sd-g的精细定位

科学通报 2004年第8期49卷 778-783页

作者：梁国华曹小迎隋炯明赵祥强严长杰裔传灯顾铭洪扬州大学江苏省植物功能基因组学重点实验室扬州225009

矮秆基因的发掘、研究和利用是水稻株型改良育种和植物生长发育分子生物学研究的重要基础.利用新桂矮双矮与02428杂交产生的F2群体对sd-g进行了精细定位.sd-g基因首先被定位在水稻第5染色体上微卫星标记RM440和RM163之间,遗传距离分别是... 详细信息

矮秆基因的发掘、研究和利用是水稻株型改良育种和植物生长发育分子生物学研究的重要基础.利用新桂矮双矮与02428杂交产生的F2群体对sd-g进行了精细定位.sd-g基因首先被定位在水稻第5染色体上微卫星标记RM440和RM163之间,遗传距离分别是0.5和2.5cM.为了进一步精细定位sd-g基因,利用已经公布的水稻基因组序列,在sd-g基因附近区域寻找微卫星序列并发展新的标记,在RM440和RM163之间发展了9个微卫星标记.sd-g基因被进一步定位在SSR5-1和SSR5-51之间,SSR5-1与sd-g之间相距0.1cM,SSR5-51与sd-g之间相距0.3cM,而SSR418与sd-g表现为共分离.以此为基础,构建覆盖sd-g基因区域的BAC重叠群,sd-g基因被定位在AC105319约85kb的区段上,这为sd-g基因的图位克隆奠定了基础.

关键词：精细定位半矮秆基因水稻分子生物学研究植物生长发育 g基因微卫星标记基因组序列微卫星序列 F2群体株型改良遗传距离基因区域图位克隆染色体基础共分离重叠群 BAC sd

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几种作物GA受体的同源性比较

青岛农业大学学报（自然科学版） 2009年第4期26卷 309-312页

作者：隋炯明青岛农业大学生命科学学院山东青岛266109

目前,在水稻中已克隆出GA受体GID1基因,其功能丧失会导致植株矮化。同时,在拟南芥中也克隆出3个相关的GA受体基因。根据它们氨基酸序列的保守区设计简并引物,在不同作物中进行扩增。扩增产物进行回收及测序,根据这些片段的序列从数据库... 详细信息

目前,在水稻中已克隆出GA受体GID1基因,其功能丧失会导致植株矮化。同时,在拟南芥中也克隆出3个相关的GA受体基因。根据它们氨基酸序列的保守区设计简并引物,在不同作物中进行扩增。扩增产物进行回收及测序,根据这些片段的序列从数据库中得到对应的EST序列和氨基酸序列。结果表明:水稻与高粱、小麦、玉米(GID1A和GID1B)和棉花中GA受体的氨基酸序列具有较高的同源性,分别为81.44%、81.36%、80.50%、79.14%和63.13%。

关键词： GA受体同源基因进化分析

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甘薯中fw2.2同源基因的PCR扩增

青岛农业大学学报（自然科学版） 2009年第1期26卷 38-40页

作者：隋炯明青岛农业大学生命科学学院山东青岛266109

fw2.2是影响番茄果实重量的一个重要数量性状基因。通过其氨基酸序列的保守区设计简并引物,然后在甘薯中进行扩增,扩增出的片段大小为500bp。测序并从数据库中找到其对应EST序列,全长为751bp,其中包括5’侧翼序列、3’侧翼序列和全部编... 详细信息

fw2.2是影响番茄果实重量的一个重要数量性状基因。通过其氨基酸序列的保守区设计简并引物,然后在甘薯中进行扩增,扩增出的片段大小为500bp。测序并从数据库中找到其对应EST序列,全长为751bp,其中包括5’侧翼序列、3’侧翼序列和全部编码序列,EST序列对应的氨基酸序列共190个氨基酸。甘薯与番茄fw2.2的氨基酸序列具有较高的同源性,达到56.4%,由此推断此基因可能就是甘薯中fw2.2的同源基因。

关键词：甘薯 fw 2.2 同源基因 PCR扩增

花生金属蛋白酶家族基因FtsH的鉴定、分类和盐胁迫表达分析

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江苏农业科学 2016年第12期44卷 74-77页

作者：郑春花孔祥远隋炯明束晨赵春梅青岛农业大学/山东省高校植物生物技术重点实验室山东青岛266109

FtsH是一种ATP和Zn2+依赖型金属蛋白酶,在植物抗逆胁迫中发挥了重要作用。为分析花生中FtsH家族成员情况,构建花生叶片转录组数据文库,筛选出19个FtsH家族基因,位于花生A组野生种的8条染色体上,与拟南芥、水稻的FtsH基因进行同源序列比... 详细信息

FtsH是一种ATP和Zn2+依赖型金属蛋白酶,在植物抗逆胁迫中发挥了重要作用。为分析花生中FtsH家族成员情况,构建花生叶片转录组数据文库,筛选出19个FtsH家族基因,位于花生A组野生种的8条染色体上,与拟南芥、水稻的FtsH基因进行同源序列比对后发现,多数FtsH基因没有聚到已报道的亚类。利用花生耐盐突变体(S2)和对照(S4)构建盐胁迫处理前后各时间段的表达谱文库,进行FtsH基因盐胁迫表达分析,结果表明,9个FtsH基因受盐胁迫诱导表达,绝大多数FtsH基因在耐盐突变体和对照中表现出不同的表达模式。该研究为花生金属蛋白酶基因的功能研究与耐盐分子育种提供了基础。

关键词：花生 FtsH基因基因表达谱耐盐突变体盐胁迫