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结核分枝杆菌酯酶Rv1400c原核表达及表达产物的酶活性分析

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吉林农业大学学报 2014年第6期36卷 701-706页

作者：陶荣珊李金伟刘思国王全凯吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 吉林省中韩动物科学研究院长春130600 吉林东丰药业股份有限公司东丰136300 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室哈尔滨150001

为探究结核分枝杆菌酯酶Rv1400c活性，以进一步研究Rv1400c的结构和功能。以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板，对 Rv1400c 基因进行扩增，并将其克隆到 pET28b （＋）原核表达载体上，构建pET28b－Rv1400c重组质粒，然后将构建的重组... 详细信息

为探究结核分枝杆菌酯酶Rv1400c活性，以进一步研究Rv1400c的结构和功能。以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板，对 Rv1400c 基因进行扩增，并将其克隆到 pET28b （＋）原核表达载体上，构建pET28b－Rv1400c重组质粒，然后将构建的重组质粒转化到BL21（ DE3）表达菌株中，增菌后用IPTG进行诱导表达再用亲和层吸树脂法进行纯化，利用不同底物、不同pH、不同温度对纯化后的Rv1400c酯酶进行活性分析。结果表明：成功构建出pET28b－Rv1400c重组质粒；SDS－PAGE和Western blot显示，Rv1400c以包涵体形式表达，蛋白分子质量为39 ku；在对8种底物的筛选中发现Rv1400c在C2～C14中具有活性，其中以在C2中活性最好；在以C12为底物、pH 8？0、37℃条件下酯酶活性最高。

关键词：结核分枝杆菌酯酶Rv1400c pET28b-Rv1400c重组质粒包涵体酯酶活性

犬瘟热病毒SD(14)7株对比格犬的致病性研究

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中国兽医科学 2020年第3期50卷 321-329页

作者：潘虹军刘梦佳陶荣珊李雪龚成燕陈杰赵建军中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室吉林长春130112 吉林农业大学中药材学院吉林长春130118 济南海关山东济南250200 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

对3~4月龄比格犬经肌肉注射方式接种犬瘟热病毒(CDV)SD(14)7株1 mL(病毒含量为106.0 TCID50/mL),并进行体温、淋巴细胞数、眼鼻直肠排毒和组织病毒含量及分布等指标检测,评价变异株SD(14)7对比格犬的致病水平。结果显示,CDV感染后第2天... 详细信息

对3~4月龄比格犬经肌肉注射方式接种犬瘟热病毒(CDV)SD(14)7株1 mL(病毒含量为106.0 TCID50/mL),并进行体温、淋巴细胞数、眼鼻直肠排毒和组织病毒含量及分布等指标检测,评价变异株SD(14)7对比格犬的致病水平。结果显示,CDV感染后第2天比格犬出现CDV感染的典型特征,如眼和鼻分泌物增多,淋巴细胞明显减少,然而动物的体温变化无明显的“双相热”特征。CDV定量检测结果显示,比格犬攻毒后第10天开始通过眼鼻和直肠向外界排毒,CDV在脾中含量最高。病理剖检可见脾有坏死、肺炎症出血等,病理组织HE和免疫组织化学检测发现脾有严重的充血,淋巴细胞中有CDV抗原,证实该毒株主要感染淋巴组织和器官。此外,比格犬大脑部分神经细胞严重肿胀,在脑中可检测到CDV,表明SD(14)7株具有一定的神经嗜性。本试验结果为进一步鉴定犬瘟热病毒感染比格犬的毒力因子和免疫原性以及疫苗免疫效果的评价奠定了基础。

关键词：犬瘟热病毒变异株 SD(14)7 比格犬致病性

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鹿茸多肽的抗疲劳作用机制研究

吉林农业大学学报 2015年第4期37卷 469-476页

作者：胡太超刘玉敏陶荣珊苏凤艳张晶李庆杰王全凯吉林农业大学中药材学院长春130118 吉林省中韩动物科学研究院长春130600 长春科技学院长春130600 长春中医药大学附属医院长春130021

通过游泳试验建立小鼠疲劳模型,测定了鹿茸多肽对小鼠游泳时间、肝糖原、肌糖原、尿素氮(BUN)、乳酸(LA)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等指标的影响。结果表明:鹿茸多肽可增加小鼠... 详细信息

通过游泳试验建立小鼠疲劳模型,测定了鹿茸多肽对小鼠游泳时间、肝糖原、肌糖原、尿素氮(BUN)、乳酸(LA)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等指标的影响。结果表明:鹿茸多肽可增加小鼠肝糖原和肌糖原的含量,显著降低代谢产物LA、MDA、BUN的水平,提高LDH、SOD、GSH-Px活性,加速自由基的清除,增强小鼠的抗氧化能力,提高小鼠的运动能力,起到抗疲劳作用。

关键词：鹿茸多肽抗疲劳小鼠

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鹿血多肽的制备工艺及抗氧化能力研究

食品工业科技 2014年第17期35卷 107-110页

作者：胡太超陶荣珊李庆杰张晶苏凤艳王艳梅王全凯吉林省中韩动物科学研究院吉林长春130600 吉林农业大学中药材学院吉林长春130118 长春中医药大学附属医院吉林长春130021 长春科技学院吉林长春130600

以新鲜鹿血为原料,利用胰蛋白酶水解制备鹿血多肽,以水解度为指标,在单因素和正交实验的基础上,确定酶解的最佳工艺条件,即加酶量为6%,pH为9,反应温度为37℃,反应时间为4h,水解度为46.72%±0.11%。并进一步对鹿血多肽进行抗氧化能力测定... 详细信息

以新鲜鹿血为原料,利用胰蛋白酶水解制备鹿血多肽,以水解度为指标,在单因素和正交实验的基础上,确定酶解的最佳工艺条件,即加酶量为6%,pH为9,反应温度为37℃,反应时间为4h,水解度为46.72%±0.11%。并进一步对鹿血多肽进行抗氧化能力测定,在高浓度时多肽的羟自由基清除能力和DPPH自由基清除能力较高。

关键词：酶解正交实验抗氧化能力

人组织蛋白酶K在毕赤酵母中的表达、纯化及活性测定

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经济动物学报 2013年第1期17卷 5-11页

作者：袁相恋戴娜桑党光辉孙培姣胡太超陶荣珊王全凯吉林农业大学中药材学院福建农林大学动物科学学院吉林省中韩动物科学研究院

在动物和人的骨代谢疾病中,组织蛋白酶K是木瓜蛋白酶家族中的一种半胱氨酸蛋白酶,是负责骨吸收过程中溶骨的主要关键酶,是新药物的分子作用靶点。通过毕赤酵母表达系统表达出重组组织蛋白酶K,进一步用离子交换和分子筛系统进行纯化得到... 详细信息

在动物和人的骨代谢疾病中,组织蛋白酶K是木瓜蛋白酶家族中的一种半胱氨酸蛋白酶,是负责骨吸收过程中溶骨的主要关键酶,是新药物的分子作用靶点。通过毕赤酵母表达系统表达出重组组织蛋白酶K,进一步用离子交换和分子筛系统进行纯化得到高纯度有活性的重组组织蛋白酶K。运用FluStar荧光酶标仪测定390 nm(激发光)和460 nm(发射光)波长下荧光强度的变化并计算出组织蛋白酶K的酶活力为119.6 U,为进一步筛选骨质疏松等骨代谢疾病的新药提供参考。

关键词：组织蛋白酶K 毕赤酵母表达纯化活性测定

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鹿皮胶原蛋白的提取及特性研究

吉林农业大学学报 2014年第5期36卷 601-604,608页

作者：胡太超陶荣珊苏凤艳张晶李庆杰王艳梅王全凯吉林农业大学中药材学院长春130118 吉林省中韩动物科学研究院长春130600 长春科技学院长春130600 长春中医药大学附属医院长春130021

胶原蛋白因具有独特的氨基酸组成和结构,被广泛地应用于医疗、食品及美容等领域。选取鹿皮为原料,通过酸水解和酶水解结合法提取胶原蛋白,其提取率可达32.38%,进一步分离纯化,通过测定原料中羟脯氨酸的含量换算后得出其所含胶原蛋白含量... 详细信息

胶原蛋白因具有独特的氨基酸组成和结构,被广泛地应用于医疗、食品及美容等领域。选取鹿皮为原料,通过酸水解和酶水解结合法提取胶原蛋白,其提取率可达32.38%,进一步分离纯化,通过测定原料中羟脯氨酸的含量换算后得出其所含胶原蛋白含量为9.912%。通过SDS-PAGE测定胶原蛋白的分子量为30万,并对其自由基清除能力进行了研究,在测定范围内,随着胶原蛋白浓度的增加,其自由基清除能力均增大,高浓度时其清除能力较强。

关键词：胶原蛋白 SDS-PAGE 自由基清除能力

犬细小病毒JL-(18)1/Beagle株的分离鉴定及遗传进化分析

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中国兽医科学 2021年第1期51卷 81-89页

作者：李雪陈杰胡博陶荣珊刘梦佳潘虹军龚成燕王全凯赵建军吉林农业大学中药材学院吉林长春130118 中国农业科学院特产研究所吉林长春130112 济南海关山东济南250200 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为研究犬细小病毒(CPV)流行株遗传变异情况,本研究从吉林省某比格犬养殖场采集疑似CPV感染致死犬的肠道组织,将病料接种至F81细胞进行病毒分离,并通过电镜形态学、PCR、血凝试验及动物回归试验进行鉴定。结果显示,所分离的这株病毒在F8... 详细信息

为研究犬细小病毒(CPV)流行株遗传变异情况,本研究从吉林省某比格犬养殖场采集疑似CPV感染致死犬的肠道组织,将病料接种至F81细胞进行病毒分离,并通过电镜形态学、PCR、血凝试验及动物回归试验进行鉴定。结果显示,所分离的这株病毒在F81细胞中产生了典型CPV细胞病变(CPE);在电镜下可见病毒呈无囊膜、直径为20 nm左右的病毒粒子;PCR鉴定证实CPV核酸呈阳性;血凝试验表明此病毒对猪红细胞具有凝集作用,血凝效价为1∶256;将这株病毒命名为JL-(18)1/Beagle。动物回归试验表明,JL-(18)1/Beagle使比格犬产生犬细小病毒感染的典型临床症状;以NS1基因进行遗传进化分析显示,JL-(18)1/Beagle与CPV-2c型分离株CPV-SH1516以及Canine/China/23/2017 NS1基因亲缘关系较近,而核苷酸相似率为100%;以VP2基因进行遗传进化分析显示,JL-(18)1/Beagle与New CPV-2b型CPV/CN/JL3/2013、CPV/CN/HB1/2013和CPV/CN/JL6/2013亲缘关系较近,核苷酸相似率为99.89%~99.94%;以VP2蛋白氨基酸进行序列分析表明,JL-(18)1/Beagle属于New CPV-2b型,与近期吉林CPV分离株相比,关键氨基酸位点无明显变化。因此,本试验从吉林省比格犬肠组织中分离到1株New CPV-2b型CPV毒株。

关键词：犬细小病毒分离鉴定遗传进化

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鹿茸的化学成分及药理作用研究概述

经济动物学报 2015年第3期19卷 156-162页

作者：胡太超刘玉敏陶荣珊苏凤艳张晶顾效瑜李庆杰王全凯吉林农业大学中药材学院吉林省中韩动物科学研究院长春科技学院动物医学系长春中医药大学附属医院

鹿茸用于医疗保健的历史悠久,应用广泛。鹿茸化学成分复杂,药理广泛,本文就近年来对鹿茸的化学成分和药理作用的研究进行综述。鹿茸的化学成分主要有无机元素,蛋白质、多肽、氨基酸,脂质类,多胺类化合物,维生素,甾体类化合物,多糖类化合... 详细信息

鹿茸用于医疗保健的历史悠久,应用广泛。鹿茸化学成分复杂,药理广泛,本文就近年来对鹿茸的化学成分和药理作用的研究进行综述。鹿茸的化学成分主要有无机元素,蛋白质、多肽、氨基酸,脂质类,多胺类化合物,维生素,甾体类化合物,多糖类化合物,核酸、碱基成分等。对生殖系统、免疫系统、心血管系统、抗氧化和抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤、神经系统、抗应激、肝脏、组织伤口愈合、骨质疏松症、减肥降脂等都有一定的作用。

关键词：鹿茸化学成分药理作用

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鹿茸多肽提取分离纯化及药理作用研究进展

经济动物学报 2014年第4期18卷 238-242页

作者：陶荣珊胡太超李金伟顾效瑜王全凯吉林农业大学中药材学院吉林省中韩动物科学研究院东丰药业

鹿茸多肽具有抗炎、抗氧化、增强免疫并能促进细胞分化、伤口愈合、抑制肿瘤细胞、促进神经系统、周围神经系统组织的再生等药理作用,是鹿茸中最有效的成分之一。文中对鹿茸多肽的提取,分离纯化及药理作用研究进展进行了综述,希望为鹿... 详细信息

鹿茸多肽具有抗炎、抗氧化、增强免疫并能促进细胞分化、伤口愈合、抑制肿瘤细胞、促进神经系统、周围神经系统组织的再生等药理作用,是鹿茸中最有效的成分之一。文中对鹿茸多肽的提取,分离纯化及药理作用研究进展进行了综述,希望为鹿茸多肽的研究和开发提供参考。

关键词：鹿茸多肽提取分离纯化药理作用