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虫草素对脂多糖诱导巨噬细胞过度活化的抑制作用研究

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食品工业科技 2017年第13期38卷 297-301,306页

作者：孟雪莲刘佳刘莹莹郑良超高程程王丹吕晶陈长兰辽宁大学药学院辽宁沈阳110036

目的:研究虫草素对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞过度活化的抑制作用。方法:培养RAW264.7小鼠巨噬细胞,采用LPS(1μg/m L)激活巨噬细胞,同时给予0.1~10μmol/L的虫草素处理细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞存活率,Griess法检测细胞一... 详细信息

目的:研究虫草素对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞过度活化的抑制作用。方法:培养RAW264.7小鼠巨噬细胞,采用LPS(1μg/m L)激活巨噬细胞,同时给予0.1~10μmol/L的虫草素处理细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞存活率,Griess法检测细胞一氧化氮(NO)释放量,酶联免疫吸附分析实验(ELISA)分别检测三种细胞炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的释放水平,采用Fluo-3/AM染色法以流式细胞仪测定胞浆游离钙离子浓度([Ca^(2+)]i)的变化,采用水杨酸法考察虫草素对羟自由基(·OH)清除作用,L-酪氨酸法检测其对过氧亚硝酸根离子自由基(ONOO-)清除作用,邻苯三酚自氧化法检测其对超氧阴离子自由基(O_2^-·)清除作用。结果:虫草素在0.1~10μmol/L浓度范围内可显著抑制LPS激活的RAW264.7巨噬细胞释放NO及3种炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α),同时对细胞存活率无显著影响;虫草素(10μmol/L)可显著抑制LPS诱导的巨噬细胞内[Ca^(2+)]i水平异常升高;此外,虫草素对·OH、ONOO-和O_2^-·自由基具有显著清除作用。结论:虫草素可抑制LPS激活的RAW264.7巨噬细胞释放NO及炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6,这可能与其抑制了细胞内[Ca^(2+)]i的增高及清除·OH、ONOO-和O_2^-·自由基有关。虫草素可能对巨噬细胞过度激活引起的炎症相关疾病具有一定的防治作用。

关键词：虫草素脂多糖巨噬细胞过度活化

微波法与超声破碎法提取蛹虫草菌丝体中虫草素的比较研究

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食品科学 2009年第18期30卷 176-180页

作者：黄子琪贲松彬桑育黎代颖李慧娇陈长兰辽宁大学生命科学院辽宁沈阳110036 辽宁大学药学院辽宁沈阳110036

分别就微波法和超声破碎法用于蛹虫草菌丝体中虫草素提取时应采取的工艺条件进行研究。采用单因素分析和正交设计试验分别研究提取溶剂、提取液pH值、微波和超声波的功率、提取时间对虫草素提取得率的影响。正交试验结果表明,微波提取... 详细信息

分别就微波法和超声破碎法用于蛹虫草菌丝体中虫草素提取时应采取的工艺条件进行研究。采用单因素分析和正交设计试验分别研究提取溶剂、提取液pH值、微波和超声波的功率、提取时间对虫草素提取得率的影响。正交试验结果表明,微波提取法要好于超声波提取法。当以提取溶剂为水-乙醇(1:3,V/V)、pH7.0、微波功率500W,并提取3min的条件进行微波提取时,虫草素的提取得率最高。

关键词：虫草素提取微波超声波正交设计

虫草素抑制脂多糖诱导的小胶质细胞活化及神经保护作用

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食品科学 2014年第19期35卷 224-230页

作者：孟雪莲陈长兰孔维娟单玉华代启超李丹王旭富晓越贲松彬辽宁大学药学院辽宁沈阳110036 辽宁大学生命科学院辽宁沈阳110036

目的:研究虫草素抑制脂多糖（Clipopolysaccharides,LPS）诱导小胶质细胞激活及其神经保护作用。方法:培养原代小鼠小胶质细胞,以LPS激活小胶质细胞使NO大量释放,同时给予不同浓度的虫草素（0.110μmol/L）处理,四甲基偶氮唑蓝（3-（4,5... 详细信息

目的:研究虫草素抑制脂多糖（Clipopolysaccharides,LPS）诱导小胶质细胞激活及其神经保护作用。方法:培养原代小鼠小胶质细胞,以LPS激活小胶质细胞使NO大量释放,同时给予不同浓度的虫草素（0.110μmol/L）处理,四甲基偶氮唑蓝（3-（4,5-dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-Biphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT）法检测细胞存活率,Griess法测定小胶质细胞NO释放,逆转录聚合酶链式反应法检测细胞内诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,i NOS）的mRNA表达。以硝普钠作为NO供体,以1,1-二苯基苦基苯肼（1,1-Biphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基作为自由基的供体,分别考察虫草素对NO和DPP日自由基的直接清除作用。分别以H2O2和以LPs激活的小胶质细胞条件培养液损伤小鼠PC12神经元细胞,MTT法考察虫草素对PC12细胞损伤的保护作用。此外,以羟胺法测定超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性。结果:虫草素能够显著抑制LPS激活的原代小鼠小胶质细胞NO产生及iN05 mRNA表达,同时不影响细胞的存活率;虫草素具有显著的NO清除和DPPH自由基清除作用;虫草素本身对PC12小鼠神经元细胞的生长没有显著影响,但能够显著抑制H2O2或活化小胶质细胞的条件培养液引起的PC12细胞损伤。此外,虫草素可显著提高H2O2损伤的PC12细胞中SOD活性。结论:虫草素可通过抑制iNOS转录和直接清除NO而抑制LPS激活小胶质细胞的NO产生;虫草素还可通过抑制小胶质细胞激活而对PC12神经元细胞产生保护作用,也可通过提高SOD活性而保护H2O2损伤的PC12细胞。因此,虫草素可能对与小胶质细胞激活相关的神经退行性疾病具有潜在的防治作用。

关键词：虫草素脂多糖小胶质细胞激活一氧化氮诱导型一氧化氮合酶神经保护

PTD-Apoptin原核表达载体构建及可溶性表达

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生物技术 2013年第4期23卷 20-24页

作者：贲松彬潘子瑶刘雪梅崔剑谷海峰李其久陈长兰辽宁大学生命科学院辽宁沈阳110036 辽宁大学药学院辽宁沈阳110036

目的:可溶性表达PTD-Apoptin融合蛋白。方法:亚克隆Apoptin基因并人工合成PTD序列,构建原核表达载体pGEX-6p-1-PTD-Apoptin,使载体在*** BL21(DE3)中表达并优化。GST亲和纯化天然状态的融合蛋白,并通过MTT实验验证活性。结果:最佳表达... 详细信息

目的:可溶性表达PTD-Apoptin融合蛋白。方法:亚克隆Apoptin基因并人工合成PTD序列,构建原核表达载体pGEX-6p-1-PTD-Apoptin,使载体在*** BL21(DE3)中表达并优化。GST亲和纯化天然状态的融合蛋白,并通过MTT实验验证活性。结果:最佳表达条件是25℃、0.1mmol/mL IPTG过夜诱导表达,经GST亲和纯化得到天然状态的单一组分融合蛋白,与胃癌823细胞共孵育后细胞存活率为10.86%,与对照组相比具显著差异。结论:成功获得高生物活性的原核可溶性表达融合蛋白PTD-Apoptin,使胃癌823细胞存活率降至10.86%。

关键词： Apoptin PTD 可溶性表达 BL21(DE3) MTT

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人硒蛋白SelK在大肠杆菌中的高效表达

硅谷 2008年第5期 1-1页

作者：牟藤沈国顺陈长兰沈阳农业大学畜牧兽医学院辽宁大学生命科学院

目的:构建硒蛋白SelK的重组表达载体pGEX-6P-1-SelK-GFP。方法:利用PCR、酶切和连接酶连接等技术将硒蛋白selk连接到质粒pGEX-6P-1上,通过酶切、序列测定进行鉴定。通过IPTG诱导重组载体在BL21大肠杆菌中表达,并筛选最适诱导剂浓度和最... 详细信息

目的:构建硒蛋白SelK的重组表达载体pGEX-6P-1-SelK-GFP。方法:利用PCR、酶切和连接酶连接等技术将硒蛋白selk连接到质粒pGEX-6P-1上,通过酶切、序列测定进行鉴定。通过IPTG诱导重组载体在BL21大肠杆菌中表达,并筛选最适诱导剂浓度和最适诱导时间。结果:成功在大肠杆菌中商效表达带有GST的SelK-GFP融合蛋白,占菌体总蛋白的15%,主要以包涵体形式表达。结论:成功构建了pGEX-6P-1-SelK-GFP重组表达质粒,为进一步研究硒蛋白SelK的功能、抗体制备打下了基础。

关键词：人硒蛋白原核表达

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虫草多糖苹果果醋的保健功能评价

食品科学 2014年第7期35卷 232-237页

作者：贲松彬张月孙冬梅谷海峰孟雪莲陈长兰辽宁大学生命科学院辽宁沈阳110036 辽宁大学药学院辽宁沈阳110036

目的:虫草多糖与果醋均具有对人体有益的功效,该实验将两者结合,并通过小鼠连续灌胃体内实验,考察虫草多糖果醋抗疲劳、增加免疫力、降血脂和降血糖等方面的功效。方法:首先从蛹虫草子实体中提取虫草多糖。然后以苹果为原料经过酒精发... 详细信息

目的:虫草多糖与果醋均具有对人体有益的功效,该实验将两者结合,并通过小鼠连续灌胃体内实验,考察虫草多糖果醋抗疲劳、增加免疫力、降血脂和降血糖等方面的功效。方法:首先从蛹虫草子实体中提取虫草多糖。然后以苹果为原料经过酒精发酵和醋酸发酵制备苹果果醋原液,经调配制备苹果果醋。按实验设计添加不同剂量的虫草多糖制备虫草多糖果醋。对成年小鼠进行不同剂量的虫草多糖果醋灌胃后,通过小鼠的负重游泳时间、肝糖原含量和游泳后血乳酸含量测定等判定虫草多糖果醋提高小鼠抗疲劳能力的效果。通过抑制迟发型变态反应和增强碳廓清能力测定判定虫草多糖果醋提高小鼠免疫能力的效果。对成年小鼠在饲喂高脂饲料的同时进行不同剂量的虫草多糖果醋灌胃后,通过血清总胆固醇和甘油三酯水平测定判定虫草多糖果醋对高血脂的预防效果。对成年小鼠高血糖模型进行不同剂量的虫草多糖果醋灌胃后,通过测定血糖值判定虫草多糖果醋的降血糖效果。结果:通过抗疲劳实验研究发现,虫草多糖果醋组与空白对照组相比小鼠的负重游泳时间显著提高,肝糖原含量显著升高,游泳后血乳酸含量显著降低。通过增强免疫力实验研究发现,虫草多糖果醋组与空白对照组相比,耳肿胀度明显下降,廓清指数和吞噬指数显著提高。通过辅助降血脂实验发现,虫草多糖果醋组与饲喂高脂饲料的空白对照组相比,血清总胆固醇和甘油三酯水平显著降低,小鼠体质量显著低于空白对照。通过辅助降血糖实验发现,虫草多糖果醋组与空白对照组相比,血糖水平显著降低。并且各种生物活性实验结果均与虫草多糖果醋中虫草多糖的剂量成正比。虫草多糖果醋的功效要好于虫草多糖和果醋单独使用的功效。结论:虫草多糖果醋具有缓解体力疲劳、增强免疫力、辅助降血脂和辅助降血糖的保健功能。

关键词：虫草多糖果醋辅助降血糖辅助降血脂抗疲劳增强免疫力

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小胶质细胞内的钙离子信号的研究进展

辽宁大学学报（自然科学版） 2017年第1期44卷 34-40页

作者：孟雪莲刘佳陈长兰辽宁大学药学院辽宁沈阳110036

细胞内钙离子(Ca^(2+))对多种生理活动均具有一定的调节作用,它可影响神经递质释放和细胞兴奋性.细胞内钙离子浓度([Ca^(2+)]i)受到多方面调控,[Ca^(2+)]i的变化是重要的信号转导方式之一.小胶质细胞是中枢神经系统中固有的免疫细胞,它... 详细信息

细胞内钙离子(Ca^(2+))对多种生理活动均具有一定的调节作用,它可影响神经递质释放和细胞兴奋性.细胞内钙离子浓度([Ca^(2+)]i)受到多方面调控,[Ca^(2+)]i的变化是重要的信号转导方式之一.小胶质细胞是中枢神经系统中固有的免疫细胞,它们对脑损伤、脑炎症和多种神经退行性疾病有先天性的免疫应答.除了在疾病发生发展中的作用,小胶质细胞也在很大程度上参与了神经元网络的发育和脑组织稳态的维持.受体介导的钙离子信号的传递,是包括小胶质细胞在内的所有细胞中最普遍的信号转导机制.小胶质细胞功能变化与小胶质细胞内钙离子信号的变化密切相关,对小胶质细胞内钙离子信号的研究具有重大的意义.

关键词：小胶质细胞钙离子神经退行性疾病

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莲子心化学成分研究

世界最新医学信息文摘 2018年第73期 100-101页

作者：吕晶韩栋年金磊孟雪莲陈长兰辽宁大学药学院

目的研究莲Nelumbo nucifera Gaertn.的成熟种子中间绿色胚根(莲子心)的化学成分。方法利用ODS、Sephadex LH-20、聚酰胺柱色谱及半制备高效液相色谱等方法分离纯化;通过NMR、MS等波谱方法鉴定其结构。结果从莲子心的乙醇提取物中分离得... 详细信息

目的研究莲Nelumbo nucifera Gaertn.的成熟种子中间绿色胚根(莲子心)的化学成分。方法利用ODS、Sephadex LH-20、聚酰胺柱色谱及半制备高效液相色谱等方法分离纯化;通过NMR、MS等波谱方法鉴定其结构。结果从莲子心的乙醇提取物中分离得到8个化合物,分别鉴定为莲心碱(Liensinine,1)、异莲心碱(Isoliensinine,2)、甲基莲心碱(Neferine,3)、荷叶碱(Nuciferine、4)、去甲乌药碱(Higenamine,5)、3个黄酮类:芦丁(Rutin,6)、金丝桃苷(Hyperoside,7)、木樨草素-β-D-葡萄糖苷(Luteolin-β-D-glycoside,8)。结论化合物8为首次从莲属植物中分离得到。

关键词：莲子心生物碱黄酮

梨矮化砧对早金香矮化性及叶片矿质元素含量影响

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新疆农业科学 2010年第6期47卷 1084-1087页

作者：姜淑苓陈长兰欧春青王斐王西成贾敬贤马力农业部果树种质资源利用重点开放实验室辽宁兴城125100 中国农业科学院果树研究所辽宁兴城125100 辽宁大学药学院沈阳110036 南京农业大学园艺学院南京210095

【目的】以3种矮化砧木做中间砧嫁接早金香梨,进行矮砧嫁接树矮化效应及叶片矿质元素含量研究。【方法】根据公式计算致矮系数;分别采用凯氏法、钒钼黄比色法和火焰光度法测定N、P、K含量,Ca、Mg、Fe、Zn含量的测定采用原子吸收光度法... 详细信息

【目的】以3种矮化砧木做中间砧嫁接早金香梨,进行矮砧嫁接树矮化效应及叶片矿质元素含量研究。【方法】根据公式计算致矮系数;分别采用凯氏法、钒钼黄比色法和火焰光度法测定N、P、K含量,Ca、Mg、Fe、Zn含量的测定采用原子吸收光度法。【结果】(1)3个矮化砧木对早金香梨嫁接树均有显著的致矮作用,致矮效果由大到小依次为:中矮2号>82-5>中矮1号;(2)早金香梨嫁接树叶片中,被测矿质元素均与对照有极显著差异,其中,中矮1号、82-5做矮化砧的嫁接树叶片中,N、Ca、Mg、Fe含量均表现升高的趋势,Fe分别升高了66.5%和53.6%;而中矮2号做矮化砧的嫁接树叶片中,所测定的矿质元素的含量均有不同程度的下降,其中K和Ca的降低程度均超过了10%。【结论】中矮2号为矮化砧木类型,82-5、中矮1号为半矮化砧木类型;中矮1号、82-5矮化中间砧能促进嫁接树对矿质元素的吸收,尤其是对Fe的吸收,而中矮2号矮化中间砧作用相反,需增施肥加以改善。

关键词：梨矮化砧木矮化效应叶片矿质元素