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汉坦病毒S基因在大肠埃希菌中的克隆及表达

天津医药 2006年第7期34卷 436-438页

作者：徐昭陈锦英李力杨东靖天津医科大学微生物教研室 300070 天津市卫生防病中心

目的:在大肠埃希菌中克隆和表达汉坦病毒SEO型及HTN型S基因。方法:PCR扩增汉坦病毒SEO型L99株及HTN型Z10株S基因读码区,前者经EcoRI及XhoI双酶切,后者经SacI及XhoI双酶切,将两者定向克隆入pET32a(+),转入感受态***10。获取重组质粒,经PC... 详细信息

目的:在大肠埃希菌中克隆和表达汉坦病毒SEO型及HTN型S基因。方法:PCR扩增汉坦病毒SEO型L99株及HTN型Z10株S基因读码区,前者经EcoRI及XhoI双酶切,后者经SacI及XhoI双酶切,将两者定向克隆入pET32a(+),转入感受态***10。获取重组质粒,经PCR、双酶切及序列分析鉴定后,转入***21感受态,经IPTG诱导表达,其产物经SDS-PAGE和Western-blot检测。结果:SEO型L99株及HTN型Z10株S基因正确克隆于pET32a(+),目的蛋白的分子质量约为67.1ku,表达量占菌体总蛋白的40%以上,Western-blot有特异性条带。结论:SEO型及HTN型汉坦病毒S基因在大肠埃希菌中获得表达,为其后的应用奠定了基础。

关键词：汉坦病毒大肠杆菌克隆基因表达

乙型流感病毒的RT-PCR-SSCP法初筛分类

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中国公共卫生 2006年第10期22卷 1229-1230页

作者：孔梅段卫平陈锦英李颖李晓燕苏旭王撷秀天津市卫生防病中心微生物学部 300011 天津医科大学微生物教研室

目的应用单链构象多态性（SSCP）对乙型流感病毒血凝素重链区（HA1）基因抗原决定簇集中区进行突变筛选，了解2001～2004年天津地区流行株HA1基因的变异特性。方法病毒培养液提取RNA后RT—PCR扩增HA1基因易发生变异308bp片段，经SSCP分... 详细信息

目的应用单链构象多态性（SSCP）对乙型流感病毒血凝素重链区（HA1）基因抗原决定簇集中区进行突变筛选，了解2001～2004年天津地区流行株HA1基因的变异特性。方法病毒培养液提取RNA后RT—PCR扩增HA1基因易发生变异308bp片段，经SSCP分类，选取各类代表株PCR产物纯化后进行核苷酸序列测定，用DNASTAR软件分析。结果天津地区近几年分离的乙型流感病毒根据SSCP电泳图谱不同分为5类。Victoria系易变区抗原表位有6个位点氨基酸不同于B／Hongkong／330／2001，Yamagata系易变区抗原表位有3个位点氨基酸不同于B／Beijing／76／98，有10个位点不同于B／Sichuan／379／99。Yamagata系与Victoria系相比缺失第163位氨基酸天冬酰胺（N）。O相与D相毒株间未发现氨基酸有差异。结论RCR-SSCP方法可作为初步筛查流感病毒代表株的方法。近几年天津地区乙型流感病毒两大谱系交替流行，且抗原性进一步发生漂移，Yarnagata系毒株为B／Beijing/76／98类似株。

关键词：乙型流感病毒单链构象多态性(SSCP) HA1基因变异

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胃肠道微生态学及生态制剂

天津医药 1995年第6期23卷 379-382页

作者：陈锦英任中原天津医科大学微生物学教研室 300070

对于人类微生态学的认识始于1676年,荷兰人Antony van Leeuwenhoek首次用自制的显微镜观察人体内的微生物。直至十九世纪末,微生物学家才重视人体微生物群的研究。获得突出的进展还是70年代以后,由于厌氧培养技术的改进、悉生生物学的... 详细信息

对于人类微生态学的认识始于1676年,荷兰人Antony van Leeuwenhoek首次用自制的显微镜观察人体内的微生物。直至十九世纪末,微生物学家才重视人体微生物群的研究。获得突出的进展还是70年代以后,由于厌氧培养技术的改进、悉生生物学的研究及现代技术的应用,使人体微生态学的认识逐步深入。胃肠道微生态学是人体微生态学的重要组成部分,研究历史悠久、资料丰富、意义重大。

关键词：胃肠道微生态学生态制剂

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培养大学生英语自主学习能力初探

广西青年干部学院学报 2005年第5期15卷 56-58页

作者：陈锦英福建师范大学外国语学院福建福州350007

自主学习是指学习者能够管理自己的学习行为。信息时代要求人人终身受教育,而终身教育要求学习者具备自主学习的意识和能力。英语语言学习策略理论为学习者自主学习提供了可能。教师在培养大学生英语自主学习能力过程中,要帮助学生树立... 详细信息

自主学习是指学习者能够管理自己的学习行为。信息时代要求人人终身受教育,而终身教育要求学习者具备自主学习的意识和能力。英语语言学习策略理论为学习者自主学习提供了可能。教师在培养大学生英语自主学习能力过程中,要帮助学生树立自主学习意识,成为自主学习的组织者、评估者和资源库。

关键词：自主学习策略培养教师作用

兼性和需氧革兰氏阴性细菌对β-内酰胺抗生素耐药机制的研究进展

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天津医药 1989年第12期17卷 760-763页

作者：陈锦英任中原天津医学院微生物学教研室

β-内酰胺抗生素的突出特点是特异地抑制细菌细胞壁肽聚糖的合成,由于其低毒和有效性使之在临床应用占有优势。过去几十年有关细菌对β-内酰胺抗生素耐药机制研究的注意力大都集中在β-内酰胺酶上,现已认识到抗生素与革兰氏阴性(G^-)

关键词： β-内酰胺抗生素细菌耐药机制

45株尿道致病性大肠埃希菌papA和papG基因分型研究

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中华流行病学杂志 2008年第11期29卷 1161-1162页

作者：张敬平吴庆刚陈锦英郑明寰钮伟民尤凤兴姜永江苏省无锡市疾病预防控制中心 214023 天津医科大学基础医学院中国疾病预防控制中心传染病预防控制所

大肠埃希菌是尿路感染的主要致病菌，其中85％以上的菌株具有P菌毛，后者可特异性黏附、定植入泌尿道上皮细胞引起尿道上行性感染，这类菌称为尿道致病性大肠埃希菌（Uropathogenic ***，UPEC）。P菌毛尖端PapG黏附素是UPEC黏附定植尿... 详细信息

大肠埃希菌是尿路感染的主要致病菌，其中85％以上的菌株具有P菌毛，后者可特异性黏附、定植入泌尿道上皮细胞引起尿道上行性感染，这类菌称为尿道致病性大肠埃希菌（Uropathogenic ***，UPEC）。P菌毛尖端PapG黏附素是UPEC黏附定植尿道的关键因子，PapG依其受体结合特异性不同分为Ⅰ、Ⅱ型。P菌毛蛋白总量的99．9％是PapA（F抗原），是UPEC血清学分型的基础，现共发现11个血清型，

关键词：尿道致病性大肠埃希菌 papA papG 基因分型

尿道致病性大肠杆菌新基因R049特征的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2011年第8期31卷 702-706页

作者：张维孙雯雯葛新吕本楠陈锦英天津医科大学基础医学院 300070 天津市疾病预防控制中心 300011

目的明确从国内分离的尿道致病性大肠杆菌（UPEC）132中发现的新基因R049的特征及其表达蛋白在菌体内的定位。方法提取UPEC132染色体DNA，鸟枪法构建文库，高通量焦磷酸法测序，Newbler软件拼接，进行生物信息学分析，确定R049相关片段... 详细信息

目的明确从国内分离的尿道致病性大肠杆菌（UPEC）132中发现的新基因R049的特征及其表达蛋白在菌体内的定位。方法提取UPEC132染色体DNA，鸟枪法构建文库，高通量焦磷酸法测序，Newbler软件拼接，进行生物信息学分析，确定R049相关片段的特征。提取UPEC132的内膜和外膜蛋白，与其全菌裂解物一起进行SDS-PAGE，用R049重组蛋白抗血清进行Westernblot，确定R049表达蛋白的菌体内位置。结果成功构建UPEC132染色体文库，获取R049-contig169022bp，与UPEC536染色体第233074至451502位碱基序列同源性较高，其中含有R049基因的20773bp片段替代相当于UPEC536染色体上PAIⅢ536的位置，G＋C含量为46，97％，两端具有正向重复序列，并与插入元件整合酶基因和thrWtRNA基因相邻，包含25个ORF，命名为R049-GI。R049基因位于***的第13个ORF。SDS—PAGE和Westernblot分析显示R049基因表达相对分子质量为47．0×10^3蛋白是UPEC132的外膜蛋白。结论R049基因编码细菌的外膜蛋白，是UPEC132通过基因水平转移获得的染色体基因组岛的组成部分。

关键词：尿道致病性大肠杆菌 R049基因外膜蛋白基因组岛

泌尿道致病性大肠埃希菌PapG重组蛋白对小鼠尿道上行感染的免疫保护作用

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中国生物制品学杂志 2005年第4期18卷 305-307页

作者：郑铃王芝敏刘超斌郑秀芬陈锦英福建医科大学病原生物学系福州350004 福建省妇幼保健院妇产科福州350001 天津医科大学天津300070

目的探讨泌尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)P菌毛粘附素PapG重组融合蛋白对小鼠尿道上行感染的免疫保护作用。方法纯化蛋白按一定程序免疫BALB/c雌性小鼠,末次免疫后第7天用UPEC临床分离株进行尿道上行攻击;攻击后第5天检测尿液和肾脏培养菌... 详细信息

目的探讨泌尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)P菌毛粘附素PapG重组融合蛋白对小鼠尿道上行感染的免疫保护作用。方法纯化蛋白按一定程序免疫BALB/c雌性小鼠,末次免疫后第7天用UPEC临床分离株进行尿道上行攻击;攻击后第5天检测尿液和肾脏培养菌,同时测定血清抗体效价。结果经GST-PapG重组蛋白和GST纯化蛋白免疫的小鼠体内均产生了相应的抗体,而仅经重组蛋白免疫的小鼠具有一定的抵抗毒株上行感染的能力,表现为肾脏培养菌量均明显减少。结论PapG粘附素与GST构成的重组融合蛋白对小鼠尿道上行感染具有一定的免疫保护作用。

关键词：泌尿道致病性大肠埃希菌PapG 重组蛋白小鼠尿道上行感染免疫保护作用粘附素

铜绿假单胞菌生物被膜形成过程中多糖合成相关基因表达的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第6期29卷 513-516页

作者：李立艳魏殿军门昆武大伟陈锦英天津医科大学第二医院检验科 300211 天津医科大学基础医学院

目的了解铜绿假单胞菌（Pseudomonas aerttginosa，Pa）生物被膜形成过程中多糖生物合成相关基因在生物被膜形成中的表达，探讨其在生物被膜形成中的调控作用。方法分别收集非黏液型铜绿假单胞菌PAO1的浮游菌及生物被膜菌，用实时荧光定... 详细信息

目的了解铜绿假单胞菌（Pseudomonas aerttginosa，Pa）生物被膜形成过程中多糖生物合成相关基因在生物被膜形成中的表达，探讨其在生物被膜形成中的调控作用。方法分别收集非黏液型铜绿假单胞菌PAO1的浮游菌及生物被膜菌，用实时荧光定量tit—PCR的方法对基因的表达进行相对定量分析。结果多糖合成相关基因pslA、algD,pelA的mRNA在生物被膜菌中的相对表达量均高于浮游菌。结论pslA、algD,pelA的表达与铜绿假单胞菌生物被膜形成密切相关，在生物被膜形成中具有重要作用。

关键词：铜绿假单胞菌生物被膜多糖