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BHK-21细胞在生物反应器中生长的观察

中国兽医科技 1992年第4期22卷 30-31页

作者：胡世华宋明兰陈应理杨敏王宗子中国农业科学院兰州兽医研究所 730046

近年来,在超量培养动物细胞技术方面,已取得一定的进展,许多新型的生物反应器培养系统,包括微载体、中空纤维、多层年板式、微胶囊固定化细胞、滚瓶及灌注系统等。悬浮培养已在几千升的水平上生产口蹄疫、麻疹、狂犬病等疫苗及干扰素等... 详细信息

近年来,在超量培养动物细胞技术方面,已取得一定的进展,许多新型的生物反应器培养系统,包括微载体、中空纤维、多层年板式、微胶囊固定化细胞、滚瓶及灌注系统等。悬浮培养已在几千升的水平上生产口蹄疫、麻疹、狂犬病等疫苗及干扰素等产品。大规模的培养系统已达10000升的规模,但多数的生产系统是在几百升至几千升的规模中进行的。我国目前在兽用疫苗生产中基本还延用传统的液瓶单细胞层培养。我们实验的目的就是以BHK-21细胞的悬浮培养来替代其单层培养。

关键词：细胞生物反应器疫苗 BHK-21细胞

口蹄疫病毒Mya98谱系猪源及牛源2010年分离株的分子特征及蚀斑显型比较分析

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中国兽医科学 2012年第4期42卷 331-338页

作者：周强包慧芳白兴文孙普陈应理谢宝霞卢曾军刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点实验室甘肃省生物检测工程技术研究中心国家口蹄疫参考实验室OIE口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

为了明确口蹄疫病毒(FMDV)Mya98谱系猪源及牛源2010年分离株的分子特征及蚀斑显型差异,对采自不同宿主的4株FMDV进行了分子特征分析和蚀斑形态的比较。结果显示,来自不同宿主动物的分子特征差异主要表现为猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S2与... 详细信息

为了明确口蹄疫病毒(FMDV)Mya98谱系猪源及牛源2010年分离株的分子特征及蚀斑显型差异,对采自不同宿主的4株FMDV进行了分子特征分析和蚀斑形态的比较。结果显示,来自不同宿主动物的分子特征差异主要表现为猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S2与2个牛源毒株之间具有21个特异性的氨基酸置换位点,分散在ORF范围内。猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S1具有与牛源毒株大量相似的氨基酸位点,并且与2株牛源毒株一样,都显示为小斑的蚀斑显型,而猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S2在蚀斑试验中显示为大小斑混合存在。结果表明,猪源毒株O/CHN/Mya98/2010S2的变异位点对病毒蚀斑显型的改变具有重要意义。

关键词： O型口蹄疫病毒 Mya98谱系不同宿主分子特征蚀斑显型

口蹄疫病毒OH/CHA/99株全长基因组感染性克隆的构建

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科学通报 2004年第9期49卷 858-862页

作者：刘光清刘在新陈应理包慧芳刘湘涛谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学开放实验室兰州730046

以构建的口蹄疫病毒OH/CHA/99株全长cDNA为模板,使用T7RNA聚合酶系统在体外进行转录,得到病毒RNA.用脂质体转染法将转录物RNA导入BHK细胞,可观察到典型的口蹄疫病毒致细胞病变效应.对收获的病毒分别用RT-PCR,乳鼠毒力试验以及免疫电子... 详细信息

以构建的口蹄疫病毒OH/CHA/99株全长cDNA为模板,使用T7RNA聚合酶系统在体外进行转录,得到病毒RNA.用脂质体转染法将转录物RNA导入BHK细胞,可观察到典型的口蹄疫病毒致细胞病变效应.对收获的病毒分别用RT-PCR,乳鼠毒力试验以及免疫电子显微镜观察等方法进行鉴定,结果表明拯救到特定的口蹄疫病毒.同时用空斑实验法观察了拯救病毒及其亲本毒株的生长特性,结果表明二者在致病性上没有明显差异,这将为进一步探索猪口蹄疫病毒致病的分子机制及研制新型口蹄疫疫苗奠定良好的基础.

关键词：口蹄疫病毒全长cDNA 转录物RNA OH/CHA/99株克隆

口蹄疫病毒O/CHN/Mya98/33-P株前导蛋白对病毒感染性的影响

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微生物学通报 2014年第10期41卷 2052-2060页

作者：张萌白兴文李平花范朋举包慧芳孙普卢曾军曹轶梅陈应理刘在新中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046

【目的】研究口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)前导蛋白对于病毒感染性的影响。【方法】利用反向遗传操作技术,以O/CHN/93现用疫苗株的感染性克隆为骨架,分别构建了含口蹄疫病毒中国分离株O/CHN/Mya98/33-P和O/CHN/Mya98/... 详细信息

【目的】研究口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)前导蛋白对于病毒感染性的影响。【方法】利用反向遗传操作技术,以O/CHN/93现用疫苗株的感染性克隆为骨架,分别构建了含口蹄疫病毒中国分离株O/CHN/Mya98/33-P和O/CHN/Mya98/HN1前导蛋白的两株嵌合全长cDNA感染性克隆,采用实时荧光定量PCR检测两株不同的嵌合病毒感染猪肾原代细胞后细胞内IFNβ和OAS mRNA的转录情况。【结果】嵌合病毒rOHN1Lab增殖能力较弱,其对应诱导产生的IFNβ和OAS mRNA含量较高,而嵌合毒rO33Lab相对于rOHN1Lab增殖能力较强,他们诱导产生的IFNβ和OAS mRNA含量较低。【结论】研究表明口蹄疫病毒中国分离株O/CHN/Mya98/33-P前导蛋白具有更强的抗IFNβmRNA转录的能力,该研究能够为进一步鉴定FMDV前导蛋白抗宿主先天性免疫的关键性位点奠定基础。

关键词：口蹄疫病毒嵌合病毒前导蛋白 IFNβ 转录影响

口蹄疫病毒3D蛋白对DNA疫苗免疫效果的影响

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中国兽医科技 2004年第3期34卷 12-17页

作者：郭慧琛孙世琪云涛张腾国包慧芳陈应理马军武刘湘涛刘在新谢庆阁中国农业科学院兰州兽医研究所农业部畜禽病毒学重点开放实验室甘肃兰州730046 石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 兰州大学生命科学学院甘肃兰州730000

将携带O型FMDVChina 99株P1 2A、部分 2B及 3C蛋白酶编码基因的真核表达质粒与在毕赤酵母中表达的纯化FMDVChina 99株 3D蛋白同时经肌肉注射方法接种豚鼠。以MTT法检测豚鼠脾淋巴细胞经植物血凝素 (PHA)刺激后的增殖活性 ,以间接ELISA... 详细信息

将携带O型FMDVChina 99株P1 2A、部分 2B及 3C蛋白酶编码基因的真核表达质粒与在毕赤酵母中表达的纯化FMDVChina 99株 3D蛋白同时经肌肉注射方法接种豚鼠。以MTT法检测豚鼠脾淋巴细胞经植物血凝素 (PHA)刺激后的增殖活性 ,以间接ELISA方法检测血清FMDV特异抗体变化 ,并以微量中和试验检测中和抗体水平。结果表明 ,FMDDNA疫苗与 3D蛋白共同免疫豚鼠后 ,抗体水平没有明显提高 ,攻毒后的保护率为 2 5 %。

关键词：口蹄疫病毒 3D蛋白 DNA疫苗免疫效果

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传代细胞支原体污染的快速检查

中国兽医科学 1988年第10期 43-44页

作者：胡世华陈应理杨敏宋明兰王宗子中国农业科学院兰州兽医研究所

近年来国外报道支原体对细胞的污染相当普遍。有人提出,在引用已有文献结果时,都应考虑和分析所用的细胞是否存在支原体污染,如存在支原体污染,则相应实验结果的可靠性要重新加以考虑。

关键词：支原体污染传代细胞沉淀物