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ZG16对小鼠脂代谢的影响及其在结肠炎发生中的作用研究

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ZG16对小鼠脂代谢的影响及其在结肠炎发生中的作用研究

作者：陈宜欣山东师范大学

学位级别：硕士

酶原颗粒蛋白16（Zymogen granule protein 16,ZG16）最初在大鼠胰腺酶原颗粒中发现,是一种含有Jacalin结构域的凝集素家族成员,主要在蛋白分选与运输、K传导调控、病原性真菌识别以及肿瘤的发生和发展中发挥作用。炎症性肠疾病（IBD）... 详细信息

酶原颗粒蛋白16（Zymogen granule protein 16,ZG16）最初在大鼠胰腺酶原颗粒中发现,是一种含有Jacalin结构域的凝集素家族成员,主要在蛋白分选与运输、K传导调控、病原性真菌识别以及肿瘤的发生和发展中发挥作用。炎症性肠疾病（IBD）是一种异质性、慢性和复发性肠道疾病,主要包括溃疡性结肠炎（UC）和克罗恩病（CD）两种类型,会引起腹泻、直肠出血和腹痛等多种症状,但其发病机理各有不同。前期研究表明,与WT小鼠相比,ZG16小鼠诱导性结肠炎表型显著,而且ZG16小鼠腹部脂肪垫明显增厚。ZG16与肠炎有着密切的关联,但其与脂代谢之间的关系尚未报道。因此,本论文对ZG16与脂代谢之间的关联以及在肠炎发生中的作用进行了探究。（1）ZG16基因敲除对小鼠粪便代谢组的影响研究本论文对WT和ZG16小鼠粪便进行非靶向代谢组分析并筛选得到140种差异代谢物。分析显示,这些差异代谢物包括脂质和类脂分子、有机酸及其衍生物、有机氧化合物以及核苷、核苷酸和类似物等多种类别,它们分别富集在代谢、遗传信息处理、细胞过程和生物体系统等功能通路中。其中,脂质代谢相关的通路中代谢物占比最大、数量最多,表明缺失ZG16基因可影响小鼠体内脂类代谢过程。（2）12-酮基石胆酸处理对小鼠肠炎和细胞因子表达的影响研究本论文选取ZG16小鼠粪便中高表达的脂类相关的差异代谢物12-酮基石胆酸（12Keto-DCA）,处理DSS诱导的WT小鼠。结果表明,12Keto-DCA处理组小鼠结直肠长度明显缩短,脾指数显著增加。IL-1β的表达在脾脏中显著增加,而IL-18的表达在直肠和脾脏中明显降低。该结果表明,ZG16缺失导致的肠炎加重与脂类代谢物有关。然后,本论文使用12Keto-DCA处理RAW 264.7细胞后,进行LPS和poly I:C等多种病原体相关分子模式的处理,结果显示多种炎症因子的表达发生了显著变化,说明12Keto-DCA处理可加重细胞的炎症反应。（3）ZG16基因敲除对小鼠血清代谢组及脂质代谢物的影响研究粪便代谢组学以粪便中的代谢物为研究对象,来揭示肠道微生物对宿主代谢的影响,其更多地关注肠道微生物和宿主之间的代谢互作。然而,血清代谢组学则是通过对血清中代谢物的研究来发现和分析生物体内的代谢变化,其在反映生物体内的代谢方面具有更全面、更多样的特点。因此,为了进一步验证以上结果,本论文还对WT和ZG16小鼠的血清进行非靶向代谢组学分析。结果显示,两种基因型小鼠间具有111种差异代谢物,分别富集在不同的功能通路中,如代谢、遗传信息处理、细胞过程和生物体系统等。其中代谢物数量最多的是脂质代谢通路,代谢物占比最多的是脂质及类脂小分子物质。这一结果与粪便代谢组分析得到的一致,说明ZG16基因可能在小鼠脂代谢过程中发挥重要的作用。（4）棕榈酰肉碱处理对小鼠肠炎发生的影响血清代谢组分析发现,ZG16小鼠体内脂质代谢物棕榈酰肉碱（Palmitoyl-L-carnitine）显著降低。本论文使用棕榈酰肉碱处理DSS诱导小鼠,发现小鼠体重显著降低,结肠长明显缩短,且组织中炎症因子IL-1β和IL-18的表达显著增加。棕榈酰肉碱转移酶2（CPT2）是脂肪酸β氧化过程中的关键酶,可催化棕榈酰肉碱转化为酰基辅酶A和游离肉碱。因此,本章进一步对ZG16敲除小鼠中CPT2表达的变化进行了探究,实时荧光定量PCR和Western blot结果表明,缺失ZG16后CPT2的m RNA和蛋白水平均显著升高。由以上结果可知,ZG16缺失增加小鼠体内CPT2的表达,从而影响脂代谢,并引起腹部脂肪垫增厚。综上所述,本论文通过代谢组学分析发现ZG16小鼠体内脂质代谢发生显著变化,其中12Keto-DCA和棕榈酰肉碱处理均可加重小鼠肠炎和炎症细胞因子的表达变化,同时ZG16缺失还会引起脂代谢过程中的关键酶CPT2表达水平的升高。以上结果说明,ZG16在小鼠脂代谢过程中发挥重要作用,并进一步影响小鼠肠炎的发生,这一发现可以为炎症性疾病的研究及防治提供理论基础和分子靶标。

关键词：酶原颗粒蛋白16 炎症性肠疾病代谢组学 12-酮基石胆酸棕榈酰肉碱

凝集素(E-PHA)对肿瘤细胞膜糖链的识别

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中国生化药物杂志 1993年第4期14卷 42-44页

作者：张锡然陈宜峰朱红阳丁邦裕戴美红南京师范大学生物系南京210024 江苏省肿瘤防治研究所

本文采用免疫荧光技术研究了E-PHA(菜豆红细胞凝集素)在6个肿瘤细胞系中的分布。结果表明,E-PHA在Hep-2,Hela,SGC,GLC,1172细胞均呈阳性荧光反应,而K_562呈阴性或弱阳性。此外,E-PHA在各种细胞中的分布特点也有所不同。结果提示,E-PHA... 详细信息

本文采用免疫荧光技术研究了E-PHA(菜豆红细胞凝集素)在6个肿瘤细胞系中的分布。结果表明,E-PHA在Hep-2,Hela,SGC,GLC,1172细胞均呈阳性荧光反应,而K_562呈阴性或弱阳性。此外,E-PHA在各种细胞中的分布特点也有所不同。结果提示,E-PHA能识别不同结构的糖链,对肿瘤细胞的诊断可能有一定意义。

关键词：免疫荧光凝集素肿瘤细胞膜糖链

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云南野牛的染色体

Journal of Genetics and Genomics 1978年第3期 249-251+270页

作者：陈宜峰单祥年曹筱梅李崇云殷留勇中国科学院昆明动物研究所

云南野牛与家养黄牛(Bos taurus)同属。1958年寿振黄等人首次报道,发现于云南省南部西双版纳地区。李致祥等人(1963)对此种野牛也进行过多年的驯化及研究工作。鉴于云南野牛染色体资料尚缺,需要观察研究;另一方面为了准备进行野牛与家... 详细信息

云南野牛与家养黄牛(Bos taurus)同属。1958年寿振黄等人首次报道,发现于云南省南部西双版纳地区。李致祥等人(1963)对此种野牛也进行过多年的驯化及研究工作。鉴于云南野牛染色体资料尚缺,需要观察研究;另一方面为了准备进行野牛与家养黄牛的杂交育种试验,也需要对野牛的染色体组型加以分析,并与黄牛比较,了解它们之间的不

关键词：云南野牛黄牛染色体染色体组型

凝集素(L-PHA,E-PHA)受体在肿瘤细胞系中的分布研究

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凝集素(L-PHA,E-PHA)受体在肿瘤细胞系中的分布研究

中国细胞生物学学会第五次会议

作者：张锡然陈宜峰朱红阳丁邦裕戴美红南京师范大学生物系江苏省肿瘤防治研究所

L-PHA(白细胞凝集素),E-PHA(红细胞凝集素)是从江苏菜豆PHA-P中经分离纯化制得的同工凝集素。本文利用免疫荧光技术来研究了L-PHA,E-PHA要离体培养的肿瘤细胞系(Hep-2,Hela,Glc,1172,K562)中的分布与

关键词：

来源： cnki会议评论

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我国大额牛的描述及其染色体的研究

自然杂志 1979年第11期 8-9页

作者：曾养志单祥年陈宜峰罗丽华曹筱梅中国科学院昆明动物研究所云南农业大学

大额牛(Bos frontalis)产于我国云南省西部高黎贡山北麓独龙江流域,是一种半野生的为数很少的珍贵畜类。由于那里交通极其不便,因此国内过去无人对此牛进行过研究,本文是首次报道。

关键词：云南野牛大额牛染色体

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华南虎和东北虎血清同功酶的研究

南京师大学报（自然科学版） 1995年第1期18卷 81-84页

作者：陆佩洪张锡然刘淼红星陈宜峰黄恭情南京南范大学生物系苏州市动物园

对华南虎（Ｐａｎｔｈｅｒａｔｉｇｒｉｓａｍｏｙｅｎｓｉｓ）和东北虎（Ｐａｎｔｈｅｒａｔｉｇｒｉｓａｍｕｒｅｎｓｉｓ）血清酯酶、过氧化物酶、乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、山梨醇脱氢酶和谷氨酸脱氢酶的同功酶进行了测定．结晶表明。

关键词：虎血清清蛋白同功酶华南虎东北虎食肉目

我国黄牛属(Bos)五个种的染色体比较研究

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动物学研究 1980年第1期 75-81页

作者：单祥年陈宜峰罗丽华曹筱梅宋继志曾养志中国科学院昆明动物研究所云南农业大学

本文应用外周血淋巴细胞短期培养方法,研究了我国黄牛属中五种牛的染色体组型,结果:黄牛(Bos taurus)2n=60;牦牛(Bos grunniens)2n=60;高峰牛(Bos indicus)2n=60;大额牛(Bos frontalis)2n=58;云南野牛(Bos gaurus readei)2n=56。并从染色体数目和形态上比较了它们之间的差异和类同。最后,从细胞遗传学角度讨论了这几种牛彼此之间杂交育种的可能性,为畜牧业上培养新的优良牛种提供了细胞遗传学的依据。

关键词：黄牛牦牛髦牛大额牛染色体 Bos 云南野牛

用微载体培养家蚕BmN细胞高效表达人α－干扰素基因的实验研究

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药物生物技术 1994年第2期1卷 1-4页

作者：邓小昭张林元周永春陈宜峰李光富刁振宇南京师范大学生物系南京军区军事医学研究所分子遗传学研究室上海第二军医大学分子遗传学教研室

在１０００ｍｌ滚瓶中，用微载体Ｃｙｔｏｄｅｘ３培养家蚕细胞，在合适的培养条件下（细胞接种浓度３．６×１０５细胞／ｍｌ、微载体浓度５ｇ／Ｌ），５天后，细胞的终密度达２．８×１０６细胞／ｍｌ，细胞增长指数为７．９。在细胞... 详细信息

在１０００ｍｌ滚瓶中，用微载体Ｃｙｔｏｄｅｘ３培养家蚕细胞，在合适的培养条件下（细胞接种浓度３．６×１０５细胞／ｍｌ、微载体浓度５ｇ／Ｌ），５天后，细胞的终密度达２．８×１０６细胞／ｍｌ，细胞增长指数为７．９。在细胞指数生长期（４８～６０小时）用载有人α－干扰素（ＩＦＮ－α）基因的重组病毒接种（感染复数为０．４ＰＦＵ／细胞），５天后，培养上清中ＩＦＮ－α效价为６．４×１０６ＩＵ／ｍｌ，是用方瓶培养的家蚕ＢｍＮ细胞ＩＦＮ－α的表达量的４倍。

关键词：微载体细胞培养 α干扰素基因表达 BmN细胞

用万能引物PCR法从YAC中分离制备荧光原位杂交探针的研究

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Acta Genetica Sinica 1998年第5期25卷 403-408页

作者：史庆华张坚宣潘淑娟张锡然陈宜峰单祥年黄浩杰余龙赵寿元郑其平 Adler I-D 南京师范大学生物系复旦大学遗传学研究所 GSF-Institute of Genetics D-85764 Neuherberg Germany

报道了一种从微量且未知碱基顺序的YAC DNA中制备FISH探针的新方法——万能引物PCR(UP PCR),即把复性后的UP-Linker连接于PFGE分离后经Alu Ⅰ酶切的YAC DNA上,再用UP对其进行PCR扩增和标记。由于Alu Ⅰ的广谱性和UP与Linker长度不同等,... 详细信息

报道了一种从微量且未知碱基顺序的YAC DNA中制备FISH探针的新方法——万能引物PCR(UP PCR),即把复性后的UP-Linker连接于PFGE分离后经Alu Ⅰ酶切的YAC DNA上,再用UP对其进行PCR扩增和标记。由于Alu Ⅰ的广谱性和UP与Linker长度不同等,使该法能根据PCR效率调节扩增产物的广泛性向特异性的转变,且产物能覆盖YAC嵌入DNA的全长。此法制备的人21号染色体FISH探针,特异性强,杂交信号明亮,21号染色体的检出率高。该法稳定简便。

关键词：万能引物(UP) PCR YAC FISH