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布鲁杆菌病致病机制研究现状与趋势

中华地方病学杂志 2013年第5期32卷 473-474页

作者：陈创夫王远志石河子大学新疆地方与民族高发病教育部重点实验室 832003

布鲁杆菌病（简称布病）是由布鲁杆菌属细菌引起的一种人畜共患传染病。近年来，我国布病疫情形势严峻，每年有2～4万人的新发病例。布鲁杆菌为兼性胞内寄生菌，人感染后常表现为慢性持续性感染，不易治愈，目前尚没有安全、有效的人用... 详细信息

布鲁杆菌病（简称布病）是由布鲁杆菌属细菌引起的一种人畜共患传染病。近年来，我国布病疫情形势严峻，每年有2～4万人的新发病例。布鲁杆菌为兼性胞内寄生菌，人感染后常表现为慢性持续性感染，不易治愈，目前尚没有安全、有效的人用疫苗。药物治疗对慢性感染患者治愈率低。疫苗接种和药物治疗是布病防控的重要手段，布病病原体入侵、胞内寄生、致病和免疫逃避的分子机制至今尚不完全清楚。这已成为制约研发有效疫苗和药物的瓶颈。因此．开展布鲁杆菌致病机制研究．不仅是病原生物学和免疫学研究的重要科学问题，更是研发布鲁杆菌高效疫苗、药物和防控政策制定的科学基础。

关键词：布鲁杆菌功能基因组胞内寄生免疫逃逸

高效抑制O型口蹄疫病毒shRNA分子的筛选与验证

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中国兽医学报 2012年第1期32卷 13-17,22页

作者：马铈委陈创夫乔军新疆地方与民族发病教育部重点实验室新疆石河子832003 石河子大学动物科技学院新疆石河子832003

针对O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease veirus,FMDV)基因组高度保守的VP1和3D区段,选取了120个干扰靶位,根据RNAi技术原理,构建了包括对照在内的82个shRNA表达质粒;通过细胞攻毒试验,提取细胞毒液RNA,然后RT-PCR,最后real-time PC... 详细信息

针对O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease veirus,FMDV)基因组高度保守的VP1和3D区段,选取了120个干扰靶位,根据RNAi技术原理,构建了包括对照在内的82个shRNA表达质粒;通过细胞攻毒试验,提取细胞毒液RNA,然后RT-PCR,最后real-time PCR检测病毒和shRNA的表达量。结果显示,干扰质粒组基因表达抑制率为63%～96.8%,其中pSiRe-Zs-VP1-54和pSiRe-Zs-3D-12等2个表达质粒抑制效率最好,分别为96.8%和87%,表明这2个表达质粒能够明显抑制FMDV的复制。

关键词：口蹄疫病毒 RNAi shRNA序列筛选

犬瘟热病毒TN野毒株核蛋白基因的克隆与序列分析

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中国兽医科技 2004年第4期34卷 24-28页

作者：孟庆玲乔军陈创夫塔里木农垦大学动物科技学院新疆阿拉尔843300 石河子大学动物科技学院新疆石河子833200

根据GenBank中收录的犬瘟热病毒(CDV)Onderstepoort株核蛋白基因(N)序列,设计了1对特异性引物,用该引物对分离的TN野毒株进行了RT PCR扩增;将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM T质粒连接,得到重组质粒pTN。经核苷酸序列测定,CDVTN株N基因... 详细信息

根据GenBank中收录的犬瘟热病毒(CDV)Onderstepoort株核蛋白基因(N)序列,设计了1对特异性引物,用该引物对分离的TN野毒株进行了RT PCR扩增;将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM T质粒连接,得到重组质粒pTN。经核苷酸序列测定,CDVTN株N基因的ORF全长1569bp,编码523个氨基酸;将TN野毒株与GenBank中收录的其他CDV毒株进行比较,N基因核苷酸序列的同源性为94%～99%,推导的N蛋白氨基酸序列的同源性为97%～99%。TN株与Onderstepoort疫苗株氨基酸序列的差异主要集中在N端(17～159位)和C端(408～519位),中间的区域则高度保守。此外,在CDVN蛋白N端281～289位上也发现存在与麻疹病毒(MV)N蛋白完全相同的Y P A L G L H E F9肽序列,推测可能是诱导CTL活性的靶蛋白的抗原表位之一。氨基酸组成分析发现,推导的N蛋白氨基酸序列中亮氨酸、丝氨酸和异亮氨酸所占比例很高,提示该蛋白具有高度螺旋和缠绕的分子结构。

关键词：犬瘟热病毒 TN野毒株核蛋白基因克隆序列分析分子结构氨基酸 CDV

高分辨率溶解曲线分析结合COLD-PCR快速检测绵羊低丰度FecB基因

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中国畜牧杂志 2017年第6期53卷 122-126,131页

作者：李国忠陈创夫新疆石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

本文利用高分辨率熔解曲线分析结合COLD-PCR建立绵羊骨形态发生蛋白受体IB(BMPR-IB)基因低丰度A746G点突变的检测方法,为Fec B基因大面积高通量筛查提供方便快捷和低成本的检测技术。实验分别提取绵羊BMPR-IB基因A746G点突变阳性纯合子... 详细信息

本文利用高分辨率熔解曲线分析结合COLD-PCR建立绵羊骨形态发生蛋白受体IB(BMPR-IB)基因低丰度A746G点突变的检测方法,为Fec B基因大面积高通量筛查提供方便快捷和低成本的检测技术。实验分别提取绵羊BMPR-IB基因A746G点突变阳性纯合子和阴性纯合子的基因组,分别PCR扩增223 bp的目的片段,测定浓度和纯度后,分别稀释至0.05 ng/μL,将阳性纯合子用阴性纯合子进行系列稀释作为模板标准品。根据模板标准品序列设计合成3对引物,以标准品为模板进行COLD-PCR,其产物进行高分辨率熔解曲线分析,生成的归一化温度转移差异图(Normlized and Temp-Shifted Differines Plot)即为标准曲线图,作为待测样品Fec B检测的依据,对其可靠重复性做了进一步验证。结果表明:2对引物COLD-PCR HRM标准曲线图曲线分离清晰可靠,检测下限均为0.5%,与传统q PCR HRM相比,灵敏度提高到4倍。本实验建立的绵羊低丰度Fec B基因检测方法可以用于绵羊Fec B基因大面积高通量快速筛查工作。

关键词：绵羊 FecB基因 COLD-PCR 高分辨率熔解曲线分析

布鲁杆菌侵染巨噬细胞过程中与外膜蛋白25作用的受体筛选

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中华地方病学杂志 2014年第6期33卷 596-600页

作者：李亚王远志陈创夫新疆石河子大学生命科学学院 832000 新疆石河子大学医学院 832000 新疆石河子大学动物科技学院 832000

目的筛选布鲁杆菌侵染巨噬细胞过程中与布鲁杆菌外膜蛋白（OMP）25作用的受体.方法利用已经构建的pET32a-omp25表达载体,在异丙基硫代半乳糖苷OPTG）诱导下表达重组OMP25.蛋白,Ni-NTA柱纯化OMP25蛋白;采用噬菌体展示技术从M13噬菌体... 详细信息

目的筛选布鲁杆菌侵染巨噬细胞过程中与布鲁杆菌外膜蛋白（OMP）25作用的受体.方法利用已经构建的pET32a-omp25表达载体,在异丙基硫代半乳糖苷OPTG）诱导下表达重组OMP25.蛋白,Ni-NTA柱纯化OMP25蛋白;采用噬菌体展示技术从M13噬菌体环形多肽展示库中进行环形7肽（c7c）的筛选;生物信息学软件分析筛选出潜在多肽,用酶联免疫吸附试验（ELISA）验证OMP25与多肽分子的结合活性;合成结合力高的7肽分子,用菌落形成单位计数和ELISA法检测其在布鲁杆菌感染小鼠巨噬细胞过程中的功能.结果噬菌体展示技术共筛选出42个7肽分子;生物信息学软件分析筛选出4个潜在多肽,ELISA证实4个7肽分子（ST-7、MT-7、TT-7和SN-7）能够与布鲁杆菌OMP25蛋白具有高亲和力;菌落形成单位计数结果显示：多肽分子ST-7、MT-7、TF-7和SN-7在布鲁杆菌黏附或抑制胞内寄生中均有一定作用.ST-7、MT-7、TF-7和SN-7对牛种布鲁杆菌2308菌株的抑制率范围分别为14.4％～51.8％、49.6％～69.5％、43.2％～74.4％、57.5％～82.2％.ELISA结果显示,与对照组比较,ST-7和MT-7多肽实验组肿瘤坏死因子（TNF-α）的量在各个时间点的差异无统计学意义（P均＞ 0.05）;而TF-7和SN-7多肽实验组TNF-α的量在8h前差异无统计学意义（P均＞0.05）,但在12、24h时促进TNF-α的分泌,差异具有统计学意义（P均＜0.05）.结论筛选获得4个有效的OMP25作用受体,其中TF-7、SN-7对布鲁杆菌2308侵染小鼠巨噬细胞既抑制入侵又抑制胞内生存,ST-7、MT-7对其只起抑制入侵的作用.

关键词：布鲁杆菌外膜蛋白25 噬菌体展示技术巨噬细胞 outer membrane protein 25

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结核分枝杆菌ACR蛋白的原核表达及纯化

中国预防兽医学报 2009年第7期31卷 528-531页

作者：曹旭东陈创夫石河子大学医学院新疆石河子832002 石河子大学动物科技学院新疆石河子832002

为获得区别结核感染状态的血清学鉴别诊断试剂的抗原,根据GenBank中登录的结核杆菌H37Rv的ACR基因序列设计1对引物,以热灭活的结核杆菌H37Rv菌悬液为模板,PCR扩增得到ACR基因DNA片段。将扩增片段克隆于pGM-T载体中,得到载体pGM-T-ACR。... 详细信息

为获得区别结核感染状态的血清学鉴别诊断试剂的抗原,根据GenBank中登录的结核杆菌H37Rv的ACR基因序列设计1对引物,以热灭活的结核杆菌H37Rv菌悬液为模板,PCR扩增得到ACR基因DNA片段。将扩增片段克隆于pGM-T载体中,得到载体pGM-T-ACR。分别将pET32a质粒和pGM-T-ACR质粒用限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,并将纯化的ACR基因亚克隆至pET32a中,获得重组表达质粒pET32a-ACR。将其转化***21IPTG诱导后,经SDS-PAGE、westernblot分析鉴定,可见约34ku的外源蛋白带。表明ACR基因在大肠杆菌中得到了表达。用Ni-NTAAgarose试剂盒进行蛋白纯化,获得纯化的ACR融合蛋白。

关键词：结核分枝杆菌 ACR 原核表达

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羊的遗传性甲状腺肿病研究进展

黑龙江畜牧兽医 1992年第10期 33-35页

作者：刘永庆陈创夫解放军兽医大学长春130062

1 概述绵羊及山羊的甲状腺肿病一般认为系碘缺乏或致甲状腺肿物质所引起。然而,koch和Watson等推测山羊、绵羊所发生的先天性甲状腺肿可能是遗传性的.但都未对发病机理做深入的研究,亦未提出足够的遗传学依据。

关键词：羊病遗传性甲状腺肿

金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖的提取纯化及生物学特性研究

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黑龙江畜牧兽医 2015年第3期 142-144,233页

作者：宋战辉陈创夫石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为环境常在菌,是人和动物的重要致病菌,是奶牛乳房炎的主要致病菌之一。从患乳腺炎的奶牛乳汁中分离到的致病菌近一半是金黄色葡萄球菌,这些分离菌株中94%-100%含有荚膜多糖（Cp）[1]。金黄色... 详细信息

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为环境常在菌,是人和动物的重要致病菌,是奶牛乳房炎的主要致病菌之一。从患乳腺炎的奶牛乳汁中分离到的致病菌近一半是金黄色葡萄球菌,这些分离菌株中94%-100%含有荚膜多糖（Cp）[1]。金黄色葡萄球菌荚膜多糖共有11种血清型,其中5型和8型荚膜多糖约占金黄色葡萄球菌临床分离菌株的70％。

关键词：金黄色葡萄球菌荚膜多糖牛乳房炎临床分离菌株牛乳汁血清型常在菌溶葡萄球菌酶免疫原性生物学特性

NF-κB信号通路对布鲁氏菌介导的细胞凋亡的影响

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黑龙江畜牧兽医 2017年第10期 180-184,296页

作者：王月丽易继海王震陈创夫石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

布鲁氏菌是一种革兰氏阴性、兼性胞内寄生致病菌，它的侵染力和传染性很强，传播途径和传播范围广泛，严重危害畜牧兽医业的发展，易感动物为反刍动物和人。布鲁氏菌病现已波及全球近90％的国家和地区，每年造成数以亿计的经济损失。布... 详细信息

布鲁氏菌是一种革兰氏阴性、兼性胞内寄生致病菌，它的侵染力和传染性很强，传播途径和传播范围广泛，严重危害畜牧兽医业的发展，易感动物为反刍动物和人。布鲁氏菌病现已波及全球近90％的国家和地区，每年造成数以亿计的经济损失。布鲁氏菌有自己特有的生物学活性，具有独特的生物学功能，与宿主之间存在相互联系，有复杂的信号调控网络。LPS是布鲁氏菌重要的毒力因子，

关键词：布鲁氏菌病信号通路 NF-kB 细胞凋亡介导传播途径革兰氏阴性生物学活性