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犬瘟热病毒Vero细胞悬浮产业化培养工艺研究

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现代畜牧兽医 2022年第1期 57-60页

作者：郑新勇闫福海天津瑞普生物技术股份有限公司空港经济区分公司天津300308 山东省鲁茂生态科技有限公司山东济南250000

为克服犬瘟热疫苗现有生产工艺的缺陷,试验采用10 g/L Cytodex-1型微载体,按每个微载体15~20个细胞的细胞接种量接种至微载体培养Vero细胞,细胞培养液为10%NBS的DMEM培养液。结果显示,当细胞密度达到8×10^(6)CFU/mL时接种犬瘟热病毒,... 详细信息

为克服犬瘟热疫苗现有生产工艺的缺陷,试验采用10 g/L Cytodex-1型微载体,按每个微载体15~20个细胞的细胞接种量接种至微载体培养Vero细胞,细胞培养液为10%NBS的DMEM培养液。结果显示,当细胞密度达到8×10^(6)CFU/mL时接种犬瘟热病毒,最佳培养时间30 h,接毒剂量按照MOI为0.1接种犬瘟热病毒液;当细胞病变达到50%时,病毒感染细胞时间为30 h,收获毒液。按照上述摸索生产工艺参数,收获的犬瘟热病毒液的病毒液滴度每病毒含量≥10^(8.5)TCID_(50)/0.1 mL。将收获的病毒液冻存及下游相关的灭活处理,作为制备犬瘟热疫苗的抗原。研究表明,试验大幅度提升犬瘟热病毒培养量,效价批间差异性均一,实现了产业化反应器悬浮培养代替细胞工厂的技术路线。

关键词：犬瘟热 Vero细胞反应器悬浮培养

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不同浓度植物乳杆菌对肉鸡免疫机能的影响

吉林农业 2012年第4期 59-60页

作者：刘乃芝陈静崔诗法闫福海山东宝来利来生物工程股份有限公司

本试验通过在日粮中添加不同水平的植物乳杆菌,研究其对肉鸡免疫机能的影响,进而为确定植物乳杆菌在肉鸡生产上的最佳添加剂量提供科学依据。选用1日龄健康爱拔益加肉雏鸡420只,随机分成7组,每组3个重复,每个重复20只鸡。一个对照组:饲... 详细信息

本试验通过在日粮中添加不同水平的植物乳杆菌,研究其对肉鸡免疫机能的影响,进而为确定植物乳杆菌在肉鸡生产上的最佳添加剂量提供科学依据。选用1日龄健康爱拔益加肉雏鸡420只,随机分成7组,每组3个重复,每个重复20只鸡。一个对照组:饲喂基础日粮;六个乳酸菌添加组:分别在基础日粮中添加1.0‰、2.0‰、4.0‰、6.0‰、8.0‰、1.0%的植物乳杆菌。试验期42天,乳酸菌制剂以饮水方式供给。分别在14、21、28、35、42日龄测定并记录各组的血清总蛋白含量、IgG含量及NDV抗体效价。结果表明:不同添加水平的乳酸菌都在一定程度上提高了肉鸡的免疫性能,整体来看,2.0‰-4.0‰植物乳杆菌添加组增强免疫机能效果最好。

关键词：植物乳杆菌肉鸡免疫性能

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鸡马立克病毒流行强毒株的致弱研究

中国预防兽医学报 2010年第1期32卷 9-13页

作者：刘爱玲刘长军张艳萍闫福海张锋中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030

针对马立克病毒(MDV)毒力逐渐上升的现状,本研究对国内MDV流行强毒株进行了致弱研究。本实验采用近年来从东北、四川2地区免疫发病鸡场中分离的4株MDV流行强毒株(L-SY、L-MS、L-CZ、L-ZY),经噬斑纯化后,采用鸡胚成纤维细胞(CEF)传代培养... 详细信息

针对马立克病毒(MDV)毒力逐渐上升的现状,本研究对国内MDV流行强毒株进行了致弱研究。本实验采用近年来从东北、四川2地区免疫发病鸡场中分离的4株MDV流行强毒株(L-SY、L-MS、L-CZ、L-ZY),经噬斑纯化后,采用鸡胚成纤维细胞(CEF)传代培养至75代～85代,获得了4株高代次细胞毒株(L-SYp85C、L-MSp75C、L-CZp75C、L-ZYp75C)。并分析了L-SYp85C和L-MSp75C毒株的体外、体内生长特性和对SPF鸡的致病力。结果表明,L-SYp85C和L-MSp75C株在CEF适应性显著提高;以10倍感染剂量感染的SPF鸡,在12周内均未发生MD肿瘤,体重平均值与对照组体重平均值差异不显著;检测7d～45d羽髓中病毒载量,均低于106copies/106cell,显著低于亲本毒株。同时,4株传代毒株132bpr基因拷贝数显著增加。上述结果为MDV强毒株的致弱研究以及进一步筛选MDV弱毒疫苗株提供了实验依据。

关键词：马立克病毒鸡胚成纤维细胞高代次细胞毒株病毒载量增殖能力

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不同浓度植物乳杆菌对肉鸡免疫机能的影响

吉林农业（学术版） 2012年第4期 59-60页

作者：刘乃芝陈静崔诗法闫福海山东宝来利来生物工程股份有限公司山东泰安271000

关键词：植物乳杆菌肉鸡免疫性能

益生菌和柠檬酸联合使用对肉鸡生产性能和消化道内环境的影响

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饲料与畜牧（新饲料） 2013年第11期 42-45页

作者：刘乃芝陈静崔诗法徐辉闫福海谷巍山东宝来利来生物工程股份有限公司

试验旨在观察益生菌和柠檬酸联合使用对肉鸡生产性能和消化道内环境的影响。选用1日龄健康爱拔益加肉雏鸡360只,随机分成3组,每组6个重复,每个重复20只鸡。Ⅰ组为对照组,供给清水;Ⅱ组、Ⅲ组为试验组,分别在饮水中添加0.5‰、1‰的由益... 详细信息

试验旨在观察益生菌和柠檬酸联合使用对肉鸡生产性能和消化道内环境的影响。选用1日龄健康爱拔益加肉雏鸡360只,随机分成3组,每组6个重复,每个重复20只鸡。Ⅰ组为对照组,供给清水;Ⅱ组、Ⅲ组为试验组,分别在饮水中添加0.5‰、1‰的由益生菌和柠檬酸组成的配方,研究其对肉鸡生产性能和消化道内环境的影响。试验期45d。结果显示,益生菌和柠檬酸联合作用能在一定程度上提高平均每只增重,降低料肉比,提高饲料利用率(P>0.05);能降低消化道pH值,尤其是回肠部位pH(P<0.05);显著降低盲肠内大肠杆菌数量(P<0.05),提高乳酸杆菌数量(P<0.05)。结果提示,益生菌和柠檬酸联合使用能提高动物机体的生产性能和改善消化道内环境。

关键词：益生菌柠檬酸生产性能消化道环境

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高效抑氨芽孢菌的筛选

饲料博览 2013年第12期23卷 36-39页

作者：刘乃芝陈静徐辉闫福海谷巍山东宝来利来生物工程股份有限公司山东泰安271000

为减少家禽粪便中NH3的释放,有效改善鸡舍生产环境,保障鸡群健康,分离来自水、土壤、粪便等127株芽孢菌,并进行最佳抑氨菌的筛选。菌株的筛选包括限制性培养基的初筛和抑氨富集培养基的复筛,抑氨菌的实际除臭效果试验采用三角瓶封闭检... 详细信息

为减少家禽粪便中NH3的释放,有效改善鸡舍生产环境,保障鸡群健康,分离来自水、土壤、粪便等127株芽孢菌,并进行最佳抑氨菌的筛选。菌株的筛选包括限制性培养基的初筛和抑氨富集培养基的复筛,抑氨菌的实际除臭效果试验采用三角瓶封闭检测法。经过初筛和复筛共筛选出6株氨氮降解率>20%的芽孢菌;通过6株芽孢菌对粪便的除臭效果验证试验发现,24 h时芽孢菌Y-64的除臭效果最好,达33.33%,随着时间的延长各组的除臭效果均逐渐减弱。试验结果表明,Y-64是一株性能较好具有抑氨和除臭功能的芽孢菌。

关键词：抑氨芽孢菌筛选除臭

鸡马立克氏病病毒在鸡淋巴细胞和羽髓中的复制动力学分析

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中国预防兽医学报 2008年第11期30卷 879-884页

作者：李晶梅刘长军张艳萍施维松曲鹏刘爱玲闫福海中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

马立克氏病(MD)是由鸡马立克氏病病毒血清1型(MDV1)引起的鸡高度接触性淋巴细胞增生性疾病,MDV1在体内的复制状况与其致病性强弱及传播能力直接相关。本实验选择近几年从国内不同地区MD暴发鸡场分离的6株MDV1强毒株、弱毒疫苗"814"株和... 详细信息

马立克氏病(MD)是由鸡马立克氏病病毒血清1型(MDV1)引起的鸡高度接触性淋巴细胞增生性疾病,MDV1在体内的复制状况与其致病性强弱及传播能力直接相关。本实验选择近几年从国内不同地区MD暴发鸡场分离的6株MDV1强毒株、弱毒疫苗"814"株和国内标准MDV1强毒J-1株,分别人工感染SPF鸡,采用双重实时荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,检测感染后1d～28d病毒在淋巴细胞和羽髓中的复制状况。结果显示,接种1d后即可在淋巴细胞中检测到MDV1(102.6copies～105.2copies/106cells);在检测期间,淋巴细胞中病毒载量略有上升的趋势,总体呈现不规律变化,而且变化并不明显。接种7d后羽髓中病毒载量开始显著增加,14d～21d达到峰值,超强毒株峰值处病毒载量可达到107copies/106cells,峰值期病毒载量是感染前期(1d～7d)的100～10000倍。强毒株在体内的病毒载量高于弱毒株,即复制能力高于弱毒株。研究表明,MDV1国内流行的毒株有增殖速度快,病毒载量高的新特点;MDV1致病性的高低与在其在体内的复制能力的高低呈正相关。

关键词：复制动力学马立克氏病病毒血清1型双重荧光定量PCR 分离株病毒载量

马立克氏病病毒“814”疫苗株基因组重复区序列测定及分析

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中国预防兽医学报 2010年第4期32卷 294-297页

作者：张锋刘长军张艳萍刘爱玲闫福海候广玉丛锋中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

为了解马立克氏病病毒(MDV)强、弱毒株主要致肿瘤相关基因变异情况,本研究根据MDV GA株基因组序列,设计合成扩增基因组重复区的引物,得到MDV814疫苗株病毒基因组中约26kb的序列片段。与GenBank登录的强、弱毒株进行比较分析表明,扩增的M... 详细信息

为了解马立克氏病病毒(MDV)强、弱毒株主要致肿瘤相关基因变异情况,本研究根据MDV GA株基因组序列,设计合成扩增基因组重复区的引物,得到MDV814疫苗株病毒基因组中约26kb的序列片段。与GenBank登录的强、弱毒株进行比较分析表明,扩增的MDV1型814疫苗株的长重复区为12774bp,预测的开放阅读框(ORF)有48个;短重复区为11426bp,预测的ORF有38个。发现了4个MDV814株特有的ORF。814株在编码Meq、RLORF6和23ku的重叠基因内具有类似于疫苗株CVI988的177bp的插入;在RLORF12基因编码区内存在69bp的缺失,该缺失位于病毒复制起始位点内。同时,发现7个814疫苗株特有的氨基酸突变,分布在6个ORF内。单核苷酸多态性(SNP)的鉴定发现,多个基因具有单核苷酸的突变,主要分布于Meq基因,其中氨基酸A115V(丙氨酸-缬氨酸),N142D(天冬酰胺-天门冬氨酸)的变异是814疫苗株所特有的。MDV814疫苗株重复区的基因序列的比较分析将有助于MDV致肿瘤机制的研究。

关键词：马立克氏病病毒重复区基因序列分析

鸡马立克病毒野毒株在鸭胚成纤维细胞上的培育及鉴定

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中国兽医科学 2009年第3期39卷 219-222页

作者：张艳萍刘长军李晶梅刘爱玲施维松闫福海秦运安中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/禽传染病研究室黑龙江哈尔滨150001

用2006-2007年从现地采集的疑似感染鸡马立克病（MD）鸡羽髓分别接种鸭胚成纤维细胞（DEF），蚀斑克隆纯化后，随机选1个单克隆，再接种DEF增殖，获得9株适应DEF的鸡马立克病病毒（MDV）野毒株，分别命名为ZY、FY、SY、YC、CZ、MS、CGZ... 详细信息

用2006-2007年从现地采集的疑似感染鸡马立克病（MD）鸡羽髓分别接种鸭胚成纤维细胞（DEF），蚀斑克隆纯化后，随机选1个单克隆，再接种DEF增殖，获得9株适应DEF的鸡马立克病病毒（MDV）野毒株，分别命名为ZY、FY、SY、YC、CZ、MS、CGZ、QQHE和DH。应用PCR技术分别扩增这9株MDV的132bp重复序列（132bpr），发现这9株132bpr均为2个拷贝，符合致病型MDV的特点。从分离的9株MDV中选择5株，人工感染7日龄SPF白来航鸡。试验鸡表现精神萎靡，被毛凌乱，个体瘦小；60d后剖杀，大多可见内脏肿瘤；SY、FY、QQHE3株的MD临床阳性率达100％。

关键词：马立克病病毒鸭胚成纤维细胞培育及鉴定 132 bp重复序列