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ADC病人HIV-1gp120基因多样性分析及对U87细胞分泌TNF-α与IL-1β的影响

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ADC病人HIV-1gp120基因多样性分析及对U87细胞分泌TNF-α与IL-1β...

作者：闫玉芬山东大学

学位级别：硕士

目的影响ADC发病的主要因素有HIV-1病毒的致病性、机体的神经易感性及免疫抑制的水平。研究表明大脑及脑脊液中HIV病毒载量与ADC的发生并非总是有关,这说明ADC的发生可能与HIV本身的基因及生物学活性有关。鉴于HIV-1gp120在病毒... 详细信息

目的影响ADC发病的主要因素有HIV-1病毒的致病性、机体的神经易感性及免疫抑制的水平。研究表明大脑及脑脊液中HIV病毒载量与ADC的发生并非总是有关,这说明ADC的发生可能与HIV本身的基因及生物学活性有关。鉴于HIV-1gp120在病毒与宿主细胞结合和融合中发挥不可替代的作用,本研究的第一部分拟通过对来源于2例ADC病人各6个组织的共60株HIV-1gp120序列进行基因多样性与生物学活性位点分析,对HIV-1gp120基因多样性和生物学活性与ADC发病的关系作出初步判断。 HIV-1致ADC发病的机制尚不清楚,但可以肯定的是它可以通过刺激胶质细胞或巨噬细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-1β引起神经元细胞损伤。鉴于HIV-1病毒载量与ADC的发生并非总是有关,本研究的第二部分拟通过分析不同病人不同组织来源基因不完全相同的HIV-1gp120诱导细胞分泌TNF-α、IL-1β的能力,来探讨HIV-1gp120基因差异是否与其刺激细胞分泌TNF-α、IL-1β的能力有关,从而为ADC阐述发病机制提出新观点,为ADC的预防与控制提供新思路。方法 1.以HIV-1B标准株HXB2 gp120基因序列基因组DNA序列作为模板,应用Primer 5.0软件设计引物,巢式PCR法扩增源自两例ADC病人共12个不同组织的HIV-1gp120序列,PCR产物经TA克隆后,转化至大肠杆菌DH5α,经蓝白斑、氨苄青霉素筛选及测序后,每个部位选取5个HIV-1gp120阳性克隆进行序列分析。通过对来自于两例ADC病人不同组织的HIV-1gp120序列分别进行系统发育树、ds／dn比值、糖基化位点、V3环关键位点氨基酸等分析,以探讨HIV-1gp120与ADC发病的关系。 2.随机选取源自两例ADC病人外周组织、中枢神经组织的HIV-1gp120克隆各一个（共4个克隆）,PCR扩增gp120基因,经TA克隆、蓝白斑及氨苄青霉素筛选,提取阳性质粒,双酶切后的gp120片段与经过同样双酶切的逆转录病毒表达载体MSCV-IRES-GFP连接,转化大肠杆菌DH5α,氨苄青霉素筛选HIV-1gp120阳性表达载体,经双酶切和测序证实。然后将逆转录病毒表达载体与pUMVC、pCMV-VSV-G共转染293T细胞,免疫荧光显微镜观察逆转录病毒载体的表达、免疫组化实验检测HIV-1gp120的表达。收获免疫荧光检测阳性的重组逆转录病毒悬液,经逐孔稀释法测定其感染滴度,然后感染U87细胞,荧光显微镜检测重组逆转录病毒蛋白的表达,免疫组化实验检测HIV-1gp120的表达,ELISA法测定细胞上清中TNF-α、IL-1β的含量,SPSS软件分析测定结果。结果 1.获得了来源于两例ADC病人各6个组织共60个HIV-1gp120阳性克隆,并经测序证实,BLAST分析均为HIV-1Bgp120序列。 2.构建了每例ADC病人来源的各6个组织共30个HIV-1gp120基因克隆的系统发育树,由系统发育树可见,不同组织来源的HIV-1gp120基因位于不同的系统发育树进化枝上,不同组织来源的HIV-1gp120基因克隆也可以存在交叉现象。 3.与HIV-1B标准株HXB2 gp120相比,第一例ADC病人来源的HIV-1gp120其各自的ds／dn=1.1744±0.0348（p＜0.001）;第二例病人体内来源的所有HIV-1gp120基因序列的ds／dn=0.8222±0.2086（p＜0.001）;两个病例来源的HIV-1gp120基因序列的ds／dn具有显著性差别（p＜0.001）。 4.以HIV-1B标准株HXB2gp120的糖基化位点为标准,第一例ADC病人来源HIV-1gp120序列糖基化位点相对比较保守,第二例ADC病人来源的HIV-1gp120序列糖基化位点变异较大。 5.根据现有的资料,可以预测感染两例ADC病人大脑组织的HIV-1病毒均为CCR5受体使用型、巨噬细胞嗜性、非合胞体诱导型毒株。 6.构建了4个HIV-1包膜糖蛋白gp120的逆转录表达载体A1/MIG、B1/ MIG.A2/MIG.B2/MIG,双酶切鉴定目的片段和载体分别为1.44kb和6.8kb,并经测序证实。对四个表达载体中的HIV-1gp120进行分析,发现四株HIV-1gp120序列存在基因差异,其中A1／MIG的V3环序列与其他三株序列差异较大。 7.荧光显微镜观察结果显示共转染***及pCMV-VSV-G的293T细胞及感染重组逆转录病毒的U87细胞中均有绿色荧光信号产生。逐孔稀释法测定重组逆转录病毒的滴度约为1

关键词： HIV-1 包膜糖蛋白gp120 艾滋病痴呆综合征 TNF-α IL-1β

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会话信息过量的顺应性解释

作家 2009年第20期 148-149页

作者：朱燕闫玉芬唐山师范学院

本文通过维索尔伦的顺应论来解释会话中的信息过量现象,对信息过量的发生、理解以及交际的顺利完成做出了语用解释。

关键词：顺应论信息过量语言顺应动态顺应

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跨文化语用学中的文化因素与语用翻译

时代文学 2009年第12期 41-42页

作者：闫玉芬朱燕唐山师范学院外语系

跨文化语用学中的文化因素,可从社会生活、社会心理和社会形态发展等方面产生文化差异,从而影响到语用翻译。通过正确处理语用中的文化因素和差异,即语用对比,可以正确处理英汉翻译方面的问题。

关键词：跨文化语用学文化差异语用翻译

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解析英语中的音乐

中国成人教育 2009年第5期 138-139页

作者：闫玉芬廉英红唐山师范学院唐山市委党校河北唐山063000

在英语学习过程中,往往会碰到这种情况,即使是简单的单词和句子,也可能读起来很困难,复杂的单词和句子就更不容易了。解决它的最好方法是伴着音乐的节奏和节拍来读英语、学英语,这样才会达到事半功倍的效果。英语和音乐的共性注定了英... 详细信息

在英语学习过程中,往往会碰到这种情况,即使是简单的单词和句子,也可能读起来很困难,复杂的单词和句子就更不容易了。解决它的最好方法是伴着音乐的节奏和节拍来读英语、学英语,这样才会达到事半功倍的效果。英语和音乐的共性注定了英语学习必然要和音乐产生联系。

关键词：英语音乐节奏节拍

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《大不列颠望洋兴叹》修辞手法浅析

作家 2012年第4期 171-172页

作者：韩艳萍闫玉芬唐山师范学院

《大不列颠望洋兴叹》是一篇语言平实、风格自然清新的评论性文章,作者恰到好处地使用了语义、句法、语音层面的修辞手法,这不仅赋予了语言丰富的内涵使其更加贴切生动,而且也为整篇文章增色不少,使其更加具有说服力和感染力。

关键词：语义修辞句法修辞语音修辞

HIV包膜糖蛋白gp120与艾滋病痴呆综合征

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中国公共卫生 2009年第7期25卷 886-887页

作者：闫玉芬赵丽王志玉山东大学公共卫生学院病毒学研究室济南250012 山东大学教育部实验畸形学重点实验室

艾滋病痴呆综合征(AIDS dementia complex,ADC)是人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的并发症之一,常出现在HIV感染的晚期.主要表现为运动和认知功能障碍,如运动迟缓、共济失调,感情淡漠等[1].

关键词： gp120 艾滋病痴呆综合征包膜糖蛋白

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蛛网膜下腔出血25例误诊分析

中国临床医生杂志 2004年第1期32卷 38-39页

作者：闫玉芬山西省大同市第三人民医院神经内科 037008

蛛网膜下腔出血(SAH)是神经内科的常见病,但不典型病例误诊率高,现将本院自1995年以来误诊的25例报道如下.

关键词：蛛网膜下腔出血误诊原因首发症状

党校图书馆学科馆员制度建设现状分析及完善策略

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中文科技期刊数据库（全文版）图书情报 2017年第10期 11-12页

作者：闫玉芬呼伦贝尔党校图书馆内蒙古呼伦贝尔021008

曾有专家学者就国内目前的副省级以上党校图书馆学科馆员制度的建设情况做过专门的调研,调研结果表明,现今制约着党校图书馆自我发展的主要原因是因为管理制度方面的缺失、对于专业人才方面的匮乏。故而,本文根据以上等方面的制约因素... 详细信息

曾有专家学者就国内目前的副省级以上党校图书馆学科馆员制度的建设情况做过专门的调研,调研结果表明,现今制约着党校图书馆自我发展的主要原因是因为管理制度方面的缺失、对于专业人才方面的匮乏。故而,本文根据以上等方面的制约因素和当下党校图书馆用户对于自身个性化信息的需求,在融合了制度规范的前提,从国家层面来进行探讨党校图书馆学科馆员建设的策略和具体完善措施。

关键词：党校图书馆学科馆员建设

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浅论党校图书收藏工作和经费分配制度改革

呼伦贝尔学院学报 2005年第2期13卷 52-53页

作者：闫玉芬呼伦贝尔市委党校内蒙古海拉尔区021008

党校图书馆图书收藏工作的困难及其原因是多层面的,走出困境的出路在于:以党校管理体制改革保障图书收藏体制改革,实行“集中收藏,分类选择,教师参与”和“经费四级分配,专款专用”制度。

关键词：分配制度改革收藏党校经费管理体制改革多层面图书馆