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利用小鼠胚胎干细胞贴壁制备拟胚体的新方法研究

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中国实用内科杂志 2006年第11期26卷 1715-1717页

作者：韩雅玲田孝祥康建徐凯闫承慧沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科辽宁沈阳110016

目的为改进拟胚体制备过程中分化不同步等问题,探讨建立小鼠胚胎干细胞贴壁制备拟胚体的新方法。方法沈阳军区总医院心内科于2004年10月至2006年1月对小鼠进行研究,当小鼠胚胎干细胞R1生长至70%～80%亚融合时,将其消化成单细胞,以1×10... 详细信息

目的为改进拟胚体制备过程中分化不同步等问题,探讨建立小鼠胚胎干细胞贴壁制备拟胚体的新方法。方法沈阳军区总医院心内科于2004年10月至2006年1月对小鼠进行研究,当小鼠胚胎干细胞R1生长至70%～80%亚融合时,将其消化成单细胞,以1×106的细胞数接种到直径100mm组织培养皿中,用含低浓度白血病抑制因子(LIF)1μg/L的胚胎干细胞培养液连续贴壁培养3d后,收集贴壁细胞团继续悬浮培养。对悬浮培养的拟胚体及其冰冻切片行形态学观察,对悬浮及贴壁分化的拟胚体行甲胎蛋白(AFP)、血小板内皮细胞粘附分子-1(PECAM-1)及神经丝蛋白68KD(NF-68)免疫荧光染色。结果形态学观察用本法得到的拟胚体大小均一,分化同步,能展示从简单拟胚体到成熟囊性拟胚体的典型发育过程。免疫荧光染色显示,AFP、PECAM-1及NF-68三种标志物表达均为阳性。结论与传统方法相比,该法操作简便、拟胚体形成率高、分化阶段同步,具有分化为3个胚层来源细胞的能力,可作为胚胎早期发育和胚胎干细胞分化等研究的理想工具。

关键词：胚胎干细胞拟胚体形态分化

心血管转化医学研究快车道:从高通量组学技术到整合生物信息学

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中华心血管病杂志 2023年第11期51卷 1121-1123页

作者：刘子齐闫承慧韩雅玲解放军北部战区总医院寒地心血管病全国重点实验室沈阳110016

高通量多组学研究联合整合生物信息学技术的迅速发展,从更深层次解读了心血管疾病发生、发展及转归分子机制,为心血管疾病的早期诊断、生物标志物筛选、新药靶点发现和个体化治疗提供了更为全面的分子理论基础,引领心血管转化医学研究... 详细信息

高通量多组学研究联合整合生物信息学技术的迅速发展,从更深层次解读了心血管疾病发生、发展及转归分子机制,为心血管疾病的早期诊断、生物标志物筛选、新药靶点发现和个体化治疗提供了更为全面的分子理论基础,引领心血管转化医学研究进入大数据时代。

关键词：心血管疾病多组学整合生物信息学分子生物学心肌病

重组人E1A激活基因阻遏子/myc-His融合糖蛋白的纯化及功能鉴定

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中国应用生理学杂志 2010年第3期26卷 297-301,I0003页

作者：孙鸣宇韩雅玲郭鹏康建闫承慧沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科辽宁沈阳110016

目的:纯化重组人E1A激活基因阻遏子(hCREG)糖蛋白,验证重组hCREG糖蛋白具有抑制体外培养的人胸廓内动脉平滑肌细胞(HITASY)增殖的生物学功能。方法:根据6×His亲和层析原理,应用Ni-NTA柱纯化重组hCREG蛋白,纯化后蛋白通过HiTrap脱盐柱... 详细信息

目的:纯化重组人E1A激活基因阻遏子(hCREG)糖蛋白,验证重组hCREG糖蛋白具有抑制体外培养的人胸廓内动脉平滑肌细胞(HITASY)增殖的生物学功能。方法:根据6×His亲和层析原理,应用Ni-NTA柱纯化重组hCREG蛋白,纯化后蛋白通过HiTrap脱盐柱脱盐。用流式细胞周期分析研究添加0.5μg/ml、1μg/ml及2μg/ml重组hCREG/myc-His融合糖蛋白对体外培养HITASY细胞增殖的影响。用BrdU掺入方法研究重组蛋白对体外培养HITASY细胞增殖的影响。结果:根据6×His亲和层析原理用Ni-NTA纯化重组hCREG蛋白,浓缩并脱盐后的重组hCREG蛋白浓度为1.6mg/ml,纯度为92%,此蛋白仍保留了糖基化形式。流式细胞仪细胞周期分析结果提示重组hCREG蛋白可抑制体外培养的HITASY细胞增殖,且低浓度组的抑制效应要高于高浓度组。BrdU掺入实验结果提示,添加2μg/ml重组hCREG蛋白组与对照组相比可显著抑制体外培养的HITASY细胞增殖,组间比较有统计学差异(P<0.05)。结论:具有生物学功能的重组hCREG/myc-His糖蛋白的成功纯化,为hCREG蛋白的功能研究及生物工程制备提供了实验平台。

关键词：腺病毒E1A蛋白(E1A) 阻遏子糖蛋白蛋白纯化

E1A激活基因阻遏子基因表达变化与颈动脉血管重塑的关系

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生物化学与生物物理进展 2015年第2期42卷 161-168页

作者：李洋闫承慧田孝祥彭程飞韩雅玲沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科沈阳110840

E1A激活基因阻遏子(CREG)是一种广泛表达的小分子糖蛋白,但其生物学功能仍不完全清楚.为了探索病理性血管重塑的病理生理机制以及CREG在其中发挥的调控作用,采用颈动脉导丝损伤模型构建小鼠病理性血管重塑模型,应用小动物超声、Masson... 详细信息

E1A激活基因阻遏子(CREG)是一种广泛表达的小分子糖蛋白,但其生物学功能仍不完全清楚.为了探索病理性血管重塑的病理生理机制以及CREG在其中发挥的调控作用,采用颈动脉导丝损伤模型构建小鼠病理性血管重塑模型,应用小动物超声、Masson染色、免疫组织化学染色、RT-PCR、Western-blot等方法检测小鼠颈动脉内膜-中膜厚度、胶原含量、Ⅰ型胶原和CREG表达变化.结果表明,小鼠颈动脉损伤后3 d血管壁CREG m RNA和蛋白质水平迅速下降,损伤后7 d CREG表达回升,至损伤后14 d和28 d基本恢复到正常对照组水平.血管损伤后3 d血管壁中Ⅰ型胶原m RNA水平开始升高,损伤后7 d血管壁开始增厚,管壁中Ⅰ型胶原表达水平继续增高,损伤后14 d和28 d新生内膜形成,管腔严重狭窄,Ⅰ型胶原在管壁和新生内膜内大量表达.血管损伤早期CREG表达水平的变化与病理性血管重塑程度呈负相关关系,CREG的表达为先迅速降低,再逐渐回升,而胶原表达和血管重塑程度则表现为持续加重.上述研究结果提示,CREG基因表达参与血管损伤导致的病理性血管重塑过程,并可能决定了血管重塑的进程和结局.

关键词： E1A激活基因阻遏子血管重塑小鼠

人肺腺癌细胞系GLC-82中p21^(WAF1)和p53基因的过表达

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中国医学科学院学报 2003年第2期25卷 149-152页

作者：吴焱闫承慧金焰张贵寅李璞傅松滨哈尔滨医科大学医学遗传学教研室哈尔滨150086

目的探讨p21^(WAF1)和p53基因过表达对人肺腺癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法用带有p21cDNA的真核表达载体pCEP和带有p53的腺病毒表达载体pAdCMV,分别通过基因转染和腺病毒感染,使其在人肺腺癌细胞系(GLC-82)中过表达;通过流式细胞... 详细信息

目的探讨p21^(WAF1)和p53基因过表达对人肺腺癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法用带有p21cDNA的真核表达载体pCEP和带有p53的腺病毒表达载体pAdCMV,分别通过基因转染和腺病毒感染,使其在人肺腺癌细胞系(GLC-82)中过表达;通过流式细胞仪、透射电镜和原位末端分析(TUNEL)观察细胞的生长和凋亡情况。结果 p21过表达的细胞系G1期细胞增加,细胞生长抑制,克隆形成率下降,电镜下未见特征性凋亡小体,原位细胞凋亡分析未见凋亡信号;p53腺病毒感染的肿瘤细胞增殖明显抑制并出现死亡,原位细胞凋亡检测到凋亡信号。结论 p21和p53基因的过表达能够抑制人肺腺癌细胞的生长,其中p53能够诱发细胞凋亡,因此这两种基因在肿瘤基因治疗上有着广泛的应用前景。

关键词：肺腺癌基因转染 p21 p53 过表达

胚胎干细胞来源的拟胚体分化早期血管平滑肌标志物的表达时相

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中国应用生理学杂志 2008年第4期24卷 385-390页

作者：韩雅玲肖艳平齐岩梅康建闫承慧沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科辽宁沈阳110016

目的:研究胚胎血管发育早期SMα-actin、SM22α、myocardin、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)的表达规律,并初步探讨在此阶段血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)对血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的影响。方法:采用转染平滑肌特异性蛋白SM22α启动子... 详细信息

目的:研究胚胎血管发育早期SMα-actin、SM22α、myocardin、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)的表达规律,并初步探讨在此阶段血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)对血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的影响。方法:采用转染平滑肌特异性蛋白SM22α启动子控制下表达增强型绿色荧光蛋白(GFP)报告基因载体的胚胎干细胞制备拟胚体(EBs),用免疫荧光染色、RT-PCR、Western blot分析SMα-actin、SM22α、myocardin、SMMHC的表达时相;然后分别用0μmol/L(对照组)、10μmol/L、50μmol/L AG1296(血小板源性生长因子受体抑制剂)处理EBs,观察三组SMα-actin、SM22α、myocardin、SMMHC在基因及蛋白水平上的表达变化。结果:胚胎血管发育早期SMα-actin、myocardin、SM22α、SMMHC分别在EBs第0(胚胎干细胞)、8、11、13d开始有表达。AG1296三种浓度处理后SMα-actin、myocardin、SM22α、SMMHC蛋白表达及myocardin、SM22α和SMMHC mRNA表达均无明显差异。结论:EBs发育过程中存在着自发的VSMCs分化,SMα-actin表达最早,依次为myocardin、SM22α、SMMHC;PDGF-BB对EBs分化早期VSMCs标志物表达的调控可能不是必要的。

关键词：胚胎干细胞血管平滑肌细胞分化血小板源性生长因子-BB

E1A激活基因阻遏子(CREG)过表达通过抑制p38/JNK信号分子活化对抗人血管平滑肌细胞凋亡

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生物化学与生物物理进展 2009年第12期36卷 1597-1606页

作者：吴光哲闫承慧韩雅玲陶杰邓捷田孝祥张保海王涛康建张效林第四军医大学西京医院心内科西安710032 沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科沈阳110016

血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡参与了动脉粥样硬化(AS)及冠状动脉介入治疗(PCI)术后再狭窄(RS)等心血管疾病的发生发展过程.E1A激活基因阻遏子(CREG)是新近发现的一种分泌型糖蛋白,在维持细胞和组织稳态方面发挥重要作用.前期研究发现CREG... 详细信息

血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡参与了动脉粥样硬化(AS)及冠状动脉介入治疗(PCI)术后再狭窄(RS)等心血管疾病的发生发展过程.E1A激活基因阻遏子(CREG)是新近发现的一种分泌型糖蛋白,在维持细胞和组织稳态方面发挥重要作用.前期研究发现CREG蛋白过表达能够对抗血清饥饿诱导的人血管平滑肌细胞(hVSMCs)凋亡,进一步探讨CREG对hVSMCs凋亡的调控作用及相关的分子机制.以逆转录病毒稳定转染的CREG过表达及表达抑制的hVSMCs为模型,应用两种药物Staurosporine(STS)和Etoposide(VP-16)诱导细胞发生凋亡,检测细胞凋亡和相关信号通路变化.结果显示,在药物干预后,CREG表达抑制时细胞凋亡明显增多,而CREG过表达明显抑制hVSMCs凋亡.同时也发现,CREG表达抑制时p38及JNK活性明显增强,而CREG过表达时p38和JNK活性被抑制.经腺病毒转染和药物干预抑制p38表达后,细胞凋亡均受到抑制,而且在p38活性被抑制的同时,JNK活化也受到抑制.说明p38和JNK表现为协同作用.结果也显示,VSMCs分化指标SMα-actin和SM MHC与CREG表达呈一致趋势,而细胞外基质蛋白Fibronection与CREG表达呈负相关.以上结果提示,CREG在维持VSMCs表型转换方面发挥重要作用,并且通过p38和JNK信号转导通路对hVSMCs凋亡进行调控.CREG可能对于AS和PCI术后RS的防治具有重要价值.

关键词： E1A激活基因阻遏子血管平滑肌细胞细胞凋亡信号通路

细胞色素P450 3A4 894C>T位点基因多态性与氯吡格雷抵抗的关系

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解放军医学杂志 2008年第8期33卷 939-942页

作者：韩雅玲麦晓燕李毅张效林郭亮闫承慧沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科沈阳110016

目的探讨细胞色素P4503A4(简称CYP3A4)894C>T位点基因多态性与氯吡格雷抵抗(CR)发生的关系。方法采用病例-对照研究方法,共入选300例沈阳军区总医院心内科住院患者,根据血小板聚集率(PAR)分为病例组(CR组)和对照组(非CR组)。排除2周内... 详细信息

目的探讨细胞色素P4503A4(简称CYP3A4)894C>T位点基因多态性与氯吡格雷抵抗(CR)发生的关系。方法采用病例-对照研究方法,共入选300例沈阳军区总医院心内科住院患者,根据血小板聚集率(PAR)分为病例组(CR组)和对照组(非CR组)。排除2周内曾服用氯吡格雷或噻氯匹啶者。患者入选后均给予氯吡格雷600mg和阿司匹林300mg负荷量治疗,并在服药前和服药后24h分别测定5μmol/L腺苷二磷酸诱导的PAR,根据两次测定结果计算PAR变化值,≤10%者定义为CR。所有患者均采集外周血提取基因组DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测患者CYP3A4基因894C>T单核苷酸多态性的基因型和等位基因分布。结果入选病例中共70例(23.3%)诊断为CR。CYP3A4894C>T位点在本组患者中存在多态性,分别为TT、CT和CC型,其基因型频率在CR组和非CR组分别为45.7%、50.0%、4.3%和63.5%、31.7%、4.8%。TT基因型的频率在非CR组明显高于CR组(OR=2.06,95%CI:1.201～3.547,P=0.020)。C等位基因型的频率在CR组明显高于非CR组,与T等位基因携带患者相比,C等位基因携带患者发生CR的危险性显著增加(OR=1.59,95%CI:1.037～2.442,P=0.023)。结论CYP3A4基因894C>T位点的多态性可能与CR的发生有相关性。

关键词：氯吡格雷抵抗多态性,单核苷酸细胞色素P450 3A4

野生型p53基因诱导凋亡相关基因ANNEXIN A2的表达研究

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中华医学遗传学杂志 2005年第6期22卷 661-664页

作者：黄昀闫承慧傅松滨哈尔滨医科大学遗传学研究室 150086

目的探讨p53基因过表达介导不同转移潜能肿瘤细胞的凋亡分子机理,寻找与细胞凋亡和肿瘤转移的相关基因。方法应用mRNA差异显示方法分析腺病毒介导的野生型p53基因感染不同转移潜能的肺癌细胞系前后存在的表达差异基因,并用逆转录-聚合... 详细信息

目的探讨p53基因过表达介导不同转移潜能肿瘤细胞的凋亡分子机理,寻找与细胞凋亡和肿瘤转移的相关基因。方法应用mRNA差异显示方法分析腺病毒介导的野生型p53基因感染不同转移潜能的肺癌细胞系前后存在的表达差异基因,并用逆转录-聚合酶链反应、Northern印迹和Western印迹方法加以验证。结果分析发现,在p53基因诱导后ANNEXIN A2基因的表达显著差异有统计学意义,经p53基因诱导后ANNEXINA2基因的表达有明显下调。并且以Anip973细胞的表达缺失最为显著。经逆转录-聚合酶链反应、Northern印迹和Western印迹方法也验证了这种差异的存在。结论表明ANNEXINA2基因的表达与p53基因诱导的肿瘤细胞凋亡存在密切的相关性。

关键词： p53基因 ANNEXIN A2基因细胞凋亡