检索结果-南通市图书馆

维普期刊数据库博看期刊

一种细胞穿膜肽增强牛瑟氏泰勒虫DNA疫苗免疫应答的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

一种细胞穿膜肽增强牛瑟氏泰勒虫DNA疫苗免疫应答的研究

作者：闫宗斌延边大学

学位级别：硕士

细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)是一类具有穿膜功能的小分子短肽,可高效携带核酸、肽、蛋白质等生物大分子穿过细胞膜进入细胞质发挥功能,在介导生物大分子药物入胞上有着高效、低毒等诸多优势,已广泛应用于各个领域,如作... 详细信息

细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)是一类具有穿膜功能的小分子短肽,可高效携带核酸、肽、蛋白质等生物大分子穿过细胞膜进入细胞质发挥功能,在介导生物大分子药物入胞上有着高效、低毒等诸多优势,已广泛应用于各个领域,如作为运输成像剂的载体,作为抗菌消炎药物,作为抗肿瘤药物的传递载体以及作为疫苗的传递载体等。瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti)是一种寄生在牛红细胞内的血液原虫,主要通过长角血蜱进行传播,能引起牛的慢性贫血,对养牛业造成了一定的危害。尤其是外地引进牛、纯种牛和改良杂种牛的危害特别严重,影响养牛业的健康发展。虽然DNA疫苗与传统的疫苗相比具有安全、易制备等优势,但其免疫效果还有待进一步提高,且到目前为止,还没有CPPs在增强寄生虫DNA疫苗免疫效果方面的研究。因此,继本课题组一直从事牛瑟氏泰勒虫病的研究,本试验以牛瑟氏泰勒虫DNA疫苗为研究对象,探讨了一种CPPs对DNA疫苗免疫应答的影响,旨在为今后DNA疫苗研究提供一种新的策略。本试验根据Genbank上已发表的瑟氏泰勒虫P33基因序列(DQ078264),设计一对特异性引物,以所提取的感染了瑟氏泰勒虫的牛的抗凝血DNA为模板,PCR扩增得到P33基因的目的片段,将目的片段克隆到真核表达质粒pVAX1上,构建pVAX1-P33重组质粒。将鉴定正确的pVAX1-P33重组质粒与CPPs以一定的电荷比混合,并命名为CPPs-pVAX1-P33,将其转染到vero细胞,通过间接免疫荧光鉴定其表达。将40只雌性昆明小鼠随机平均分成4个组,分别接种CPPs-pVAX1-P33、pVAX1-P33、pVAX1和PBS,每2周接种一次,总共接种3次。在3免后2周利用流式细胞技术检测每组小鼠的CD3、CD4和CD8的含量。同时,在每次免疫前以及第3次免疫后每2周,采取小鼠血液并分离血清,利用ELISA法检测并记录每组小鼠的牛瑟氏泰勒虫特异性抗体、Ig G1、Ig G2a、IFN-γ、IL-2、IL-4以及IL-6的水平,以此来综合评价小鼠的细胞和免疫应答效果。试验结果显示,所构建的真核表达质粒pVAX1-P33与Genbank上发表的瑟氏泰勒虫P33基因序列同源性为99.49%。转染结果表明,CPPs-pVAX1-P33能在未加脂质体转染试剂的情况下成功转染到vero细胞中并表达。流式细胞技术结果显示,CPPs-pVAX1-P33组和pVAX1-P33组的CD3和CD4的含量极显著高于pVAX1组和PBS组(P0.05);ELISA结果显示,CPPs-pVAX1-P33组和pVAX1-P33组小鼠前6周,小鼠血清中的牛瑟氏泰勒虫特异性抗体、Ig G1、Ig G2a、IFN-γ、IL-2、IL-4以及IL-6的水平呈上升趋势,第6周后开始逐渐下降,在第6周达到最高,CPPs-pVAX1-P33组和pVAX1-P33组与pVAX1组和PBS组相比,差异极显著(P<0.01),且CPPs-pVAX1-P33组和pVAX1-P33组之间存在极显著差异(P<0.01)。综上所述,本试验所制备的CPPs成功将牛瑟氏泰勒虫DNA疫苗转染到vero细胞,且显著增强了牛瑟氏泰勒虫DNA疫苗对小鼠诱导的体液免疫应答和细胞免疫应答效果。本研究结果为今后的分子生物学基因转染和DNA疫苗的研究提供了一种新的策略。

关键词： CPPs 牛瑟氏泰勒虫病DNA疫苗转染昆明小鼠免疫应答

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

弗格森埃希菌生长曲线及半数致死量测定

动物医学进展 2020年第9期41卷 51-54页

作者：相思宇陈建闫可心李明宣闫宗斌薛书江延边大学农学院吉林延吉133002 延边州动物疫病预防控制中心吉林延吉133000

为测定弗格森埃希菌半数致死量,采用振荡比浊法(Dλ值法)测定弗格森埃希菌的生长曲线,并确定菌液与稀释倍数的关系,利用SPSS软件计算弗格森埃希菌对昆明小鼠的半数致死量(LD50)。结果显示,弗格森埃希菌在LB液体培养基中培养4 h^12 h时... 详细信息

为测定弗格森埃希菌半数致死量,采用振荡比浊法(Dλ值法)测定弗格森埃希菌的生长曲线,并确定菌液与稀释倍数的关系,利用SPSS软件计算弗格森埃希菌对昆明小鼠的半数致死量(LD50)。结果显示,弗格森埃希菌在LB液体培养基中培养4 h^12 h时生长迅速,为对数生长期,在12 h以后进入稳定期;采用活菌计数法绘制弗格森埃希菌对数生长期OD值与活菌数的函数关系,得到回归方程y=11.09x+0.157,R^2=0.9955,具有良好的相关性;确定了弗格森埃希菌对昆明小鼠的半数致死量LD50为2.944×10^7 CFU,95%置信区间为1.557×10^7~4.817×10^7 CFU。

关键词：弗格森埃希菌生长曲线活菌数半数致死量

猪附红细胞体eno基因PCR诊断方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

延边大学农学学报 2020年第4期42卷 58-61,71页

作者：闫宗斌薛书江宋建臣许应天延边大学农学院吉林延吉133002

为建立快速、准确的猪附红细胞体诊断方法,根据GenBank上发布的猪附红细胞体的eno基因序列,设计合成1对特异性引物,通过PCR退火温度筛选出最适温度,将PCR扩增产物进行克隆与测序,并进行特异性试验、敏感性试验及临床应用试验。结果表明... 详细信息

为建立快速、准确的猪附红细胞体诊断方法,根据GenBank上发布的猪附红细胞体的eno基因序列,设计合成1对特异性引物,通过PCR退火温度筛选出最适温度,将PCR扩增产物进行克隆与测序,并进行特异性试验、敏感性试验及临床应用试验。结果表明:建立的PCR方法扩增出猪附红细胞体eno基因序列大小为170 bp,与GenBank中(序列号AB265823.1)的序列同源性为98%;建立的PCR方法特异性好、敏感性强,具有很好的临床应用价值,该方法为猪附红细胞体病的病原核酸诊断提供了有力支撑。

关键词：猪附红细胞体 eno基因 PCR 诊断

基于蛋白芯片技术对猪附红细胞体感染小鼠血清差异蛋白的筛选

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2023年第1期43卷 185-190页

作者：梁喜植于天王洋相思宇闫宗斌李文学李海峰薛书江延边大学、农学院、动物医学系吉林延吉133002

为了筛选猪附红细胞体感染小鼠血清的差异蛋白,探讨猪附红细胞体病的致病机制。本试验利用分离纯化后的猪附红细胞体感染昆明种小鼠,设立空白对照组、阴性对照组。经PCR鉴定感染成功后,采集感染小鼠和未感染小鼠血清进行蛋白芯片检测,... 详细信息

为了筛选猪附红细胞体感染小鼠血清的差异蛋白,探讨猪附红细胞体病的致病机制。本试验利用分离纯化后的猪附红细胞体感染昆明种小鼠,设立空白对照组、阴性对照组。经PCR鉴定感染成功后,采集感染小鼠和未感染小鼠血清进行蛋白芯片检测,获取差异蛋白并进行层次聚类分析、功能聚集分析以及KEGG通路富集分析,并对筛选出的细胞因子进行ELISA定量检测验证。结果显示,蛋白芯片检测共筛选出5个差异蛋白,分别是白介素1α(IL-1α)、白介素2(IL-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、催乳素Prolactin和神经纤毛蛋白1(Neuropilin-1)。KEGG通路富集分析结果显示:5种差异蛋白主要参与细胞因子与细胞因子受体的互作通路、JAK-STAT信号通路、PI3K-Akt信号通路以及MAPK信号通路。ELISA定量检测结果显示,筛选出的5个差异蛋白含量均显著上升(P<0.05),与蛋白芯片试验结果一致。猪附红细胞体感染可引起小鼠血清中的IL-1α、IL-2、VEGF、Prolactin和Neurpilin-1细胞因子水平显著升高。

关键词：猪附红细胞体蛋白芯片差异蛋白细胞因子

猪附红细胞体eno基因重组蛋白的制备及免疫效果研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2020年第7期47卷 2231-2238页

作者：闫宗斌伍生军杨静闫可心相思宇许应天薛书江柴方红延边大学农学院延吉133002 吉林省牧业信息中心长春130000

为了研究猪附红细胞体eno基因重组蛋白的免疫效果,本试验将猪附红细胞体eno基因与pET-15b载体进行连接,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。对表达菌株进行诱导表达、纯化,利用纯化后的猪附红细胞体eno重组蛋白(命名为rMseno)对小鼠进行免疫,... 详细信息

为了研究猪附红细胞体eno基因重组蛋白的免疫效果,本试验将猪附红细胞体eno基因与pET-15b载体进行连接,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。对表达菌株进行诱导表达、纯化,利用纯化后的猪附红细胞体eno重组蛋白(命名为rMseno)对小鼠进行免疫,从而评价该重组蛋白在小鼠体内产生的免疫应答水平。试验将20只4周龄的雄性昆明小鼠随机分为A、B、C、D 4个组。免疫A组接种纯化后的重组蛋白rMseno;免疫B组接种经IPTG诱导表达后的重组菌***-Mseno;对照C组接种等量PBS;对照D组接种未经过诱导表达的重组菌***-Mseno。通过ELISA检测方法分别测定血清中抗猪附红细胞体特异抗体水平及γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)细胞因子水平,最后通过脾脏淋巴细胞增殖试验来反映小鼠体内T淋巴细胞的增殖情况。结果显示,构建的重组pET-15b-eno质粒目的基因片段大小为1632 bp,与预期大小相同;纯化的重组蛋白rMseno大小为61 ku,并能够被鼠抗猪附红细胞体血清所识别;免疫A组和免疫B组小鼠血清中抗猪附红细胞体特异抗体水平,IFN-γ、IL-4细胞因子水平以及T淋巴细胞增殖指数均显著或极显著高于对照组(P<0.05;P<0.01)。结果表明,猪附红细胞体eno基因重组蛋白能够诱导小鼠产生较高的体液免疫水平以及细胞免疫应答水平。

关键词：猪附红细胞体重组蛋白纯化昆明小鼠免疫效果

一种CPPs介导的基因转化方法的建立及其应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2021年第11期41卷 2275-2279页

作者：闫可心闫宗斌韩金成薛书江于龙政宋建臣许应天延边大学农学院吉林延吉133002

为了弥补常规基因转化法存在的缺点,本研究采用琼脂糖凝胶电泳分析法探讨了细胞穿膜肽(cell penetrating peptides,CPPs)与DNA的最适比例,用转化率探讨了CPPs-DNA复合物的制备条件、保存条件和解冻条件等对CPPs基因转化的影响,再用CPPs... 详细信息

为了弥补常规基因转化法存在的缺点,本研究采用琼脂糖凝胶电泳分析法探讨了细胞穿膜肽(cell penetrating peptides,CPPs)与DNA的最适比例,用转化率探讨了CPPs-DNA复合物的制备条件、保存条件和解冻条件等对CPPs基因转化的影响,再用CPPs基因转化法进行了牛瑟氏泰勒虫p33基因的克隆与原核表达,进一步验证CPPs基因转化的可行性。结果表明,CPPs与质粒pMD19-T最适电荷比为16∶1;CPPs-DNA复合物的最适制备条件为室温孵育30 min;将培养液D_(600)约为0.6的大肠杆菌菌液在-20℃冰箱保存3月的转化率为(5.58±0.19)×10^(5) CFU/μg,仍符合常规转化要求。按照所优化的条件成功地克隆与表达了牛瑟氏泰勒虫p33基因。本研究结果将为基因转化提供一种新方法。

关键词：细胞穿膜肽(CPPs) 基因转化牛瑟氏泰勒虫 p33基因

1种CPPs调节瑟氏泰勒虫病DNA疫苗免疫应答

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2023年第6期43卷 1203-1207页

作者：闫宗斌张国帅金春梅于龙政薛书江宋建臣许应天延边大学农学院吉林延吉133002

人工合成一种细胞穿膜肽,制备穿膜肽-DNA疫苗复合物,先将其转染Vero细胞,采用间接免疫荧光抗体试验(IFTA)鉴定目的基因在Vero细胞中的表达;再将40只6周龄雌性昆明小鼠分为CPPs-pVAX1-P33、pVAX1-P33、pVAX1和PBS 4个组;分别肌肉注射相... 详细信息

人工合成一种细胞穿膜肽,制备穿膜肽-DNA疫苗复合物,先将其转染Vero细胞,采用间接免疫荧光抗体试验(IFTA)鉴定目的基因在Vero细胞中的表达;再将40只6周龄雌性昆明小鼠分为CPPs-pVAX1-P33、pVAX1-P33、pVAX1和PBS 4个组;分别肌肉注射相应免疫原,采用ELISA方法检测CPPs血清中IgG抗体水平和IL-4、IFN-γ细胞因子水平;在三免2周后检测小鼠脾脏中CD3^(+)、CD4^(+)和CD8^(+)含量。结果显示,CPPs-pVAX1-P33复合物成功转染到Vero细胞,并在其中获得表达;CPPs-pVAX1-P33免疫组昆明小鼠血清中IgG抗体水平,IL-4和IFN-γ细胞因子水平及淋巴细胞亚群CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)含量均显著或极显著高于pVAX1-P33(P<0.05或P<0.01)。结果表明,本试验制备的CPPs能显著诱导瑟氏泰勒虫DNA疫苗的体液免疫和细胞免疫应答反应。

关键词：细胞穿膜肽瑟氏泰勒虫 DNA疫苗免疫应答

猪附红细胞体eno基因重组蛋白对仔猪免疫效果研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国预防兽医学报 2021年第11期43卷 1192-1196,1218页

作者：韩金成伍生军闫宗斌于啸洋金鑫李文学许应天薛书江延边大学农学院吉林延吉133002 延边大学东北寒区肉牛科技创新教育部工程研究中心吉林延吉133002

为了研究猪附红细胞体eno基因重组蛋白对仔猪的免疫效果,本研究将9头仔猪随机平均分为3组:免疫组A皮下多点注射免疫纯化的猪附红细胞体重组蛋白rMseno,剂量为2.5 mg/头;免疫组B皮下注射免疫诱导后的重组菌Mseno/***裂解液,剂量为5×10^(... 详细信息

为了研究猪附红细胞体eno基因重组蛋白对仔猪的免疫效果,本研究将9头仔猪随机平均分为3组:免疫组A皮下多点注射免疫纯化的猪附红细胞体重组蛋白rMseno,剂量为2.5 mg/头;免疫组B皮下注射免疫诱导后的重组菌Mseno/***裂解液,剂量为5×10^(8)cfu/头;对照组C接种等量PBS;共免疫2次,2次免疫间隔21 d。在一免后0、7 d、14 d、21 d、28 d、35 d采集仔猪血清,通过间接ELISA方法检测血清中重组蛋白特异性抗体、IgG_(1)、IgG_(2a)、细胞因子IFN-γ和IL-4水平;流式细胞术检测免疫仔猪CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞水平,评价重组蛋白对仔猪的免疫效果。间接ELISA方法检测结果显示,免疫组A和免疫组B猪血清中重组蛋白特异性抗体、IgG_(1)、IgG_(2a)、细胞因子IL-4和IFN-γ水平均极显著高于对照组C(p0.05)。结果表明,猪附红细胞体eno基因重组蛋白能诱导仔猪产生较高的体液免疫和细胞免疫水平,纯化后的重组蛋白与表达重组蛋白的重组菌裂解液所诱导的免疫效果差异不显著。本研究首次证实猪附红细胞体eno基因重组蛋白对仔猪的免疫效果,为猪附红细胞体病亚单位疫苗的研发提供参考依据。

关键词：猪附红细胞体 rMseno重组蛋白仔猪免疫效果

基于深度神经网络的河流遥感图像分割方法研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

人民长江 2024年第7期55卷 73-78,97页

作者：李宗斌重庆文理学院重庆402160

为解决河流遥感图像分割效果较差且交并比较低的问题,提出了基于深度神经网络的河流遥感图像分割方法。通过对高空间分辨率的河流遥感图像数据集的分析,预处理河流遥感图像,解决数据集中存在的弱标签问题;采用卷积编码-解码网络构建深... 详细信息

为解决河流遥感图像分割效果较差且交并比较低的问题,提出了基于深度神经网络的河流遥感图像分割方法。通过对高空间分辨率的河流遥感图像数据集的分析,预处理河流遥感图像,解决数据集中存在的弱标签问题;采用卷积编码-解码网络构建深度神经网络的特征提取模型,并运用KNN算法实现河流遥感图像的高精度分割;最后以重庆市嘉陵江2022年河流遥感图像为例进行验证。实验结果表明:所提方法能够保留分割后的图像细节特征,且图像分割交并比较高,为0.94。所提方法能够对河流遥感图像进行高精度分割,可为水资源管理和环境保护等方面提供技术支持。

关键词：河流遥感图像图像分割特征提取残差连接深度神经网络嘉陵江

维普期刊数据库博看期刊