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反义阻断抑制非定标性突变相关基因后Vero细胞蛋白质组的表达差异

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生物化学与生物物理学报 2001年第6期33卷 696-702页

作者：金静华余应年钱羽力浙江大学医学院病理生理教研室浙江大学医学院病理生理教研室杭州310031

用mRNA差异显示和反义技术筛选到一个片段 (片段 9)相关基因 (fragment 9relatedgene ,FNR基因 )具有抑制甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)诱发的哺乳类细胞非定标性突变发生的功能。为研究FNR基因的功能机制 ,利用双向凝胶电泳结合相应的 2D分... 详细信息

用mRNA差异显示和反义技术筛选到一个片段 (片段 9)相关基因 (fragment 9relatedgene ,FNR基因 )具有抑制甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)诱发的哺乳类细胞非定标性突变发生的功能。为研究FNR基因的功能机制 ,利用双向凝胶电泳结合相应的 2D分析软件比较反义阻断FNR基因的Vero pM amp-9-细胞和转染空载体的对照细胞Vero pM amp-在MNNG处理后细胞蛋白质组的表达差异。分析结果显示有 12个点仅在Vero pM amp-细胞中检测到 ,2个点仅在Vero pM amp- 9-细胞中检测到 ,统计结果显示有 2 4个点Vero pM amp- 9-细胞表达量高于Vero pM amp-细胞 (P <0 .0 5 ) ,其中有 7个点表达量高于 5倍以上 .说明该基因被反义阻断后有一系列基因表达水平的改变 ,同时也为进一步鉴定与识别非定标性突变发生相关的蛋白质及相应的基因提供线索

关键词：双向凝胶电泳蛋白质组差异表达突变非定标性

多囊卵巢综合征患者胰岛素受体基因外显子17的多态性研究

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中华妇产科杂志 2005年第5期40卷 323-326页

作者：金丽黄荷凤金帆钱羽力浙江大学医学院附属妇产科医院妇科杭州310006

目的　探讨胰岛素受体基因外显子17与多囊卵巢综合征(PCOS)发病的关系。方法对33例PCOS患者(PCOS组)和28例因单纯输卵管原因或男性不育的不孕妇女(对照组)的胰岛素受体基因外显子17进行PCR扩增、单链构型多态性电泳分析,及等位基因分布... 详细信息

目的　探讨胰岛素受体基因外显子17与多囊卵巢综合征(PCOS)发病的关系。方法对33例PCOS患者(PCOS组)和28例因单纯输卵管原因或男性不育的不孕妇女(对照组)的胰岛素受体基因外显子17进行PCR扩增、单链构型多态性电泳分析,及等位基因分布频率比较。同时对各基因型患者进行内分泌检测。结果　两组胰岛素受体基因外显子17的1008bp处,均有T基因型向C基因型(T→C)的突变,均发现了3种基因型,即T/T、C/T、C/C基因型。PCOS组C/C基因型为39%,对照组为11%,两组比较,差异有统计学意义(P0 .05)。PCOS组合并胰岛素抵抗患者为50%,无合并胰岛素抵抗患者为36%,两者比较,差异无统计学意义(P>0 .05)。PCOS组患者胰岛素敏感指数,T/T基因型患者为0 .038±0 .016,C/C基因型患者为0 .024±0 .010,C/T基因型患者为0 .028±0 .014,C/T基因型及C/C基因型与T/T基因型患者比较,差异有统计学意义(P0 .05)。胰岛素受体β亚基表达及血清黄体生成素、睾酮水平, 3种基因型患者比较,差异均无统计学意义(P>0 .05)。

关键词：胰岛素受体基因外显子多囊卵巢综合征患者多态性研究胰岛素敏感指数 C基因型单链构型多态性 PCOS 胰岛素抵抗等位基因分布肥胖患者统计学 PCR扩增输卵管原因内分泌检测黄体生成素对照组不孕妇女男性不育

哺乳动物细胞POLK、POLH、POLI基因对甲基硝基亚硝基胍的应答反应及其启动子区转录因子结合部位的生物信息学分析

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中国病理生理杂志 2006年第7期22卷 1249-1255页

作者：蒋余圣钱羽力余应年浙江大学医学院病理和病理生理学教研室浙江杭州310031

目的:观察甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对培养细胞DNA聚合酶κ、η、ι编码基因表达的影响并用生物信息学方法预测它们的启动子区和启动子区中的转录因子结合部位。方法:利用半定量RT-PCR观察POLK、POLH、POLI基因表达改变。利用在线生物信... 详细信息

目的:观察甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对培养细胞DNA聚合酶κ、η、ι编码基因表达的影响并用生物信息学方法预测它们的启动子区和启动子区中的转录因子结合部位。方法:利用半定量RT-PCR观察POLK、POLH、POLI基因表达改变。利用在线生物信息学软件,确定它们的启动子区,然后,用转录因子预测软件并结合进化足迹法检出包括启动子区在内的3000bp碱基上游序列中的转录因子结合部位。结果:0.2μmol·L-1MNNG导致细胞POLH和POLI表达水平在处理后6-24h间逐渐上升,升高约1倍;而POLK则呈下降;通过转录因子预测软件分析,在POLK、H和I启动子区分别检出了384个、413个和689个推断的转录因子结合部位;通过进化足迹法分析有效地降低了假阳性率,推断的转录因子结合部位分别下降到158个、80个和40个。结论:低浓度MNNG导致POLH、POLI表达水平升高,而POLK表达水平降低;通过在线软件,我们成功地在POLK,POLH,POLI启动子区分别检出。158、80和40个推断的转录因子结合部位;进化足迹法分析能够有效降低预测软件的假阳性率。

关键词： DNA聚合酶类转录因子结合部位基因,POLK 基因,POLH 基因,POLI 甲硝基亚硝胍

应用荧光原位杂交技术进行植入前胚胎染色体诊断的价值

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中华妇产科杂志 2004年第7期39卷 453-456页

作者：徐晨明金帆钱羽力叶英辉朱依敏黄荷凤浙江大学医学院附属妇产科医院生殖医学中心杭州310006

目的　初步探讨应用荧光原位杂交 (FISH)技术进行植入前胚胎染色体诊断的价值。方法　对 10对不孕夫妇进行植入前遗传学诊断 (PGD)周期的超促排卵和卵母细胞浆内单精子注射 ,于受精后第 3天进行胚胎活检及FISH分析 ,第 4天选择染色体组... 详细信息

目的　初步探讨应用荧光原位杂交 (FISH)技术进行植入前胚胎染色体诊断的价值。方法　对 10对不孕夫妇进行植入前遗传学诊断 (PGD)周期的超促排卵和卵母细胞浆内单精子注射 ,于受精后第 3天进行胚胎活检及FISH分析 ,第 4天选择染色体组成正常或平衡的胚胎进行移植。结果　 10个PGD周期共获卵 15 8个 ,对其中 5 4个胚胎进行活检 ,5 1个胚胎获得明确诊断 ,诊断率为94 % (5 1/ 5 4 )。对染色体组成正常或平衡的 2 4个胚胎进行宫腔内移植 ,共 4例获得妊娠 ,其中 3例已足月分娩健康婴儿 ,1例为异位妊娠。结论　应用FISH技术进行植入前胚胎染色体诊断 ,是预防流产和染色体异常患儿出生的有效手段。

关键词：荧光原位杂交染色体障碍胚胎移植植入前遗传学诊断

羊膜移植抑制兔角膜碱烧伤后新生血管增殖的研究

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眼科研究 2004年第3期22卷 243-246页

作者：邱培瑾姚克陈茂华钱羽力浙江大学第二附属医院眼科中心杭州310009 浙江大学生物工程学院浙江大学附属妇女保健医院中心实验室

目的　比较采用保存羊膜和新鲜羊膜移植抑制角膜碱烧伤后新生血管增殖的效果 ;探讨应用保存人羊膜移植防治角膜碱烧伤后新生血管的手术时机。方法　制备角膜碱烧伤后新生血管增殖的动物模型 ;2 2只家兔 ( 2 2眼 )随机分为4组 :A组 ( 4... 详细信息

目的　比较采用保存羊膜和新鲜羊膜移植抑制角膜碱烧伤后新生血管增殖的效果 ;探讨应用保存人羊膜移植防治角膜碱烧伤后新生血管的手术时机。方法　制备角膜碱烧伤后新生血管增殖的动物模型 ;2 2只家兔 ( 2 2眼 )随机分为4组 :A组 ( 4眼 )作为对照组 ;B组 ( 6眼 )在碱烧伤的急性期行新鲜羊膜移植 ;C组 ( 6眼 )在急性期行保存人羊膜移植 ;D组 ( 6眼 )在瘢痕期行保存人羊膜移植。应用计算机彩色图像处理系统测定角膜新生血管面积。结果　 3个移植组和对照组比较 ,角膜新生血管面积的差异均有显著性意义 (P 0 0 5 ) ;C组的新生血管面积明显少于D组 (P <0 0 1)。结论　保存羊膜和新鲜羊膜移植均能有效地抑制角膜碱烧伤后新生血管的增殖 ,治疗效果无显著性差异 ;在角膜碱烧伤的急性期施行羊膜移植防治新生血管增殖的效果要优于在瘢痕期手术。

关键词：兔角膜化学烧伤羊膜移植角膜新生血管

卵泡刺激素正常的无精子症患者无精子因子微缺失检测

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中华泌尿外科杂志 2007年第9期28卷 638-639页

作者：王利权封纯金帆钱羽力黄荷凤浙江大学医学院附属妇产科医院生殖内分泌科浙江杭州310006

研究表明，Yq11，23区域中多个基因片段即无精子因子（azoospermia factor，AZF）的缺失可导致无精子症和严重少精子症。我们选取与无精子症密切相关的Y染色体连锁的13个序列标记位点（sequence taged site，STS），分析无精子症患者Y... 详细信息

研究表明，Yq11，23区域中多个基因片段即无精子因子（azoospermia factor，AZF）的缺失可导致无精子症和严重少精子症。我们选取与无精子症密切相关的Y染色体连锁的13个序列标记位点（sequence taged site，STS），分析无精子症患者Y染色体上AZFa、AZFb、AZFc、AZFd区微缺失情况，

关键词：无精子症患者微缺失检测无精子因子卵泡刺激素严重少精子症 Y染色体基因片段 AZF

小鼠植入前胚胎对输卵管上皮细胞DNA甲基转移酶-1 mRNA的降调节作用

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现代妇产科进展 2005年第2期14卷 126-128,F003页

作者：黄琼晓金帆黄荷凤钱羽力浙江大学医学院附属妇产科医院杭州310006

目的:探讨小鼠植入前胚胎对输卵管上皮细胞DNA甲基转移酶I(Dnmt1)mRNA表达的影响。方法:采用免疫组织化学方法检测Dnmt1在小鼠输卵管的组织学定位;Real- timeRT- PCR检测正常妊娠和假孕小鼠在胚胎2细胞期、4细胞期和8细胞期时,输卵管上... 详细信息

目的:探讨小鼠植入前胚胎对输卵管上皮细胞DNA甲基转移酶I(Dnmt1)mRNA表达的影响。方法:采用免疫组织化学方法检测Dnmt1在小鼠输卵管的组织学定位;Real- timeRT- PCR检测正常妊娠和假孕小鼠在胚胎2细胞期、4细胞期和8细胞期时,输卵管上皮细胞Dnmt1mRNA表达水平的变化。结果:Dnmt1主要表达在小鼠输卵管的上皮细胞层;妊娠组小鼠各期输卵管上皮细胞Dnmt1mRNA表达水平均显著低于同期假孕组(P<0 05)。结论:小鼠植入前期的胚胎对母体输卵管上皮Dnmt1mRNA表达具有降调节作用,胚胎可能通过此作用间接调控输卵管上皮某些基因的表达。

关键词： DNA甲基转移酶输卵管植入前胚胎

子宫内膜异位症患者腹腔液白细胞介素17水平的变化及其意义

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中华妇产科杂志 2005年第6期40卷 380-382页

作者：张信美林俊许泓邓琳钱羽力浙江大学医学院附属妇产科医院妇科杭州310006

目的探讨白细胞介素17(IL17)与子宫内膜异位症(内异症)发病的关系。方法应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测36例不同期别内异症患者(内异症组)和26例非内异症患者(对照组)腹腔液中的IL17水平。结果内异症组和对照组腹腔液IL17水平分别为(5.7... 详细信息

目的探讨白细胞介素17(IL17)与子宫内膜异位症(内异症)发病的关系。方法应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测36例不同期别内异症患者(内异症组)和26例非内异症患者(对照组)腹腔液中的IL17水平。结果内异症组和对照组腹腔液IL17水平分别为(5.7±1.9)ng/L和(5.3±1.4)ng/L,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。按1985年美国生育学会内异症分期标准(rAFS)进行分期,Ⅰ～Ⅱ期内异症患者(16例)腹腔液IL17水平为(6.4±1.7)ng/L,Ⅲ～Ⅳ期内异症患者(20例)为(5.1±1.8)ng/L,两者比较,差异有统计学意义(P0.05)。内异症不孕患者腹腔液IL17水平为(6.4±1.8)ng/L,内异症未合并不孕患者为(5.1±1.8)ng/L,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论IL17水平变化可能与早期内异症及内异症不孕的发病有关。

关键词：子宫内膜异位症白细胞介素17 腹腔液其意义 IL-17 酶联免疫吸附内异症不孕患者 1985年统计学方法应用分期标准 Ⅲ~Ⅳ期水平变化对照组不同期黄体期卵泡期发病

ICSI治疗前无精子症患者Y染色体微缺失的筛查分析

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科技通报 2004年第5期20卷 455-458页

作者：徐晨明金帆叶英辉钱羽力浙江大学医学院附属妇产科医院杭州310006

目的　研究ICSI治疗前无精子症患者Y染色体微缺失发生率及微缺失类型,探讨精子生成障碍与Y染色体微缺失的关系.方法　应用PCR技术,对63例ICSI前行诊断性睾丸活检的无精子症患者进行Y染色体15个序列标记位点的微缺失检测.结果　63例无精... 详细信息

目的　研究ICSI治疗前无精子症患者Y染色体微缺失发生率及微缺失类型,探讨精子生成障碍与Y染色体微缺失的关系.方法　应用PCR技术,对63例ICSI前行诊断性睾丸活检的无精子症患者进行Y染色体15个序列标记位点的微缺失检测.结果　63例无精子症患者中发现12例有Y染色体微缺失,缺失率为19.1%.其中10例患者的缺失发生在AZFc/DAZ区域,缺失率为15.8%;2例患者发生AZFb、AZFc双重缺失,缺失率为3.2%,AZFa无缺失病例.结论　Y染色体微缺失是引起男性无精子症的重要原因之一.采用PCR技术进行微缺失检测是一种非常有效的方法.对无精子症患者进行ICSI治疗前,有必要进行Y染色体的微缺失筛查.

关键词：妇产科学 Y染色体微缺失男性不育卵细胞质内单精子注射