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骨肉瘤中O-GlcNAc糖基转移酶的表达及其对增殖和顺铂敏感性的影响

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中国癌症杂志 2020年第9期30卷 682-688页

作者：祝开忠王挺锐陈焕雄陈涛钟贞浩海南医学院第一附属医院脊柱骨病外科海南海口570102

背景与目的:O-GlcNAc糖基转移酶(O-GlcNAc transferase,OGT)广泛参与肿瘤细胞的生物学行为,并与癌症的进展相关。分析骨肉瘤中OGT的表达水平,并观察其对骨肉瘤细胞增殖和顺铂敏感性的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time... 详细信息

背景与目的:O-GlcNAc糖基转移酶(O-GlcNAc transferase,OGT)广泛参与肿瘤细胞的生物学行为,并与癌症的进展相关。分析骨肉瘤中OGT的表达水平,并观察其对骨肉瘤细胞增殖和顺铂敏感性的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)及免疫组织化学法分析骨肉瘤组织中OGT的表达,并观察OGT的表达与临床病理学特点及与海南医学院第一附属医院收治的患者预后的关系。通过RNA干扰技术沉默骨肉瘤细胞中OGT的表达,通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)及5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)分析其增殖情况。然后采用顺铂作用于骨肉瘤细胞,采用RTFQ-PCR及Western blot分析OGT mRNA及蛋白的表达情况。进一步改变骨肉瘤细胞中OGT的表达后加入顺铂,采用CCK-8及流式细胞术观察对顺铂的敏感性及骨肉瘤细胞的活力。结果:RTFQ-PCR、Western blot及免疫组织化学结果显示,骨肉瘤组织中OGT的表达水平显著提升(P<0.05),OGT的表达与患者肿瘤直径的大小及病理学分期密切相关,且高表达的患者预后差(P<0.05)。沉默骨肉瘤细胞中OGT的表达后,其增殖能力明显减弱(P<0.05),不同浓度的顺铂作用于骨肉瘤细胞后,OGT表达水平随着顺铂浓度的提升而提升。抑制骨肉瘤细胞中OGT的表达能够显著增强骨肉瘤细胞对顺铂的敏感性(P<0.05),相反过表达OGT会导致顺铂耐受。结论:OGT在骨肉瘤组织中高表达,且与患者的预后密切相关,沉默OGT的表达可以抑制骨肉瘤的生长并增强对顺铂的敏感性,OGT可能是骨肉瘤靶向治疗的潜在生物标志物。

关键词： O-GLcNAc糖基转移酶增殖顺铂骨肉瘤

兔骨髓间充质干细胞在藻酸锶凝胶中体外三维培养的实验研究

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中国矫形外科杂志 2014年第7期22卷 637-642页

作者：涂以济吴添龙徐浚怀叶爱芳钟贞浩程细高南昌大学医学院 330000 南昌大学第二附属医院骨一科 330000

[目的]观察兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)于藻酸锶凝胶中体外三维培养的形态与活性变化,为藻酸锶凝胶复合干细胞应用于骨组织工程提供理论依据。[方法]分离培养原代兔BMSCs并扩增,取第3代BMSCs以细胞密度为5×105个/ml复合于藻酸锶凝胶中... 详细信息

[目的]观察兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)于藻酸锶凝胶中体外三维培养的形态与活性变化,为藻酸锶凝胶复合干细胞应用于骨组织工程提供理论依据。[方法]分离培养原代兔BMSCs并扩增,取第3代BMSCs以细胞密度为5×105个/ml复合于藻酸锶凝胶中三维培养,每日于倒置相差显微镜下观察细胞形态,在不同时间点对其进行Live/Dead染色测细胞存活,CCK-8检测细胞增殖,并用扫描电镜观察凝胶的超微结构及细胞于凝胶上的黏附情况。[结果]藻酸锶凝胶质软、透明、渗透性较好;BMSCs接种于藻酸锶凝胶中初始形态为圆形、呈悬浮生长,后细胞逐渐贴壁生长并呈星形或多角形;接种第1 d和第14 d凝胶中活细胞率分别为(88.61±4.08)%和(92.16±2.10)%,两者间无显著统计学差异(P>0.05);第4、7、10、13 d时二维培养组中OD值显著高于三维培养组(P<0.05);扫描电镜示藻酸锶凝胶呈典型的"鸡蛋箱"样结构,孔隙直径大小平均为150μm;接种于凝胶中7 d后可见细胞均匀黏附于凝胶壁生长。[结论]藻酸锶凝胶是一种优良的细胞支架,将其复合种子细胞应用于骨组织工程具有广阔的前景。

关键词：骨髓间充质干细胞藻酸锶组织工程

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LIM矿化蛋白-1发挥成骨效应的机制探讨

海南医学 2016年第15期27卷 2507-2510页

作者：纪志华钟贞浩孟志斌海南医学院附属医院骨科海南海口570102

近来大量研究证实,LIM矿化蛋白-1(LMP-1)是一种细胞内骨架蛋白,属于PDZ-LIM蛋白家族,参与细胞成骨分化的早期阶段;其不同结构域各有其独特的作用,它们可通过招募多种成骨因子、促进细胞增殖、上调成骨相关基因表达、减少炎性骨丢失等多... 详细信息

近来大量研究证实,LIM矿化蛋白-1(LMP-1)是一种细胞内骨架蛋白,属于PDZ-LIM蛋白家族,参与细胞成骨分化的早期阶段;其不同结构域各有其独特的作用,它们可通过招募多种成骨因子、促进细胞增殖、上调成骨相关基因表达、减少炎性骨丢失等多种途径发挥其促成骨效应。LMP-1可通过其不同结构域的协同作用发挥强大的促成骨效应。本文对LMP-1发挥成骨效应的机制探讨作一综述。

关键词： LIM矿化蛋白-1 结构域成骨分化机制

TRIM59激活β-catenin/TCF4信号通路促进骨肉瘤细胞的侵袭和迁移

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肿瘤 2021年第9期41卷 581-590页

作者：祝开忠陈涛陈焕雄王挺锐钟贞浩海南医学院第一附属医院脊柱骨病外科海南海口570102

目的:研究三结构域家族蛋白59(tripartite motif family protein 59,TRIM59)在骨肉瘤组织细胞中的表达情况,并探讨其对骨肉瘤侵袭及迁移的影响及可能的分子作用机制。方法:采用蛋白质印迹法及实时荧光定量PCR法检测骨肉瘤组织及细胞中TR... 详细信息

目的:研究三结构域家族蛋白59(tripartite motif family protein 59,TRIM59)在骨肉瘤组织细胞中的表达情况,并探讨其对骨肉瘤侵袭及迁移的影响及可能的分子作用机制。方法:采用蛋白质印迹法及实时荧光定量PCR法检测骨肉瘤组织及细胞中TRIM59的表达水平,并通过免疫组织化学法检测骨肉瘤及相应癌旁组织中TRIM59蛋白的表达水平。通过病毒感染的方法将携带有特异性针对TRIM59基因的shRNA(shTRIM59)和阴性对照shNC转入骨肉瘤U2-OS细胞,采用Transwell小室及划痕愈合实验检测沉默TRIM59基因表达对U2-OS细胞侵袭及迁移能力的影响,蛋白质印迹法检测对上皮-间质转化相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白β-catenin和转录因子4(transcription factor 4,TCF4)表达的影响,最后通过体内实验观察TRIM59基因沉默对骨肉瘤细胞肺转移的影响。通过病毒感染的方法将TRIM59基因过表达载体转入骨肉瘤143B细胞中,同时采用β-catenin信号通路抑制剂XAV939处理TRIM59过表达的细胞,再用蛋白质印迹法检测β-catenin和TCF4蛋白的表达水平,Transwell小室及划痕愈合实验检测骨肉瘤细胞侵袭及迁移能力的变化情况。结果:骨肉瘤组织及细胞中TRIM59 mRNA及蛋白的表达水平均明显升高(P均<0.01)。下调骨肉瘤U2-OS细胞中TRIM59的表达水平后,Transwell小室及划痕愈合实验均表明其侵袭及转移能力减弱(P均<0.01),U2-OS细胞中N-cadherin和Vimentin蛋白的表达水平明显下调,E-cadherin蛋白的表达水平明显上调(P均<0.05);同时β-catenin和TCF4蛋白的表达水平均明显下调(P均<0.05),小鼠体内实验也证实下调TRIM59表达后骨肉瘤细胞肺部转移的发生率降低。上调TRIM59表达后,β-catenin和TCF4蛋白的表达水平均明显上调(P均<0.05),细胞的侵袭和迁移能力均明显提高(P均<0.05),但XAV939能明显抑制β-catenin和TCF4蛋白的表达水平,进而恢复抑制骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力(P均<0.05)。结论:TRIM59在骨肉瘤组织及细胞中高表达,TRIM59可能通过激活β-catenin/TCF4信号通路调控体内外骨肉瘤细胞转移的发生。TRIM59可能是骨肉瘤治疗上一个潜在新的靶点。

关键词：骨肉瘤 TRIM59 RNA,小分子干扰细胞运动 β-catenin信号通路

大鼠BMSCs条件培养基对NSCs形态、生长及分化的影响

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中国细胞生物学学报 2015年第8期37卷 1102-1108页

作者：纪志华钟贞浩史方富唐崧杰孟志斌海南医学院附属医院骨科海口570102

通过对SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)及新生鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)进行体外分离、培养及鉴定后,观察BMSCs条件培养基对NSCs向神经细胞分化的影响。采用全贴壁培养法培养BMSCs,并采用流式... 详细信息

通过对SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)及新生鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)进行体外分离、培养及鉴定后,观察BMSCs条件培养基对NSCs向神经细胞分化的影响。采用全贴壁培养法培养BMSCs,并采用流式细胞术鉴定其特异性表面抗原标记。无血清技术培养NSCs,采用免疫荧光技术鉴定其特异性抗原标记。BMSCs条件培养基(含10%胎牛血清的DMEM培养基)对NSCs诱导7 d后,镜下观察细胞形态和生长,并采用免疫荧光技术检测NSCs分化。BMSCs高表达CD90、CD29(>90%),而CD45呈阴性表达。免疫荧光染色显示,NSCs标记蛋白Nestin、SOX2为阳性。NSCs经BMSCs培养液诱导分化7 d后经免疫荧光鉴定,MAP-2及GFAP呈阳性,阳性率分别为73.80%和50.47%;NSCs经胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)诱导分化7 d后经免疫荧光鉴定,MAP-2及GFAP呈阳性,阳性率分别为42.14%和31.90%。BMSCs条件培养基可诱导NSCs分化为神经元及星形胶质细胞,其中BMSCs分泌的细胞因子在诱导分化中可能发挥重要作用。

关键词：骨髓间充质干细胞神经干细胞培养诱导分化鉴定免疫细胞荧光染色

Orem自理理论在颈椎骨折患者手术术后护理中的应用

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广西大学学报（自然科学版） 2020年第2期45卷 451-457页

作者：王春丽于鹏陈叶丹钟贞浩王文贤海南医学院第一附属医院手术室海南海口570102 海南医学院第一附属医院脊椎骨病外科海南海口570102

探讨Orem自理理论在颈椎骨折患者手术术后护理中的应用及对患者QOL评分的影响。选取2016年1月~2019年1月在院接受治疗的100例颈椎骨折手术患者,作为研究对象。将患者分为A组与B组,其中A组49例患者接受骨折手术后,采用常规护理方法;B组5... 详细信息

探讨Orem自理理论在颈椎骨折患者手术术后护理中的应用及对患者QOL评分的影响。选取2016年1月~2019年1月在院接受治疗的100例颈椎骨折手术患者,作为研究对象。将患者分为A组与B组,其中A组49例患者接受骨折手术后,采用常规护理方法;B组51患者骨折手术后在A组常规护理基础之上应用Orem自理理论。A组患者术后治疗前QOL生活质量评分(16.15±1.13分)与B组治疗前QOL生活质量评分(16.29±3.94分)比较,无明显差异(P>0.05)。A组患者术后治疗6个月后QOL生活质量评分(38.17±0.66分)显著低于B组患者6个月QOL生活质量评分(58.11±0.87分),组间比较存在显著差异(P<0.05),统计有学意义。A组患者总的并发症发生率为18.37%显著高于B组总的并发症发生率1.96%,组间比较存在差异(P<0.05),统计学有意义。A组术后10 d VAS疼痛评分轻度1例、中度42例、重度6例与B组术后10 d VAS疼痛评分轻度45例、中度6例、重度0例相比,组间比较存在差异(P<0.05),统计学有意义。A组患者护理满意度(69.39%)显著低于B组护理满意度(98.04%),组间比较存在显著差异(P<0.05),统计学有意义。Orem自理理论在颈椎骨折患者手术术后护理中的应用,能够提高患者QOL评分,降低患者身体疼痛程度,增强患者自护能力,提高患者的满意度,临床相关领域,值得广泛推广与应用。

关键词： Orem自理理论颈椎骨折手术术后护理 QOL评分

E3泛素化连接酶TRIM29在骨肉瘤细胞生长中的调控机制研究

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海南医学院学报 2024年第14期30卷 1041-1047页

作者：钟贞浩文王强李国军史册唐彦超陈焕雄海南医学院第一附属医院海南省脊柱外科临床医学中心海南海口570102 徐州医科大学附属宿迁医院骨科江苏徐州223865 北京大学第三医院骨科北京100083

目的:E3泛素化连接酶TRIM29与肿瘤的恶性生长紧密相关,本研究旨在分析并探讨TRIM29在骨肉瘤中的表达及其潜在的分子机制。方法:通过蛋白质印迹法(Western blot)、免疫组化(IHC)及qRTPCR分析骨肉瘤组织中TRIM29基因的表达情况,采用siRNA... 详细信息

目的:E3泛素化连接酶TRIM29与肿瘤的恶性生长紧密相关,本研究旨在分析并探讨TRIM29在骨肉瘤中的表达及其潜在的分子机制。方法:通过蛋白质印迹法(Western blot)、免疫组化(IHC)及qRTPCR分析骨肉瘤组织中TRIM29基因的表达情况,采用siRNA质粒转染至骨肉瘤细胞U2OS中,CCK8和EDU检测骨肉瘤细胞的增殖能力,进一步采用葡萄糖摄取量、乳酸生成量及G6P检测糖酵解水平变化并分析潜在机制,建立BACB/c裸小鼠皮下移植瘤模型,观察下调TRIM29观察对荷瘤瘤生长的影响。结果:qRTPCR结果证实与正常组织相比,骨肉瘤组织中TRIM29的mRNA表达水平显著提升,进一步结果也证实其蛋白水平也同样显著提升。下调骨肉瘤细胞中TRIM29的表达后,CCK8及EDU实验皆表明其增增殖能力减弱,相反其凋亡比例升高,细胞于G1区阻滞,其乳酸生成量、葡萄糖消耗、G6P也相应的减弱,糖酵解关节限速酶HKII、PFKFB3、PKM、LDHA及GLUT1等蛋白也相应的减低,同样体内实验也表明下调TRIM29的表达后,荷瘤鼠体积、重量也随之减轻,生长速度减慢。结论:TRIM29在骨肉瘤中高表达,抑制骨肉瘤细胞中TRIM29的表达后,其细胞增殖能力及糖酵解水平减低。降低TRIM29的表达通过抑制细胞糖酵解水平进而抑制骨肉瘤细胞的生长。

关键词： TRIM29 糖酵解增殖骨肉瘤

糖尿病患者初次人工髋关节置换手术前后CRP、ESR的变化情况

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糖尿病患者初次人工髋关节置换手术前后CRP、ESR的变化情况

骨肉瘤中MAGE-A1和Livin的表达及临床意义

中国转化医学和整合医学研讨会

作者：纪志华钟贞浩史方富唐崧杰孟志斌海南医学院附属医院

目的:探讨糖尿病患者初次人工髋关节置换手术前后血清CRP、ESR的变化,以及二者与血糖控制情况的相关性。方法:2011年10月至2013年12月,行初次单侧髋关节置换手术66例糖尿病患者及66例非糖尿病患者,监测患者术前及术后第1、3、5、7、10... 详细信息

目的:探讨糖尿病患者初次人工髋关节置换手术前后血清CRP、ESR的变化,以及二者与血糖控制情况的相关性。方法:2011年10月至2013年12月,行初次单侧髋关节置换手术66例糖尿病患者及66例非糖尿病患者,监测患者术前及术后第1、3、5、7、10天空腹静脉血清CRP、ESR值。结果:糖尿病患者CRP和ESR值在各监测时间点均较高,且血糖控制不良组高于控制良好组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:关节置换术后糖尿病患者CRP和ESR值变化遵循一定规律且高于非糖尿病患者,并与血糖控制情况有关;为早期判断感染提供依据。

关键词：髋关节置换糖尿病 C反应蛋白血沉

来源： cnki会议评论

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骨肉瘤中MAGE-A1和Livin的表达及临床意义