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血管性血友病因子裂解酶间隔区结构域突变对酶生物学功能的影响

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吉林大学学报（医学版） 2024年第4期50卷 900-907页

作者：王萌吴昊李华赵艺鸿金圣宇延边大学附属医院血液内科吉林延吉133000 浙江省绍兴市人民医院康复医学科浙江绍兴312000 延边大学附属医院体检科吉林延吉133000 延边大学附属医院中心实验室吉林延吉133000

目的:探讨血管性血友病因子裂解酶ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1型13(ADAMTS13)间隔区结构域在血管性血友病因子(vWF)裂解过程中的生物学功能,阐明ADAMTS13在血栓性血小板减少性紫癜(TTP)发病机制中的作用。方法:将ADAMTS13间隔区结构... 详细信息

目的:探讨血管性血友病因子裂解酶ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1型13(ADAMTS13)间隔区结构域在血管性血友病因子(vWF)裂解过程中的生物学功能,阐明ADAMTS13在血栓性血小板减少性紫癜(TTP)发病机制中的作用。方法:将ADAMTS13间隔区结构域中的氨基酸残基TEDRLPR以点突变技术逐个基因突变(突变体M1~M7),将构建的ADAMTS13与其突变体质粒转染至人胚肾HEK293细胞,稳定表达后提纯重组蛋白。观察野生型和突变型ADAMTS13在变性条件、剪切应力作用和ADAMTS13抗体处理后裂解vWF的能力。结果:荧光共振能量转移(FRET)实验,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)对FRET-vWF73剪切能力降低(P0.05),表明ADAMTS13的C末端与vWF之间存在多个结合位点。ADAMTS13抗体处理可在一定程度上抑制野生型和突变型ADAMTS13裂解vWF的能力。结论:间隔区突变后ADAMTS13的活性降低。ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)可能是ADAMTS13在底物识别时的重要作用位点。

关键词：血管性血友病因子裂解酶 ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1型13 间隔区结构域血管性血友病因子血栓性血小板减少性紫癜

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无流体剪切力条件下ADAMTS13裂解内皮细胞上特大血管性血友病因子的研究

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中国实验血液学杂志 2024年第2期32卷 532-540页

作者：赵善琛李华王萌赵艺鸿李先杰金圣宇延边大学附属医院血液内科吉林延吉133000 延边大学附属医院体检科吉林延吉133000 延边大学附属医院中心实验室吉林延吉133000

目的:研究血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)在无流体剪切力下裂解内皮细胞上特大血管性血友病因子(ULVWF)的分子机制,为探明血栓性血小板减少性紫癜(TTP)和其他血栓性疾病的发病机理提供理论依据。方法:通过免疫荧光显微镜观察ADAMTS1... 详细信息

目的:研究血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)在无流体剪切力下裂解内皮细胞上特大血管性血友病因子(ULVWF)的分子机制,为探明血栓性血小板减少性紫癜(TTP)和其他血栓性疾病的发病机理提供理论依据。方法:通过免疫荧光显微镜观察ADAMTS13在无流体剪切力下裂解内皮细胞表面上ULVWF的情况,采用ELISA测定不同条件下培养基中VWF抗原量的变化。ELISA和Western blot分别测定有无流体剪切力或凝血因子VIII(FVIII)条件培养基中的VWF和蛋白水解片段的数量。多聚体分析评估ADAMTS13裂解内皮细胞上ULVWF的情况。将组胺刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与ADAMTS13和各种N-和C-末端截断的突变体一起孵育,通过免疫荧光显微镜观察与细胞保持结合的ULVWF,ELISA测定内皮细胞释放出的ULVWF,确定降解内皮细胞上ULVWF所需的ADAMTS13结构域。结果:在无流体剪切力下,重组ADAMTS13和血浆ADAMTS13迅速降解了内皮细胞表面上新形成的ULVWF。ULVWF的蛋白水解过程依赖于培养时间、ADAMTS13浓度和剪切力。ADAMTS13介导的蛋白水解释放的VWF分布与组胺刺激下内皮细胞分泌的VWF分布非常相似,提示ULVWF在内皮细胞表面发生裂解。裂解内皮细胞上ULVWF需要ADAMTS13半胱氨酸富集区(Cys-rich,Cys R)结构域和间隔区结构域,但不需要ADAMTS13的7个TSP1重复序列(TSP12-8)和2个补体结合区(CUB)结构域。结论:内皮细胞上ULVWF聚合物在无流体剪切力下也对ADAMTS13的裂解敏感,这为ADAMTS13裂解内皮细胞结合的ULVWF的分子机制提供了新见解,并可能有助于理解TTP和其他血栓性疾病的发病机理。

关键词：血管性血友病因子裂解酶血管性血友病因子血栓性血小板减少性紫癜

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本体在XML关联规则挖掘中的应用研究

本体在XML关联规则挖掘中的应用研究

作者：金圣宇哈尔滨工程大学

学位级别：硕士

随着数据库技术的迅速发展以及数据库管理系统的广泛应用，人们拥有和积累的数据越来越多。数据挖掘在最近几年里已被数据库界广泛研究和应用，而关联规则的挖掘在其中占有很重要的地位，其在商务决策的制定方面的应用很有前景，而由于... 详细信息

随着数据库技术的迅速发展以及数据库管理系统的广泛应用，人们拥有和积累的数据越来越多。数据挖掘在最近几年里已被数据库界广泛研究和应用，而关联规则的挖掘在其中占有很重要的地位，其在商务决策的制定方面的应用很有前景，而由于XML文档结构上的特殊性，对X2ML文档的关联规则挖掘的研究还存在很多问题，而且想要产生多层次的挖掘结果也很难。因此，本文提出一种将领域本体引入到XML文档挖掘过程中的算法——基于本体的XML关联规则挖掘算法。首先，本文介绍了数据挖掘、XML和本体论的基本知识及相关技术。其次，分析了XML在数据挖掘中的应用，介绍了面向XML文档的数据挖掘技术，提出了将领域本体知识引入到数据挖掘中以得到更多层次的数据挖掘结果，给出了基于本体的XML关联规则挖掘算法。该算法的优点在于：引入领域本体知识，使关联规则的挖掘可以在更多层次上进行;将XML文档解析后存入哈希表，可以提高扫描XML文档的速度;根据用户的要求将领域本体解析后存入哈希表，不需要在每次查找领域知识时都到读取硬盘。最后，对算法进行了理论上的分析，并且通过对给定数据的实验，验证了算法的挖掘效果，论述了该算法的优点和不足。

关键词：数据挖掘关联规则本体 XML

小剂量右美托咪定滴鼻后行床旁中心静脉穿刺术的观察

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小剂量右美托咪定滴鼻后行床旁中心静脉穿刺术的观察

作者：金圣宇大连医科大学

学位级别：硕士

目的：探讨小剂量右美托咪定滴鼻后行临床中心静脉穿刺术的镇静效果及安全性。方法：80例胃肠外科床旁中心静脉穿刺术患者，使用随机数字表法分为观察组(A组)和对照组（B组），各40例。所入选患者年龄在30岁到55岁、入选标准：ASAⅠ—... 详细信息

目的：探讨小剂量右美托咪定滴鼻后行临床中心静脉穿刺术的镇静效果及安全性。方法：80例胃肠外科床旁中心静脉穿刺术患者，使用随机数字表法分为观察组(A组)和对照组（B组），各40例。所入选患者年龄在30岁到55岁、入选标准：ASAⅠ—Ⅱ级，体重指数（BMI）15-20㎏/㎡，根据Mallanpati试验，尽可能避免困难气道。排除标准：有相关药物过敏史，既往有高血压、冠心病等心脑血管疾病史，肝、肺、肾功能异常，低血容量及心脏传导功能障碍者，存在鼻骨畸形及外伤等鼻咽部疾病，排除术前长期使用镇静镇痛类药物的患者，对感觉直线和准确标定能力差或对描述词理解力差的老年人。A组操作前经鼻滴入0.5μg/kg右美托咪定，双侧平均滴入，B组给予经鼻滴入适量安慰剂-生理盐水，滴鼻操作均在中心静脉穿刺操作开始前30分钟进行。中心静脉穿刺术采用穿刺点利多卡因局部麻醉法操作。将T0-滴鼻前（基础值），T1-穿刺前30分钟（在此点两组患者均分别经鼻滴入安慰剂-生理盐水和0.5μg/kg右美托咪定）、T2-行局麻穿刺即刻、T3-缝皮穿刺即刻、T4-操作完毕后10分钟、T5-穿刺完毕后30分钟作为时间点。记录SBP（收缩压）、DBP（舒张压）、SPO2（血氧）、HR（心率）以及视觉观察呼吸频率及呼吸变化（观察有无呼吸缓慢，呼吸抑制）。记录Ramsay镇静评分、操作前后的MMSE（简易智能精神状态量表）评分(分别于滴鼻前以及穿刺操作完毕后2小时进行)、操作完毕后用VAS疼痛评分以及使用简式McGill疼痛问卷调查评分分别进行统计比较。结果：①两组患者基本情况比较无统计学意义（P﹥0.05）;两组组患者文化程度的比较无统计学意义（P﹥0.05）;②血压：两组患者未进行滴鼻前SBP、DBP测量结果差异无统计学意义（P﹥0.05）。A组内比较SBP、DBP差异无统计学意义（P﹥0.05）。B组内比较T2、T3点与T0点SBP、DBP差异均有统计学意义（P﹤0.05）。两组间比较在T2、T3点SBP、DBP差异均有统计学意义（P﹤0.05）。③心率：A组各个点与T0时间点的HR比较，差异无统计学意义（P﹥0.05）。B组T2、T3时间点HR均高于T0点HR（P﹤0.05）。两组间比较，分别在T2、T3点，差异有统计学意义（P﹤0.05），B组HR均高于A组。④两组间比较SpO2检测结果在各时间点的比较差异无统计学意义（P﹥0.05）;⑤其他：操作中Ramsay镇静评分A组高于B组（P﹤0.05）。A组患者VAS评分、McGill评分明显低于B组（P﹤0.05）。两组不良反应发生率比较的差异无统计学意义（P﹥0.05），两组患者术前、术后MMSE评分的变化差异无统计学意义（P﹥0.05）。结论：小剂量右美托咪定滴鼻用于床旁中心静脉穿刺术，可以对患者起到轻微镇静以及镇痛作用，还可起到轻度中枢降压作用，无呼吸抑制。对穿刺操作带来的不适感，患者的满意度好，无呼吸抑制，不良反应少，安全可靠，完全可用于穿刺术，具有一定的临床价值，值得推广使用。

关键词：右美托咪定滴鼻中心静脉穿刺术

血管性血友病因子裂解酶对血管新生的抑制作用

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中华血液学杂志 2015年第7期36卷 602-606页

作者：金春海王霜赵艳红金圣宇李华延边大学附属医院血液内科吉林省延吉市133000 延边大学附属医院中心实验室吉林省延吉市133000

目的观察血管性血友病因子裂解酶（ADAMTS13）对血管内皮细胞生长因子（VEGF）介导的血管新生的抑制作用.方法以不同浓度的ADAMTS13（1、5、25、50、100 nmol/L）处理脐带静脉内皮细胞（HUVEC）,采用MTT法检测ADAMTS13对HUVEC增殖的影... 详细信息

目的观察血管性血友病因子裂解酶（ADAMTS13）对血管内皮细胞生长因子（VEGF）介导的血管新生的抑制作用.方法以不同浓度的ADAMTS13（1、5、25、50、100 nmol/L）处理脐带静脉内皮细胞（HUVEC）,采用MTT法检测ADAMTS13对HUVEC增殖的影响,通过管腔形成实验观察ADAMTS13对HUVEC分化的影响,通过刮伤愈合实验观察ADAMTS 13对HUVEC迁移的影响,利用鸡胚绒毛尿囊膜实验和基质胶塞实验观察ADAMTS13在体内对血管新生的影响.结果与对照组相比,25、50、100 nmol/L ADAMTS13对HUVEC增殖均有明显的抑制作用（P值均＜0.01）.在刮伤愈合实验中,制造损伤8h后,对照组HUVEC的迁移距离为（79±22）μm,VEGF处理组为（250±8） μm,VEGF＋ADAMTS13处理组为（170±23）μm,组间差异均有统计学意义（P值均＜0.05）.在管腔形成试验中,VEGF处理组、VEGF＋ADAMTS13处理组HUVEC培养16h后形成的管状结构长度分别是对照组的（450.6±16.6）％、（235.3±19.0）％,VEGF＋ ADAMTS13处理组管状结构少于VEGF处理组（P＜0.001）.鸡胚绒毛尿囊膜实验中,VEGF（20 ng/ml）、ADAMTS13（100 nmol/L）、ADAMTS13（100nmol/L）＋VEGF（20 ng/ml）处理组的血管形成数量分别为对照组的（228.2±10.8）％、（69.2±21.1）％、（184.6±15.2）％.基质胶塞实验结果显示VEGF＋ADAMTS13处理组小鼠体内的血管数量为VEGF组的43.5％.结论体外实验结果表明ADAMTS13对HUVEC增殖、分化、迁移能力均有抑制作用;体内实验结果提示ADAMTS13对血管新生有抑制作用.

关键词： von Willebrand因子血管生成抑制剂内皮生长因子人脐静脉内皮细胞

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气象资料数据化全流程监控方案研究

电子世界 2020年第10期 61-62页

作者：金圣宇东北空管局

东北空管局气象中心信息室利用空管数据化的理念为指导思想,完成气象资料传输过程的各个环节和质量控制,创新信息化监控管理运行模式,量化构建气象资料监控传输管理与质量评价体系.气象资料数据化全流程监控方案是指将气象资料从发布到... 详细信息

东北空管局气象中心信息室利用空管数据化的理念为指导思想,完成气象资料传输过程的各个环节和质量控制,创新信息化监控管理运行模式,量化构建气象资料监控传输管理与质量评价体系.气象资料数据化全流程监控方案是指将气象资料从发布到应用整个传输过程量化,以图形化的形式展现出来,这样可以直观地看到资料传输过程每一个环节,而且还可以通过大数据存储、分析等手段来制定气象资料传输业务量化指标.

关键词：大数据存储气象资料资料传输质量评价体系数据化气象中心管理运行模式传输业务

血管性血友病因子裂解酶CysR结构域生物学功能的研究

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中国实验血液学杂志 2021年第3期29卷 893-900页

作者：吴昊李华苏畅李鸿雁崔日花金圣宇延边大学附属医院(延边医院)血液内科吉林延吉133000 延边大学附属医院(延边医院)体检科吉林延吉133000

目的:研究血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)富含半胱氨酸(CysR)结构域在血管性血友病因子(vWF)裂解中的生物学功能,为探明血栓性血小板减少性紫癜(TTP)的发病机制提供实验证据。方法:利用点突变技术对ADAMTS13 CysR结构域中的EDGTLS氨... 详细信息

目的:研究血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)富含半胱氨酸(CysR)结构域在血管性血友病因子(vWF)裂解中的生物学功能,为探明血栓性血小板减少性紫癜(TTP)的发病机制提供实验证据。方法:利用点突变技术对ADAMTS13 CysR结构域中的EDGTLS氨基酸残基进行基因突变,制备质粒,表达并提纯蛋白。1%Sea Kem HGT琼脂糖凝胶分离后用Western blot方法观察野生型和突变型ADAMTS13在变性条件或剪切应力作用下对底物v WF的裂解活性。结果:成功构建了ADAMTS13突变体质粒(M1:Glu515Ala;M2:Asp516Ala;M3:Gly517Ala;M4:Thr518Ala;M5:Leu519Ala;M6:Ser520Al)。野生型和突变型ADAMTS13质粒在HEK293细胞中稳定表达,并提纯蛋白。在变性条件下,野生型ADAMTS13基本完全裂解了v WF多聚体,而突变体M1裂解v WF多聚体的活性显著降低(P <0.01)。在体外剪切应力作用下,与野生型ADAMTS13相比,突变体M1对v WF多聚体的裂解能力显著降低(P <0.01)。突变体M1对FRETS-vWF73的剪切能力与野生型ADAMTS13相比显著降低。与野生型ADAMTS13相比,突变体M1与v WF之间的结合力未见明显降低。结论:在变性条件和剪切应力作用下,ADAMTS13 CysR结构域在酶切v WF多聚体的过程中起着重要作用,其中Glu515可能是底物识别的重要作用位点。

关键词：血管性血友病因子裂解酶富含半胱氨酸结构域血管性血友病因子血栓性血小板减少性紫癜

混合梁斜拉桥微膨胀UHPC灌注钢混结合段的时变效应

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铁道科学与工程学报 2024年第2期21卷 709-720页

作者：谭星宇刘路明方志洪金圣杨灿湖南大学土木工程学院湖南长沙410082 湖北省交通规划设计院股份有限公司湖北武汉430051

为明确微膨胀超高性能混凝土(Ultra-High-Performance Concrete,UHPC)灌注材料的收缩徐变对混合梁斜拉桥钢混结合段长期性能的影响,以湖北武穴长江公路大桥为工程背景,开展材性试验与结构反应实测。基于一种全桥杆系+局部空间网格的多... 详细信息

为明确微膨胀超高性能混凝土(Ultra-High-Performance Concrete,UHPC)灌注材料的收缩徐变对混合梁斜拉桥钢混结合段长期性能的影响,以湖北武穴长江公路大桥为工程背景,开展材性试验与结构反应实测。基于一种全桥杆系+局部空间网格的多尺度有限元建模方法,对不同灌注材料收缩徐变下钢混结合段的时变效应进行分析研究。研究结果表明:实桥所采用的微膨胀UHPC在测试龄期内膨胀应变呈现出先增后减且始终保持膨胀的趋势,在约5 d龄期时达到最大膨胀应变292.6με,至1 080 d时为83.8με;徐变系数在前50 d龄期内增长较快,至1 080 d时为1.63。灌注材料的收缩可在结合段内部产生显著的次应力,表现为内填混凝土的拉应力和钢格室的压应力;徐变则会导致混凝土应力松弛而使一部分恒载压应力向钢结构转移。运营20 a后,钢混结合段内填普通混凝土存在较高的开裂风险。未作收缩控制的普通UHPC虽亦出现拉应力,但未超过其抗拉强度,抗裂安全系数仍可达到1.5以上。而微膨胀UHPC处于受压状态,不存在开裂问题。微膨胀UHPC的应用,既可改善内填混凝土的抗裂性能,又有助于常规钢混结合段的结构优化,大幅减少材料用量和结构自重。

关键词：混合梁斜拉桥钢混结合段超高性能混凝土(UHPC) 微膨胀混凝土收缩徐变

血管性血友病因子裂解酶在血栓性血小板减少性紫癜中的作用研究进展

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延边大学医学学报 2022年第1期45卷 55-59页

作者：李树君金圣宇延边大学附属医院血液内科吉林延吉133000 延边大学附属医院中心实验室吉林延吉133000

栓性血小板减少性紫癜(TTP)是一种以微血管病性溶血性贫血、血小板减少、中枢神经系统症状、发热及肾脏损害为主要临床表现的罕见疾病,发病率约为1/100万[1-2],未及时给予治疗时死亡率可达90%[3].1982年,MOAKE等[4]在TTP患者的血浆中发... 详细信息

栓性血小板减少性紫癜(TTP)是一种以微血管病性溶血性贫血、血小板减少、中枢神经系统症状、发热及肾脏损害为主要临床表现的罕见疾病,发病率约为1/100万[1-2],未及时给予治疗时死亡率可达90%[3].1982年,MOAKE等[4]在TTP患者的血浆中发现了高黏附性的“超大”血管性血友病因子(VWF)多聚体,认为TTP是由血浆中VWF裂解酶缺乏所致.

关键词：血栓性血小板减少性紫癜血管性血友病因子裂解酶血管性血友病因子