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软骨细胞中成纤维细胞生长因子对长链非编码RNA Malat1的影响

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软骨细胞中成纤维细胞生长因子对长链非编码RNA Malat1的影响

作者：郭静远第三军医大学

学位级别：硕士

骨骼是人类最大的器官。骨骼的生长发育是一个复杂的过程,其生长方式主要有两种,即膜内成骨与软骨内成骨。其中软骨内成骨是躯干骨,四肢长骨,以及部分不规则短骨生长的主要方式,膜内成骨则是顶骨,额骨和锁骨等骨骼的主要形成方式。软骨... 详细信息

骨骼是人类最大的器官。骨骼的生长发育是一个复杂的过程,其生长方式主要有两种,即膜内成骨与软骨内成骨。其中软骨内成骨是躯干骨,四肢长骨,以及部分不规则短骨生长的主要方式,膜内成骨则是顶骨,额骨和锁骨等骨骼的主要形成方式。软骨内成骨在胚胎发育过程及长骨形成等方面发挥重要的作用[1],目前公认成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor,FGF)信号通路在软骨内成骨过程中发挥着重要的调控作用。成纤维细胞生长因子家族由22个成员组成,目前认为FGF2是其中表达最广泛的细胞因子。成纤维细胞生长因子通过与细胞膜上的成纤维细胞生长因子受体(Fibroblast growth factor receptor,FGFR)激活下游多种通路,产生一系列效应。在小鼠模型及人类病例中,FGFR点突变能引起多种类型的侏儒。在软骨细胞中,FGF信号通路能抑制细胞增殖。目前关于FGF信号通路所影响的下游蛋白分子已有很多研究,但在软骨组织中FGF信号通路是否通过影响非编码蛋白RNA从而发挥其对软骨细胞的调控作用,尚没有得到很好的研究。近年来对非编码RNA(non-coding RNA,nc RNA)在胚胎发育,正常生理过程及疾病过程中的作用认识日益加深[5]。非编码RNA不编码成蛋白质,以其它方式发挥作用。长链非编码RNAs(Long non-coding RNAs)是指转录长度超过200个碱基对的nc RNA,在物种间保守性不高,通过多种途径调控基因的表达。Malat1是一个在哺乳动物中高度保守存在的Lnc RNA,最初在关于非小细胞肺癌的筛选性研究中被发现。之后发现几乎所有的肿瘤细胞中Malat1均有高表达,大量肿瘤学研究表明Malat1对多种肿瘤细胞具有促侵袭和促转移作用。Malat1在成骨细胞增殖,骨肉瘤增殖侵袭等方面具有促进作用,这些研究表明在骨骼中,Malat1可能发挥一定的作用,但其在软骨细胞中有无作用尚不清楚,在软骨发育过程中发挥重要作用的FGF信号是否与Malat1有联系目前也不清楚。本实验室在FGF信号通路对软骨的调控方面做了很多研究,积累了良好的基础。关于FGF信号通路所影响的下游蛋白分子已有很多研究,但在软骨组织中FGF信号通路是否通过影响非蛋白类分子,比如Lnc RNAs,从而发挥其对软骨细胞的调控作用,尚不十分清楚。因此我们首先以小鼠原代软骨细胞,小鼠软骨前体细胞系ATDC5,人类正常软骨细胞C28I2作为细胞模型,检测了Malat1在软骨细胞中的基础表达水平,我们的结果表明Malat1在小鼠和人的软骨细胞中均呈现高丰度表达,这样高的基础水平提示Malat1在软骨细胞中可能发挥着重要的生物学功能。因此在本课题中,我们利用小片段干扰RNA技术干扰了Malat1的表达水平,初步研究Malat1对软骨细胞的作用。为了探究FGF信号通路是否调控Malat1的表达,我们进一步利用重组FGF2结合相关通路阻断剂处理小鼠原代软骨细胞,小鼠及人类软骨细胞系模型,探讨了FGF2信号通路是否可以通过调控Malat1的表达调节软骨细胞增殖。主要实验方法:***1在软骨细胞中的基础表达水平1.1分离C57小鼠新生幼崽(日龄3日)原代软骨,接种培养48h后提取RNA,利用q PCR检测Malat1的表达水平。1.2培养小鼠成纤维细胞系NIH3T3,小鼠软骨前体细胞系ATDC5,人正常软骨细胞系C28I2,以及人骨肉瘤细胞系SW1353,24h及48h后提取RNA并检测Malat1的表达水平。***1对ATDC5软骨细胞系增殖的影响2.1设计数条针对小鼠Malat1基因的si RNA并通过荧光指示剂和q PCR筛选出最有效的si RNA。2.2将si RNA转染至ATDC5细胞并通过细胞计数研究Malat1敲减对ATDC5细胞增殖速度的影响。***2对软骨细胞中Malat1表达水平的影响3.1用FGF2处理C57小鼠原代软骨细胞,及ATDC5细胞,在处理后不同时间点提取RNA,q PCR测定Malat1的表达水平,以未处理组作为对照组。3.2用ERK通路抑制剂U0126单独或与FGF2共同处理ATDC5细胞,在处理后24h收取RNA,q PCR检测Malat1的表达水平,以未处理组作为对照组。3.3从本科室保育的β-catenin小鼠中分离原代软骨细胞并培养,48h后收取细胞并提取RNA,q PCR检测Malat1表达水平的变化,以未敲除组作为对照组。3.4从本科室保育的FGFR1 Col2阳性细胞特异性敲除小鼠及FGFR3系统性敲除小鼠中分离原代软骨细胞并培养,48h后收取细胞并提取RNA,q PCR检测Malat1表达水平的变化,以同窝未敲除幼崽作为对照组。3.5设计针对Fgfr1的si RNA,并构建和制备My

关键词：软骨细胞长链非编码RNA FGF信号细胞增殖

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特大型多绳提升机摩擦轮的加工技术

矿山机械 2012年第3期40卷 128-129页

作者：张翠桃郭静远洛阳矿山机械工程设计研究院有限责任公司河南洛阳471039 矿山重型装备国家重点实验室(中信重工机械股份有限公司)

矿井提升机广泛用于煤炭与金属矿山开采行业,承担着人员、矿物、材料和设备的提升任务。提升机的技术性能直接影响到矿山的生产效率和矿工的生命安全。中信重工机械股份有限公司研制了多种大型提升机（滚筒直径4.5m以上）,其提升能力和... 详细信息

矿井提升机广泛用于煤炭与金属矿山开采行业,承担着人员、矿物、材料和设备的提升任务。提升机的技术性能直接影响到矿山的生产效率和矿工的生命安全。中信重工机械股份有限公司研制了多种大型提升机（滚筒直径4.5m以上）,其提升能力和结构尺寸目前在国内都是最大的,

关键词：多绳提升机加工技术摩擦轮特大型矿山开采矿井提升机生命安全生产效率

金刚砂辅助农杆菌转化狗尾草种子高效遗传转化体系的建立

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分子植物育种 2017年第12期15卷 4955-4960页

作者：赵辉郭静远孔华郭安平中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口571101

狗尾草(Setaria viridis)是研究C4植物光合作用的优秀模型,同时也是研究非生物胁迫耐受性和生物能源原料的模型。经济、简单、灵活、快速、高效的转基因技术是模式植物应用发展的基础,本研究直接以狗尾草成熟种子为外植体,经过种子活化... 详细信息

狗尾草(Setaria viridis)是研究C4植物光合作用的优秀模型,同时也是研究非生物胁迫耐受性和生物能源原料的模型。经济、简单、灵活、快速、高效的转基因技术是模式植物应用发展的基础,本研究直接以狗尾草成熟种子为外植体,经过种子活化、金刚砂辅助农杆菌转化、抗性愈伤或丛生芽诱导、成苗、生根等基本过程,建立了一套新的狗尾草组织培养农杆菌转化技术,是国内外直接利用狗尾草活化种子进行农杆菌转化的初次报道。新的转化技术转化周期缩短为9~10周,转化效率A10达19.2%,ME34达22.2%,该方法对狗尾草品系的依赖性小,更适于难以利用已有方法建立转化体系的品系或野生种的转化。

关键词：狗尾草遗传转化金刚砂农杆菌介导法

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南新村:幸福感带领大家共建田园城市

西部广播电视 2011年第7期32卷 52-57页

作者：郭静远阿杰不详

三星镇位于双流县,紧靠龙泉山脉,镇域深丘浅丘各半,面积39.7平方公里,人口21万人,辖6村1社区,属于典型的丘区农业镇。近年来,该镇按照成都市市委"城乡统筹、四位一体"科学发展总体战备以及成都建设世界现代田园城市的历史定位和长远目标... 详细信息

三星镇位于双流县,紧靠龙泉山脉,镇域深丘浅丘各半,面积39.7平方公里,人口21万人,辖6村1社区,属于典型的丘区农业镇。近年来,该镇按照成都市市委"城乡统筹、四位一体"科学发展总体战备以及成都建设世界现代田园城市的历史定位和长远目标,围绕双流县建设"空港现代田园大城市"发展思路,以实施农村"四大基础工程"为突破点,以构建现代产业体系为支撑,以综合示范为引领,以机制创新为动力,全力推进社会主义新农村综合体建设,城乡一体化进程不断加快,镇域经济社会和谐发展。

关键词：田园城市社会主义新农村城乡一体化城乡统筹科学发展四位一体基础工程产业体系

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用虔诚的信仰创造艺术

西部广播电视 2012年第5期33卷 120-130页

作者：郭静远阿杰不详

1980年后,万启仁在绘画上开始做许多艺术家曾经做过的尝试:"中西绘画技艺的合璧"。他希望能创造出一种全新的画风,能更多地体现出中国古典而神秘的美。为了在艺术上追求神秘的东方和开放的西方珠联璧合的创作,万启仁潜心研究中国古书和... 详细信息

1980年后,万启仁在绘画上开始做许多艺术家曾经做过的尝试:"中西绘画技艺的合璧"。他希望能创造出一种全新的画风,能更多地体现出中国古典而神秘的美。为了在艺术上追求神秘的东方和开放的西方珠联璧合的创作,万启仁潜心研究中国古书和古典书画艺术,他的目的是把东方艺术的神韵带进他的油画艺术世界。

关键词：艺术家书画艺术绘画古典中国东方油画

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职业女性的养生之道

西部广播电视 2011年第8期32卷 130-134页

作者：郭静远不详

随着经济的发展以及女性社会地位的提高,现代职业女性已经成为各行各业中不可或缺的一部分。而且现在的职业女性往往肩负着比男性更多的责任,家庭、工作、生活都是她们必须兼顾的。常言道女人是水做的,可是生存的压力让如水的女人为了... 详细信息

随着经济的发展以及女性社会地位的提高,现代职业女性已经成为各行各业中不可或缺的一部分。而且现在的职业女性往往肩负着比男性更多的责任,家庭、工作、生活都是她们必须兼顾的。常言道女人是水做的,可是生存的压力让如水的女人为了在这个弱肉强食的快节奏的现代社会里不得不拼尽全力跟男人分一杯羹。

关键词：职业女性养生之道社会女人家庭生活羹肉

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陈小平:工作得到认可是最大的幸福

西部广播电视 2011年第6期32卷 50-55页

作者：郭静远阿杰

从一个部队的炊事班班长到四川广播电视台的高级记者;从前线的战士到四川广播电视台的新闻部门主任,经历过许多次的出生入死。回想起来这些年的酸甜苦辣,四川广播电视台新闻中心副主任陈小平的脸上浮现出一丝坚毅的微笑。正是部队的经... 详细信息

从一个部队的炊事班班长到四川广播电视台的高级记者;从前线的战士到四川广播电视台的新闻部门主任,经历过许多次的出生入死。回想起来这些年的酸甜苦辣,四川广播电视台新闻中心副主任陈小平的脸上浮现出一丝坚毅的微笑。正是部队的经历造就了他坚强、负责的个性。而因为他的不断上进,在走上新闻工作岗位的同时,又完成了研究生的学业。他的努力,正是我们现在很多年轻人所缺乏的东西。严谨、执着、认真,只因为这是他所热爱的事业。

关键词：时政新闻主任上前线广播电视台四川书记部队幸福