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腓动脉穿支跨区供血的腓肠神经营养血管逆行岛状皮瓣的解剖和临床应用

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中华整形外科杂志 2004年第1期20卷 24-26页

作者：杨大平方冬云郭铁芳韩雪峰哈尔滨医科大学第二附属医院整形外科 150086

目的　观察小腿皮肤腓浅动脉与腓动脉穿支之间的吻合联系 ,设计以腓动脉穿支为蒂的岛状皮瓣。方法　 10具新鲜尸体 2 0侧肢体血管灌注氧化铅—明胶混合液 ,通过X线片显示小腿皮肤内的血管结构和血管之间的吻合。在此基础上应用了跨区供... 详细信息

目的　观察小腿皮肤腓浅动脉与腓动脉穿支之间的吻合联系 ,设计以腓动脉穿支为蒂的岛状皮瓣。方法　 10具新鲜尸体 2 0侧肢体血管灌注氧化铅—明胶混合液 ,通过X线片显示小腿皮肤内的血管结构和血管之间的吻合。在此基础上应用了跨区供血的腓动脉穿支蒂逆行岛状皮瓣 2 6例。结果　解剖研究表明小腿腓肠神经营养血管主要来自腓浅动脉。在外踝后上方 4～ 7cm处腓动脉穿支与腓浅动脉或动脉网形成广泛吻合。以腓动脉穿支为蒂设计包含腓肠神经及其伴行的腓浅动脉和小隐静脉的返流岛状皮瓣 2 6例 ,皮瓣全部成活。结论　跨区供血的腓动脉穿支为蒂的岛状皮瓣 ,为修复小腿远端及足跟部软组织缺损提供了一种简单有效的方法。

关键词：腓动脉供血小腿临床应用吻合腓肠神经营养血管逆行岛状皮瓣皮肤解剖研究明胶混合液

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耳后皮瓣血管的显微外科解剖学基础

中国临床解剖学杂志 2002年第3期20卷 166-168页

作者：杨大平韩雪峰郭铁芳哈尔滨医科大学附属第二医院整形外科黑龙江哈尔滨150086

目的:研究颞浅动脉和耳后动脉之间的血管联系,以确定带不同血管蒂的耳后皮瓣的血供范围和皮瓣设计。方法:8具新鲜成人尸体经双侧颈总动脉灌注氧化铅-明胶混合液。掀起全层头皮和面部皮肤,将其展平摄X光片。结果:血管造影显示颞浅动脉和... 详细信息

目的:研究颞浅动脉和耳后动脉之间的血管联系,以确定带不同血管蒂的耳后皮瓣的血供范围和皮瓣设计。方法:8具新鲜成人尸体经双侧颈总动脉灌注氧化铅-明胶混合液。掀起全层头皮和面部皮肤,将其展平摄X光片。结果:血管造影显示颞浅动脉和耳后动脉之间存在两种类型的血管吻合:一种是耳后区直接吻合,即在耳廓后面上方皮肤内可见颞浅动脉和耳后动脉发出的耳支之间存在直接吻合;另一种是头皮区网状吻合,即在耳上方头皮内可见来自颞浅动脉顶支和耳后动脉终末支之间的网状吻合。结论:本文结果有助于外科医生了解颞浅动脉和耳后动脉之间的血管联系,对耳后皮瓣的设计和改进提供可靠的解剖学基础。

关键词：颞浅动脉耳后动脉耳后皮瓣血管吻合

软骨细胞与异体软骨微粒脱细胞基质体外相容性的研究

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中华医学杂志 2005年第27期85卷 1895-1898页

作者：韩雪峰杨大平郭铁芳方冬云徐学武张颖哈尔滨医科大学附属第二临床医学院整形外科 150086 哈尔滨医科大学附属第二临床医学院病理科 150086

目的探索以异体软骨微粒脱细胞基质为支架构建组织工程化软骨。方法多步骤酶法将绵羊关节软骨制成微粒脱细胞基质,行大体、光镜(苏木素伊红、胶原、甲苯胺蓝染色)、扫描电镜观察,同时测定微粒的胶原、氨基葡聚糖、DNA含量。异体绵羊关... 详细信息

目的探索以异体软骨微粒脱细胞基质为支架构建组织工程化软骨。方法多步骤酶法将绵羊关节软骨制成微粒脱细胞基质,行大体、光镜(苏木素伊红、胶原、甲苯胺蓝染色)、扫描电镜观察,同时测定微粒的胶原、氨基葡聚糖、DNA含量。异体绵羊关节软骨细胞分离、体外扩增,并与软骨微粒脱细胞基质混合体外培养0～35d,倒置显微镜及扫描、透射电镜观察,同时测定羟脯氨酸,氨基葡聚糖,DNA含量及细胞黏附率。结果软骨微粒脱细胞基质只含有基质成分,直径0.100～0.154mm,胶原,氨基葡聚糖及DNA含量分别为204.4±3.1μg/mg,18.3±2.0μg/mg和0.042±0.013μg/mg。异体软骨细胞紧紧围绕于异体软骨微粒脱细胞基质四周,二者形成的复合物中胶原、氨基葡聚糖及DNA含量于第7d与0d相比具有统计学意义(P<0.05),分别与14d(胶原、DNA)和21d(氨基葡聚糖)达高峰,随后维持在高水平。细胞黏附率为92%。结论软骨细胞与异体软骨微粒脱细胞基质有良好的生物相容性,为组织工程方法再造软骨提供又一支架材料。

关键词：脱细胞基质体外相容性微粒氨基葡聚糖 DNA含量组织工程化软骨苏木素-伊红甲苯胺蓝染色扫描电镜观察软骨细胞分离透射电镜观察异体软骨细胞组织工程方法同时测定倒置显微镜生物相容性关节软骨体外扩增体外培养

小隐静脉腓肠神经营养皮瓣在足踝创面的临床应用

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中国修复重建外科杂志 2005年第8期19卷 681-682页

作者：郭铁芳杨大平韩雪峰徐学武哈尔滨医科大学附属二医院整形外科哈尔滨150086

足跟和踝关节外伤所致软组织缺损并骨外露，以及烧伤所致踝关节瘢痕疙瘩。在临床卜并不少见。损伤多发生在承重、需要保护性感觉和活动量大的部位，是临床修复的难题之一。1999年～2004年，我科应用小隐静脉腓肠神经营养皮瓣修复踝关节... 详细信息

足跟和踝关节外伤所致软组织缺损并骨外露，以及烧伤所致踝关节瘢痕疙瘩。在临床卜并不少见。损伤多发生在承重、需要保护性感觉和活动量大的部位，是临床修复的难题之一。1999年～2004年，我科应用小隐静脉腓肠神经营养皮瓣修复踝关节及足跟软组织缺损并骨外露或烧伤后瘢痕9例，疗效满意。报告如下。[第一段]

关键词：小隐静脉腓肠神经皮瓣足跟踝关节创面修复

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兔软骨细胞与脱细胞软骨基质的生物相容性

中国临床康复 2006年第21期10卷 91-93,i0005页

作者：王冬艳杨大平关德宏韩雪峰郭铁芳哈尔滨医科大学附属第二医院整形手显微外科黑龙江省哈尔滨市150086

目的:将体外培养的兔软骨细胞种植到脱细胞软骨基质上,进行细胞形态学观察、细胞黏附及增殖活性的测定,检测制备的脱细胞软骨基质与软骨细胞的相容性,分析脱细胞软骨基质作为软骨组织工程支架的可能性。方法:实验于2005-03/09在哈尔滨... 详细信息

目的:将体外培养的兔软骨细胞种植到脱细胞软骨基质上,进行细胞形态学观察、细胞黏附及增殖活性的测定,检测制备的脱细胞软骨基质与软骨细胞的相容性,分析脱细胞软骨基质作为软骨组织工程支架的可能性。方法:实验于2005-03/09在哈尔滨医科大学附属第二医院科研中心完成。选取兔龄6个月的清洁级健康雄性日本大耳白兔,麻醉后无菌条件下显露兔双侧膝关节,切取股骨远端和胫骨近端关节软骨,经脱细胞处理制备成脱细胞软骨基质微粒作为软骨支架,并分离培养软骨细胞。将培养至第2代的软骨细胞用于实验,随机分为脱细胞基质组和空白对照组,每组复孔为6孔。脱细胞基质组将脱细胞基质颗粒单层铺满培养板孔底,接种软骨细胞。空白对照组单纯接种软骨细胞。倒置显微镜及扫描电镜观察软骨细胞与脱细胞软骨基质的黏附情况,通过四甲基偶氮唑盐法检测细胞接种2,6,12,24h细胞黏附性,测定细胞接种后1,3,5,7d时细胞的增殖活性,测定细胞培养1,2,3d时上清液中的羟脯氨酸含量。结果:①软骨细胞在脱细胞基质上黏附的形态学观察:扫描电镜观察脱细胞基质颗粒呈不规则多角形,软骨巢内的软骨细胞消失,表面粗糙不平。倒置相差显微镜下观察软骨细胞刚开始为小圆形,折光性较强,接种2h后有少量细胞开始黏附于脱细胞基质上,随时间的延长细胞黏附数量增加。②接种后不同时间点两组软骨细胞黏附情况的测定结果:与空白对照组比较,接种2h时脱细胞基质组软骨细胞黏附性明显降低(P0.05)。③接种后不同时间点两组软骨细胞增殖能力的比较:接种1,3,5,7d时,脱细胞基质组软骨细胞增殖活性分别高于空白对照组21.4%,32.7%,32.5%,25.4%,差异显著(P0.05)。接种第3天时,脱细胞基质组羟脯氨酸含量高于空白对照组20.28%,差异显著(P<0.05)。结论:实验制备的脱细胞软骨基质能够明显刺激增殖软骨细胞,且与软骨细胞具有良好的相容性,为组织工程支架的应用提供了新的材料。

关键词：生物医学工程组织学技术细胞外基质生物相容性材料

软骨微粒脱细胞基质微载体的制备及其特性研究

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中国临床康复 2004年第23期8卷 4710-4711,i001页

作者：韩雪峰杨大平郭铁芳方冬云张颖孟娟哈尔滨医科大学附属第二临床医学院整形外科黑龙江省哈尔滨市150086 哈尔滨医科大学附属第二临床医学院病理科黑龙江省哈尔滨市150086 哈尔滨医科大学附属第二临床医学院实验中心黑龙江省哈尔滨市150086

目的制备以软骨微粒脱细胞基质为原料的微载体,为体外大量培养软骨细胞提供实验依据。方法利用胰蛋白酶等试剂制备直径为0.100～0.154mm的软骨微粒脱细胞基质并寻找胰蛋白酶的最佳含量及时间。取绵羊的新鲜膝、肘关节软骨600g,随机分为5... 详细信息

目的制备以软骨微粒脱细胞基质为原料的微载体,为体外大量培养软骨细胞提供实验依据。方法利用胰蛋白酶等试剂制备直径为0.100～0.154mm的软骨微粒脱细胞基质并寻找胰蛋白酶的最佳含量及时间。取绵羊的新鲜膝、肘关节软骨600g,随机分为5组,每组8例,用不同含量的胰蛋白酶作用2～36h。标本进行大体观察,苏木精-伊红、胶原染色,光镜及扫描电镜观察,密度、含水量测定。结果微粒软骨脱细胞基质微载体无抗原性成分存在,主要含有胶原,氨基葡聚糖等混合细胞外基质成分。微粒呈不规则形,表面粗糙。软骨微粒脱细胞基质干重密度为0.6547g/mL,湿重密度为1.0627g/mL,含水量为72%。胰蛋白酶的最佳含量为0.25g/L,最适作用时间为(18.3±1.6)h。结论以软骨微粒为原料的微载体具有天然细胞外基质成分,是一种体外培养软骨细胞的良好载体。

关键词：软骨微粒体细胞培养

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预制作生物工程性肌骨瓣的实验研究

哈尔滨医科大学学报 2007年第4期41卷 327-329,332页

作者：徐学武郭铁芳韩雪峰杨大平哈尔滨医科大学第二临床医学院创伤整形外科黑龙江哈尔滨150081

目的探索用羟基磷灰石/磷酸三钙(HA/TCP)的支架材料与成骨细胞复合构成组织工程性肌骨瓣的方法,为修复骨缺损奠定基础。方法自2004年12月至2006年1月,将36只新西兰大耳白兔髂后上棘抽取骨髓基质干细胞并诱导分化为成骨细胞,与HA/TCP结... 详细信息

目的探索用羟基磷灰石/磷酸三钙(HA/TCP)的支架材料与成骨细胞复合构成组织工程性肌骨瓣的方法,为修复骨缺损奠定基础。方法自2004年12月至2006年1月,将36只新西兰大耳白兔髂后上棘抽取骨髓基质干细胞并诱导分化为成骨细胞,与HA/TCP结合培养2周,通过相差显微镜、扫描电镜观察体外细胞生长情况。将复合物埋入兔的背阔肌下构成组织工程性肌骨瓣。术后6周进行大体解剖观察,HE染色,研究组织工程性肌骨瓣的生长情况。结果扫描电镜显示支架材料表面和孔隙内均有成骨细胞生长,有良好的增殖活动性和稳定细胞表型,材料中心区未见细胞生长,植入体内6周后取材见内植物有新骨形成,多位于内植物表面,可见成骨细胞、骨细胞、髓腔样结构、板层样骨基质等正常骨组织结构。结论骨髓来源的成骨细胞可用作骨组织工程的种子细胞,与HA/TCP结合构建出组织工程性肌骨瓣。

关键词：骨髓基质干细胞羟基磷灰石/磷酸三钙肌骨瓣组织工程

血管组织工程中单根主动脉培养的内皮细胞和平滑肌细胞形态学和生长增殖

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中国临床康复 2003年第2期7卷 228-229,T003页

作者：郭铁芳杨大平韩雪峰杜金荣张颖孟娟哈尔滨医科大学第二临床医学院整形外科黑龙江省哈尔滨市150086 哈尔滨医科大学第二临床医学院病理科黑龙江省哈尔滨市150086 哈尔滨医科大学第二临床医学院科研科黑龙江省哈尔滨市150086

目的:探索体外培养及扩增同一来源内皮细胞和平滑肌细胞的有效方法,为研究内皮细胞和平滑肌细胞相互关系和体外构建组织工程血管提供理论和实践基础。方法:在体外用酶消化法和组织块贴壁法分别建立内皮细胞和平滑肌细胞的原代,并应用胰... 详细信息

目的:探索体外培养及扩增同一来源内皮细胞和平滑肌细胞的有效方法,为研究内皮细胞和平滑肌细胞相互关系和体外构建组织工程血管提供理论和实践基础。方法:在体外用酶消化法和组织块贴壁法分别建立内皮细胞和平滑肌细胞的原代,并应用胰蛋白酶和乙二胺四乙酸钠传代培养。应用光镜、透射电镜和细胞计数对内皮细胞和平附肌细胞的形态和增殖进行研究。结果:酶消化法和植块培养法可以有效的建立起内皮细胞和平滑肌细胞的原代。讨论:内皮细胞和平滑肌细胞作为血管构成的基本细胞,对于它们的形态学、体外培养和扩增以及相互关系的研究具有重要的意义。

关键词：血管组织工程主动脉内皮细胞平滑肌细胞形态学体外培养

利用脱细胞基质预构小口径组织工程血管的实验研究

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中华整形外科杂志 2008年第4期24卷 297-299页

作者：马辉杨大平郝晨光郭铁芳刘国锋黑龙江省省医院骨外二科哈尔滨150086 哈尔滨医科大学第二附属医院整形外科

目的在犬腹腔内预置脱细胞基质后形成结缔组织管，观察将其作为血管替代物的力学特征及移植于自体股动脉后的组织结构变化。方法在犬腹腔内埋置长8～12cm用硅胶棒支撑的制备好的脱细胞基质，3周后将硅胶棒周围形成的管状物作为血管替代... 详细信息

目的在犬腹腔内预置脱细胞基质后形成结缔组织管，观察将其作为血管替代物的力学特征及移植于自体股动脉后的组织结构变化。方法在犬腹腔内埋置长8～12cm用硅胶棒支撑的制备好的脱细胞基质，3周后将硅胶棒周围形成的管状物作为血管替代物移植于自体股动脉，同时对此管状物作力学、组织学检测及与颈动脉、股静脉的对比分析。在移植术后6个月观察血管通畅情况，光镜、透射及扫描电镜观察替代物的组织结构。结果①血管替代物的力学性能弱于正常动脉而强于正常静脉。②组织学观察：形成的管状物内腔有少量的间皮细胞黏附；弹性纤维、胶原纤维结构较完整；纤维网中充满成纤维母细胞。6个月后内皮细胞在替代物内壁覆盖连续。平滑肌细胞与对照组相近。③移植6个月后脱细胞基质组血管全部通畅。结论①用脱细胞基质预构的血管替代物力学性能符合血管移植、血运重建的需要。②所形成的血管替代物移植6个月后组织相容性良好，替代物管壁厚度及组织结构已接近正常血管。

关键词：脱细胞基质移植组织工程