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2018年浙江省病理技术学术年会

作者：郭志琴陆丽慧王振王伟唐正英汪静宇嘉兴市第一医院/嘉兴学院附属第一医院病理科

免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免...

免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。在临床病理诊断工作中,免疫组化检测是一种必不可少的技术手段,其染色结果是病理医师作出正确诊断和鉴别诊断的重要依据。免疫组化染色步骤较多,每一步操作不当都会影响染色结果,进而影响病理诊断的准确性。随着疾病的诊断与治疗的发展,个性化的精准医疗对免疫组化技术质量的稳定性提出了更高的要求。免疫组化技术的标准化、规范化成为其技术发展的必然趋势。由于免疫组化染色中影响抗原、抗体和免疫反应的因素很多,在进行免疫组化染色时,必须证实组织内显示的反应产物,确实是抗原与相应的特异性抗体反应所产生的。因此,在免疫组化染色过程中设立对照是进行免疫组化染色质量控制的重要措施之一,根据对照结果可以判断免疫组化操作步骤是否正确、使用试剂是否可靠,从而确保免疫组化技术最佳化和结果的有效性。目前,免疫组化检测常用的对照组主要有以下几种:一、阳性对照:用已证实含有待测抗原的组织,与待检标本做同样处理后,进行免疫组化染色,结果应为阳性,称为阳性对照。每次实验都应做阳性对照。阳性对照可证明靶抗原有一定活性;染色过程中各个步骤,所用的试剂以及检测试剂盒都符合标准;染色方法可靠。阳性对照组织的选择:选用已知的中等强度阳性或以上的正常组织或肿瘤组织(靶向治疗标记物如Her-2,最好同时选择强、中、弱三种阳性强度的组织),阳性对照组织与待测组织捞贴在同一组织切片上,保证实验条件一致。阳性对照组织的要求:作为阳性对照组织,组织处理必须及时,确保是10%中性甲醛溶液固定24小时,细胞形态保存良好,无自溶现象,免疫组化的阳性物质定位准确、清楚,无抗原弥散现象。二、阴性对照:用已知不存在待检抗原的组织切片染色,结果为阴性,称为阴性对照。阴性对照可证实组织内若不含靶抗原,就不应染色,可排除在染色过程中由于非特异性染色或交叉反应等因素造成的"假阳性"结果;验证抗原修复方法是否恰当,由于修复方法的不恰当(常常是过度修复),可导致阴性组织出现阳性表达(如突变型的p53在正常组织是不表达,若正常组织出现阳性表达,说明抗原修复方法不恰当或当抗原修复的时间及条件不是最佳)。阴性对照组织的选择:根据试剂说明书,选择该抗体不表达的组织作阴性对照组织。阴性对照组织与阳性对照组织和待测组织捞贴在同一切片上,保证实验条件一致。阴性对照组织处理要求:组织处理同阳性对照组织,免疫组化染色应为阴性。三、阴性试剂对照、阴性试剂对照的方法1.空白对照:是最常用的对照,用不加一抗的缓冲液,如PBS替代一抗,染色结果应为阴性,说明染色方法可靠(其他所有的实验条件与阳性对照及待测组织一样)。空白对照可排除组织的内源性过氧化物酶、碱性磷酸酶、自发荧光等物质引起的非特异性显色。2.替代对照:用与第一抗体来源的同种动物免疫前血清代替一抗,以相同的稀释倍数进行对照染色,结果为阴性(其他所有的实验条件与阳性对照及待测组织一样)。替代对照可证明待检切片中阳性结果不是抗体以外混杂的血清成分所致,而是所用特异性抗体与组织细胞内待检抗原的特异性反应的结果。但使用的商品化抗体往往不能用同一种动物的免疫前血清做替代对照,也可用未经免疫的同种动物血清,即非免疫血清替代一抗。3.吸收试验对照:用过量已知相应的纯化抗原与第一抗体反应,抗体结合点全部被抗原结合,这种被抗原吸收的抗体不能再与组织内的抗原反应,故再做免疫组化染色时,结果应为阴性。4.抑制对照:用未标记的抗体先和相应的抗原结合,其他步骤不变,染色结果应为阴性。四、组织自身对照:许多待测的抗体在待测的组织切片上有相应的阳性内对照成分。目前认为内对照是最佳的对照类型,因为其存在于待检患者组织中,真正做到了待检组织和对照组织在相同条件下进行检测分析。因此,专家建议在解释免疫组化结果之前必须寻找并评价可能存在的阳性内对照。如Actin、CD34在正常组织中的血管壁肌层应为阳性,Vimentin以间质细胞为对照,S-100蛋白以小神经末梢为对照等。阳性内对照成分阳性表达,说明免疫组化染色步骤正确及试剂质量保证。若阳性内对照出现阴性,可能的原因有:①抗原修复达不到要求(包括修复的时间、温度);②抗原修复液选择不正确,修复液的pH及化学成分对免疫组化染色结果影响比较大,如适合用pH9.0的修复液修复的的抗体而用了pH6.0的抗原修复液,可能会出现染色结果不理想,甚至出现假阴性(如Bcl6);③一抗与检测试剂盒不匹配(如一抗为兔抗人的CD3,二抗应选羊抗兔的Ig;若选

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乳腺癌SKP2及Thr187磷酸化p27kip1的表达及其预后意义

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中华病理学杂志 2013年第3期42卷 197-198页

作者：郭志琴吕青山张燕萍王振唐正英张怡王伟杨宏杰陆宁温晓伟陈彩萍邬万新浙江省嘉兴市第一医院病理科

p27(简称p27)是由Polyak等发现的一种相对分子质量为27 000的热稳定蛋白,是重要的细胞周期负性调控因子,其蛋白水平的表达及功能异常与肿瘤的发生、发展及预后密切相关。肿瘤细胞中存在多种转录后调控机制调节p27蛋白的表达,磷酸化调节... 详细信息

p27(简称p27)是由Polyak等发现的一种相对分子质量为27 000的热稳定蛋白,是重要的细胞周期负性调控因子,其蛋白水平的表达及功能异常与肿瘤的发生、发展及预后密切相关。肿瘤细胞中存在多种转录后调控机制调节p27蛋白的表达,磷酸化调节是最重要的途径之一。

关键词： p27kip1 乳腺癌磷酸化

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结直肠癌组织中Thr187磷酸化p27^(kip1)的表达及临床意义

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浙江医学 2015年第16期37卷 1375-1379页

作者：郭志琴吕青山袁琳娜张燕萍邬万新嘉兴市第一医院病理科 314000 嘉兴市第一医院检验科 314000

目的探讨第187位苏氨酸(Thr187)磷酸化的细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白(p27^(kip1),简称p27)(P-p27Thr187)在结直肠癌发生、发展中的作用及其与结直肠癌临床病理特征的关系。方法收集行手术切除的80例结直肠癌组织标本,以及6对新鲜结直... 详细信息

目的探讨第187位苏氨酸(Thr187)磷酸化的细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白(p27^(kip1),简称p27)(P-p27Thr187)在结直肠癌发生、发展中的作用及其与结直肠癌临床病理特征的关系。方法收集行手术切除的80例结直肠癌组织标本,以及6对新鲜结直肠癌和相应癌旁正常组织标本;采用免疫组织化学EnVision二步法和蛋白质印迹法检测结直肠癌组织及相应癌旁正常组织中P-p27Thr187和p27的表达;并分析其与结直肠癌临床病理特征的关系。结果免疫组织化学和蛋白质印迹结果均显示,P-p27Thr187在结直肠癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常组织;结直肠癌组织中P-p27Thr187阳性表达率为100.0%(80/80),高表达者52例(65.0%,52/80),低表达者28例(35.0%,28/80);而癌旁正常组织中P-p27Thr187阳性表达率为13.8%(11/80),与结直肠癌组织比较差异有统计学意义(P<0.05);p27在结直肠癌组织中的阳性表达率为48.8%(39/80),癌旁正常组织中为90.0%(72/80),两组比较差异有统计学意义(P<0.05);P-p27Thr187阳性表达与肿瘤细胞分化程度和TNM分期有关(均P<0.05);P-p27Thr187表达强度与细胞增殖指标Ki-67表达强度呈正相关(r=0.487,P<0.05),与p27表达强度呈负相关(r=-0.394,P<0.05)。结论结直肠癌组织中P-p27Thr187的异常表达可能参与了结直肠癌的发生、发展过程,其有助于综合评估结直肠癌的生物学行为,对结直肠癌的预后判断及诊治具有一定的参考价值。

关键词：结直肠肿瘤 p27kip1 磷酸化临床病理特征

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Jab1蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义

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浙江实用医学 2017年第1期22卷 23-25,28页

作者：郭志琴吕青山王振陆丽慧张琳邬万新嘉兴市第一医院浙江嘉兴314000

目的研究c-Jun激活区结合蛋白1(Jab1)在乳腺癌组织中的表达,探讨其在乳腺癌发生发展中的作用以及与p27^(kip1)的相关性。方法回顾性收集111例乳腺癌及癌旁组织标本,采用免疫组织化学En Vision二步法检测乳腺癌及相应癌旁组织中Jab1蛋白... 详细信息

目的研究c-Jun激活区结合蛋白1(Jab1)在乳腺癌组织中的表达,探讨其在乳腺癌发生发展中的作用以及与p27^(kip1)的相关性。方法回顾性收集111例乳腺癌及癌旁组织标本,采用免疫组织化学En Vision二步法检测乳腺癌及相应癌旁组织中Jab1蛋白的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果本组乳腺癌组织中Jab1蛋白阳性表达率为92.8%(103/111),而癌旁组织中Jabl蛋白阳性表达率为10.8%(12/111),两者差异有统计学意义(P0.05),而与肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期有关(均P<0.01);Jab1蛋白阳性表达与p27^(kip1)表达呈显著负相关(r=-0.528,P<0.01)。结论 Jab1蛋白的异常表达可能参与了乳腺癌的发生发展,检测Jab1蛋白有助于乳腺癌的临床诊断。

关键词：乳腺癌 c-Jun激活区结合蛋白1 p27kip1 病理

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更年期后女性代谢综合征患者AR基因(CAG)n多态性的研究

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中国医药导刊 2008年第2期10卷 264-267页

作者：郭志琴李小鹰曹剑刘建伟朱冰坡丁宇石海燕解放军总医院老年心血管一科北京100853 解放军总医院老年医学研究所分子生物实验室北京100853

目的:研究更年期后女性代谢综合征患者雄激素受体基因(CAG)n重复序列多态性。方法:使用DNA测序方法对150例更年期后健康女性和代谢综合征患者AR基因外显子1 NH2端转录调节区内(CAG)n重复序列长度进行测定。结果:1.健康女性AR基因(CAG)n... 详细信息

目的:研究更年期后女性代谢综合征患者雄激素受体基因(CAG)n重复序列多态性。方法:使用DNA测序方法对150例更年期后健康女性和代谢综合征患者AR基因外显子1 NH2端转录调节区内(CAG)n重复序列长度进行测定。结果:1.健康女性AR基因(CAG)n重复数最短为18,最长为34,平均值为23.34±2.44;2.代谢综合征女性AR基因(CAG)n重复数最短为8,最长为29,重复数平均值为22.29±2.82;3.代谢综合征组(CAG)n重复数与健康女性组之间(CAG)n重复序列多态性有差异(P=0.030)。结论:1.更年期后女性AR基因(CAG)n重复序列长度存在多态性;2.更年期后女性代谢综合征组AR基因外显子INH2转录调节区(CAG)n的重复数小于健康对照组。

关键词：雄激素受体基因 (CAG)n重复序列多态更年期后女性代谢综合征

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几种常用的核染色标记物pH 6.0 Citrate和pH 9.0 Tris/EDTA修复液的比较

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浙江创伤外科 2013年第3期18卷 315-317页

作者：张燕萍郭志琴唐正英王振张怡邬万新浙江省嘉兴市第一医院嘉兴314000

目的探讨pH 6.0 Citrate和pH 9.0 Tris/EDTA两种修复液在常用的免疫组化核染色标记物中的染色效果。方法选取本科室常用的3种核/浆标记抗体以及22种核标记抗体分别采用pH 6.0 Citrate和pH 9.0 Tris/EDTA微波热修复进行比较。结果在25种... 详细信息

目的探讨pH 6.0 Citrate和pH 9.0 Tris/EDTA两种修复液在常用的免疫组化核染色标记物中的染色效果。方法选取本科室常用的3种核/浆标记抗体以及22种核标记抗体分别采用pH 6.0 Citrate和pH 9.0 Tris/EDTA微波热修复进行比较。结果在25种抗体中,其中有11种分别用pH 6.0 Citrate和pH 9.0 Tris/EDTA微波修复染色效果基本一致,在其余14种抗体中,有11种用pH 9.0 Tris/EDTA微波热修复方法进行修复时,阳性信号明显增强;而有3种抗体用pH 6.0 Citrate微波热修复方法进行修复时,阳性信号稍增强。结论对于这25种抗体来说,如果用微波加热的方法进行抗原修复,那么pH 9.0 Tris/EDTA优于PH 6.0 Citrate。

关键词：抗原修复技术 pH 6 0 Citrate pH 9 0 Tris EDTA 核染色标记物

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Lgr5和β-catenin蛋白在胃癌组织中的表达

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中国现代医生 2019年第4期57卷 1-5页

作者：侯震涛冀子中邬万新袁琳娜郭志琴蚌埠医学院安徽蚌埠233000 浙江省嘉兴市第一医院浙江嘉兴314001

目的探究胃癌组织中Lgr5和β-catenin蛋白表达的差别及相关性。方法选择2012年1月～2017年12月间嘉兴市第一医院80例胃癌患者组织病理标本作为观察组,30例浅表性胃炎患者组织病理标本和30例萎缩性胃炎患者组织病理标本分别作为对照组,... 详细信息

目的探究胃癌组织中Lgr5和β-catenin蛋白表达的差别及相关性。方法选择2012年1月～2017年12月间嘉兴市第一医院80例胃癌患者组织病理标本作为观察组,30例浅表性胃炎患者组织病理标本和30例萎缩性胃炎患者组织病理标本分别作为对照组,采用免疫组化法检测Lgr5和β-catenin蛋白的表达。结果 Lgr5和β-catenin蛋白在观察组中的表达率高于对照组,三者之间存在显著差异(χ2=12.937、13.654,P均<0.05)。Lgr5蛋白在胃癌中的表达与患者的组织分化程度及患者的肿瘤TNM分期存在明显相关性(P均<0.05);β-catenin蛋白在胃癌中的表达与患者是否存在淋巴结转移以及患者的肿瘤TNM分期存在明显相关性(P均<0.05)。同时,在胃癌组织中,Lgr5和β-catenin蛋白的表达呈明显相关性(rp=0.226,P=0.038)。结论在胃癌的发生发展过程中,Lgr5和β-catenin蛋白发挥着重要作用,二者的检测对于胃癌的靶向诊疗意义重大。

关键词： Wnt信号通路胃癌 Lgr5 β-catenin

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基于雄激素受体构建三阴性乳腺癌预后模型

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浙江临床医学 2021年第1期23卷 11-14页

作者：陆翔陈彩萍邬万新郭志琴韩超薛丽嘉兴学院附属医院 314001

目的三阴性乳腺癌(TNBC)属于异质性疾病,TNM分期难以准确预测其预后。通过对雄激素受体(AR)在TNBC中的表达分析,构建了一种新的预后模型。方法回顾性纳入176例TNBC患者的肿瘤标本,免疫组化检测AR染色强度和AR阳性细胞占比,以两者评分的... 详细信息

目的三阴性乳腺癌(TNBC)属于异质性疾病,TNM分期难以准确预测其预后。通过对雄激素受体(AR)在TNBC中的表达分析,构建了一种新的预后模型。方法回顾性纳入176例TNBC患者的肿瘤标本,免疫组化检测AR染色强度和AR阳性细胞占比,以两者评分的乘积(简称:AR乘积)作为AR结果。对患者进行随访,分析AR与预后的关系,根据COX回归分析结果构建预后指数(PI):PI=风险系数1X变量1+风险系数2×变量2+……+风险系数n×变量n,绘制生存风险的列线图。结果AR乘积:0分103例、1分15例、2分17例、3分1例、4分9例、6分10例、9分21例。AR乘积与年龄、病理学类型、组织学分级、Ki-67、TNM有关。TNM和AR乘积是无病生存率(DFS)的独立影响因素。PI=-0.535XAR乘积+BTNM。计算每个患者的PI并分组:低风险组(PI<-3,45例)、中风险组(-3≤PI<0、114例)、高风险组(PI≥0、17例)。三组间DFS、总生存率(OS)差异均有统计学意义。绘制列线图预测3年、5年DFS,其C指数为0.719,校正曲线捉示预测值和实际结果间基本重合,提示该列线图有较好的预测能力。结论AR阳性表达预示TNBC患者更好的预后。利用AR和TNM可以构建TNBC患者的预后模型,能更:准确地预测其预后。

关键词：三阴性乳腺癌雄激素受体预后模型

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三阴型乳腺癌中CYP4A11和CYP4A22表达及其与M2型肿瘤相关巨噬细胞的关系

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临床与实验病理学杂志 2019年第3期35卷 263-267页

作者：何佳慧邬万新陈彩萍郭志琴王振陆宁温晓伟蚌埠医学院研究生院临床病理学专业蚌埠233000 嘉兴学院附属第一医院病理科嘉兴314000 嘉兴学院附属第一医院乳腺病科嘉兴314000

目的评价CYP4A11和CYP4A22在三阴型乳腺癌(triple-negative breast carcinoma,TNBC)中的表达及其与临床病理特征以及M2型肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)的关系。方法收集72例TNBC根治病例及其临床病理资料,采用免疫组化和图像分析方法检测癌组织中CYP4A11和CYP4A22的表达以及肿瘤间质中巨噬细胞CD68和CD163的表达,分析CYP4A11和CYP4A22表达与TNBC临床病理特征以及M2型TAMs数量的关系。结果 TNBC癌组织中CYP4A11和CYP4A22的表达均较正常乳腺组织增高(P均<0. 001)。CYP4A11高表达与肿瘤直径增大(P <0. 001)、淋巴结转移(P <0. 001)、高临床分期(P <0. 001)和高Ki-67增殖指数(P=0. 011)有关。CYP4A11高表达组的肿瘤间质CD68和CD163阳性细胞比例均较低表达组增高(P=0. 021、P <0. 001)。癌组织CYP4A22高表达与淋巴结转移(P <0. 001)、高临床分期(P=0. 006)、高复发率(P <0. 001)和高Ki-67增殖指数(P=0. 040)有关。CYP4A22高表达组的肿瘤间质CD163阳性细胞比例较低表达组增高(P <0. 001)。结论 TNBC中CYP4A11和CYP4A22高表达均伴随肿瘤间质微环境中M2状态TAMs增加,并与癌细胞高增殖活性和转移相关。

关键词：乳腺肿瘤 CYP4A11 CYP4A22 免疫组织化学

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肾交感神经消融对慢性心力衰竭大鼠线粒体功能的影响

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中国医药科学 2023年第11期13卷 26-29页

作者：罗仪山郭志琴刘真李韶南陈平安广州市第一人民医院急诊科广东广州510180 广州市第一人民医院心内科广东广州510180 广州市番禺区中心医院心内科广东广州511400

目的探究化学消融肾交感神经(RDN)对腹主动脉缩窄心力衰竭(简称“心衰”)大鼠心肌细胞线粒体功能的影响。方法采用腹主动脉缩窄法(TAC)建立大鼠慢性心衰模型,将心衰大鼠分为心衰组(n=3,暴露双侧肾动脉但不消融肾交感神经),RDN组(n=3,RDN... 详细信息

目的探究化学消融肾交感神经(RDN)对腹主动脉缩窄心力衰竭(简称“心衰”)大鼠心肌细胞线粒体功能的影响。方法采用腹主动脉缩窄法(TAC)建立大鼠慢性心衰模型,将心衰大鼠分为心衰组(n=3,暴露双侧肾动脉但不消融肾交感神经),RDN组(n=3,RDN术8周后腹腔注射生理盐水),Nogo-B组(n=4,RDN术8周后腹腔注射Nogo-B),NEP组(n=3,RDN术8周后腹腔注射NEP-40)。对肾动脉行HE染色并检测各组大鼠心肌细胞ATP含量及Tom-20表达量。结果与心衰组比较,RDN后大鼠肾动脉外膜神经纤维明显减少。RDN后各注药组肾动脉周围神经纤维数目由多到少依次为:NEP组、RDN组、Nogo-B组;RDN、Nogo-B及NEP组大鼠ATP浓度及Tom-20相对表达量均较心衰组大鼠升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论RDN可以改善心衰大鼠心肌细胞线粒体功能。

关键词：心力衰竭肾交感神经消融心肌细胞线粒体

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