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基于生物质谱的蛋白质组学分析大西洋鲑中生物标志性肽段及过敏原特异性肽段

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理化检验（化学分册） 2023年第1期59卷 1-12页

作者：罗娇依郑越男刘彤彤曹进郭亚辉孙姗姗中国食品药品检定研究院国家市场监管重点实验室(食品质量与安全) 北京100050 松滋市公共检验检测中心松滋434200 江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室无锡214122

基于蛋白质组学自下而上研究策略,采用纳升液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用法(Nano-UHPLC-Q/Exactive-HRMS)和超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)筛选、鉴定大西洋鲑中生物标志性肽段和过敏原β-小清蛋白特异性肽段,... 详细信息

基于蛋白质组学自下而上研究策略,采用纳升液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用法(Nano-UHPLC-Q/Exactive-HRMS)和超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)筛选、鉴定大西洋鲑中生物标志性肽段和过敏原β-小清蛋白特异性肽段,并提出了UHPLC-MS/MS测定其含量的方法。称取5 g处理好的样品,加入10 mL正己烷除脂,离心,于沉淀中加入5 mL磷酸盐缓冲溶液(提取剂),涡旋,于60℃水浴加热30 min,再用20 mL冷丙酮富集、纯化,得到的蛋白提取液经胰蛋白酶酶解后,采用Nano-UHPLC-Q/Exactive-HRMS初步筛选大西洋鲑生物标志性肽段与过敏原β-小清蛋白特异性肽段,用UHPLC-MS/MS对初筛的肽段进行多反应监测(MRM)模式验证。在酶解后的溶液中加入内标,采用UHPLC-MS/MS测定,内标法定量。结果显示:筛选出3条可用于定量的大西洋鲑生物标志性肽段VAVNVEETK、VAPLSEDFK、LTEIQSLER和1条过敏原β-小清蛋白特异性肽段TFFHTIGFASK;VAVNVEETK、VAPLSEDFK、LTEIQSLER标准曲线的线性范围在5.00μmol·L^(-1)以内,TFFHTIGFASK标准曲线的线性范围在10.00μmol·L^(-1)以内,检出限(3S/N)为0.32~1.55μg·g^(-1);空白样品中4条肽段的加标回收率为90.2%~105%,测定值的相对标准偏差(n=6)为1.5%~4.6%;方法用于测定大西洋鲑贮存过程中VAVNVEETK、VAPLSEDFK、LTEIQSLER、TFFHTIGFASK的含量,LTEIQSLER和TFFHTIGFASK含量没有发生明显变化,而VAVNVEETK和VAPLSEDFK含量随着贮存天数的延长逐渐降低,其中VAPLSEDFK适用于大西洋鲑新鲜度评价。

关键词：大西洋鲑生物标志性肽段 β-小清蛋白特异性肽段蛋白质组学

柱前衍生超高效液相色谱-串联质谱法测定三文鱼中9种生物胺

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食品安全质量检测学报 2021年第17期12卷 6909-6917页

作者：罗娇依郑越男刘彤彤郭亚辉曹进孙姗姗中国食品药品检定研究院北京100050 江南大学食品科学与技术国家重点实验室无锡214122

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测三文鱼中9种生物胺(β-苯乙胺、组胺、腐胺、尸胺、酪胺、色胺、精胺、亚精胺、去甲基肾上腺素)的分析方法。方... 详细信息

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测三文鱼中9种生物胺(β-苯乙胺、组胺、腐胺、尸胺、酪胺、色胺、精胺、亚精胺、去甲基肾上腺素)的分析方法。方法样品经过5%三氯乙酸提取、正己烷除脂、丹磺酰氯丙酮溶液衍生化后,经BEH Shield RP18柱(2.1 mm×150 mm,1.7μm)分离,以0.1%甲酸的50%乙腈水溶液和乙腈作为流动相,采用电喷雾正离子(electrosprary ionization,ESI+)扫描、多反应监测模式分析。结果9种生物胺分别在0~0.3 mg/L范围内线性良好,相关系数r>0.996;β-苯乙胺、色胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、亚精胺、精胺、去甲基肾上腺素的平均回收率范围为82.43%~95.30%,检出限依次为0.0605、0.0822、0.0915、0.0244、0.0871、0.1510、0.0744、0.0348、0.0750μg/g。结论本方法结合了衍生化反应和超高效液相色谱-串联质谱法的优势。在实际样品检测中,前处理程序简化,方法灵敏度提高。此方法的目标物分离性、稳定性和峰型良好,可对三文鱼复杂基质中生物胺进行快速、准确、稳定的定量、定性分析。

关键词：三文鱼生物胺柱前衍生超高效液相色谱-串联质谱法

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液相色谱质谱技术在食品掺假中的应用

食品安全质量检测学报 2019年第23期10卷 7953-7958页

作者：郑越男郭亚辉曹进钱和江南大学食品学院/食品科学与技术国家重点实验室无锡214122 中国食品药品检定研究院北京100050

食品欺诈是食品安全风险防控领域中的重要方面,其中食品掺假作为食品欺诈的一种类型,因其掺假物的种类性质、方式等不同往往可能带来或者引入食品安全问题。针对全球性食品掺假行为,本文综述了近年来液相色谱-质谱联用技术用于解决肉制... 详细信息

食品欺诈是食品安全风险防控领域中的重要方面,其中食品掺假作为食品欺诈的一种类型,因其掺假物的种类性质、方式等不同往往可能带来或者引入食品安全问题。针对全球性食品掺假行为,本文综述了近年来液相色谱-质谱联用技术用于解决肉制品、牛奶、食用植物油、蜂蜜4类食品掺假问题,总结了该4类食品的主要掺假行为,其中肉制品掺假分为地理来源改变、肉种类替代、添加剂非法使用、过敏原引入、病死畜禽肉;乳制品掺假主要有奶源产地改变、不同动物奶、添加富氮化合物、添加剂违规;植物油掺假主要有油种类混合、掺入不可食用油、植物油产地改变、添加工业染料;蜂蜜常见的掺假方式有蜂蜜产地、植物源、添加糖浆。对液相色谱-质谱鉴别食品真伪的前处理方法(液液萃取、固相萃取)也进行了总结,以期为液相色谱-质谱联用技术在食品真实性技术鉴别应用提供有益参考。

关键词：液相色谱-质谱食品掺假液液萃取固相萃取

液相色谱-串联质谱法测定三文鱼中生物胺的不确定度分析

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安徽农业科学 2021年第17期49卷 189-194页

作者：郑越男曹进孙珊珊郭亚辉罗娇依钱和江南大学食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122 中国食品药品检定研究院北京100050

[目的]评定液相色谱-串联质谱法测定三文鱼中生物胺的不确定度。[方法]样品经过5%三氯乙酸提取、正己烷除脂、丹磺酰氯丙酮溶液衍生化后,液相色谱-串联质谱分析三文鱼中9种生物胺的含量,对方法相对标准不确定度、标准不确定度、扩展不... 详细信息

[目的]评定液相色谱-串联质谱法测定三文鱼中生物胺的不确定度。[方法]样品经过5%三氯乙酸提取、正己烷除脂、丹磺酰氯丙酮溶液衍生化后,液相色谱-串联质谱分析三文鱼中9种生物胺的含量,对方法相对标准不确定度、标准不确定度、扩展不确定度进行评估。[结果]色胺、β-苯乙胺、腐胺、尸胺、酪胺、组胺、精胺、亚精胺、去甲基肾上腺素的平均值分别为4.30、5.59、5.72、6.21、4.85、5.48、7.18、6.79、4.77 mg/kg,扩展不确定度分别为0.46、0.56、0.48、0.54、0.42、0.50、0.64、0.55、0.41 mg/kg(k=2)。[结论]标准储备液的配制、稀释以及标准曲线的线性拟合对不确定度的贡献值最大,建议选用精度好的量器,规范试验操作与前处理步骤。

关键词：三文鱼生物胺液相色谱-串联质谱不确定度

冰鲜贮存条件下三文鱼蛋白质组变化差异的分析

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生物加工过程 2023年第1期21卷 107-118页

作者：孙姗姗梁瑞强罗娇依郑越男刘彤彤郭亚辉曹进张晓林中国食品药品检定研究院市场监督管理总局食品质量与安全重点实验室北京100050 江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122 大连海关技术中心辽宁大连116000

为探究三文鱼肌肉蛋白与新鲜度之间的联系,提供更多与新鲜度相关的检测指标,采用非标记定量(label free guantitation)技术对冰鲜4℃条件下不同贮存时间的三文鱼肌肉蛋白的变化情况进行评价。以冰鲜三文鱼到达实验室当日样品为对照组(贮... 详细信息

为探究三文鱼肌肉蛋白与新鲜度之间的联系,提供更多与新鲜度相关的检测指标,采用非标记定量(label free guantitation)技术对冰鲜4℃条件下不同贮存时间的三文鱼肌肉蛋白的变化情况进行评价。以冰鲜三文鱼到达实验室当日样品为对照组(贮存0 d),分别与贮存1、3、5、7、9和15 d的三文鱼进行比较,对差异蛋白进行生物信息学分析后,发现变化浮动较大的蛋白质主要集中在糖酵解/糖异生、碳代谢以及氨基酸的生物合成代谢途径。对不同时间比较组的差异蛋白进行综合分析,筛选出24个可能与三文鱼贮藏期间新鲜度品质变化相关的蛋白质,显著变化的蛋白质与糖代谢、肌肉收缩、蛋白骨架和能量代谢过程密切相关。通过生物胺指数(biogenic amine index,BAI)来对比腐败程度,发现其中6个蛋白质在贮存期间发生上调,18个蛋白发生下调,其中变化幅度较大的7个主要蛋白可作为新鲜度评价指标蛋白,分别为L-乳酸脱氢酶、肌钙蛋白T型、LDB3蛋白X-2亚型、LDB3蛋白、LDB3蛋白X-1亚型、肌联蛋白亚型和肌原调节蛋白。结果表明,这些差异蛋白可能与三文鱼新鲜度变化存在潜在联系,未来可以通过建立差异蛋白的定量色谱-质谱检测(LC-MS)方法辅助判断三文鱼新鲜度的变化。

关键词：三文鱼非标记定量新鲜度蛋白质组

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头颈开窗髂骨植骨联合干细胞移植治疗早期股骨头坏死的研究

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头颈开窗髂骨植骨联合干细胞移植治疗早期股骨头坏死的研究

作者：郑越河北医科大学

学位级别：硕士

背景：目前各种原因导致的股骨头坏死病多发，晚期因股骨头塌陷，或继发性骨关节炎，而导致关节疼痛、髋关节功能丧失，最后大部分人需要置换关节置换。早期如果能得到恰当的治疗，能延缓病情的进展。所以早期的治疗很关键，目前其治疗... 详细信息

背景：目前各种原因导致的股骨头坏死病多发，晚期因股骨头塌陷，或继发性骨关节炎，而导致关节疼痛、髋关节功能丧失，最后大部分人需要置换关节置换。早期如果能得到恰当的治疗，能延缓病情的进展。所以早期的治疗很关键，目前其治疗方法各异，但均不尽完善，如何采取更优化的方案，缓解症状、实现最大可能的保留股骨头、防止股骨头塌陷、保存髋关节功能，是骨科领域不断共同探索的课题。目的：观察头颈开窗减压自体髂骨移植联合自体外周血干细胞移植治疗早期股骨头坏死的近期疗效。方法：对我科2009年2月-2012年3月收治的成人股骨头坏死（早期）住院患者中随机抽取，治疗早期股骨头缺血性坏死21例（36髋）。男18例,女3例;单髋6例,双髋15例;年龄22～50岁，平均33.6岁;病史8个月年,平均1.4年。按ARCO分期标准:Ⅰ期7髋,Ⅱ期29髋。采用头颈开窗减压自体髂骨移植，联合自体外周血干细胞移植术治疗，1、自体外周血干细胞提取：由本院血液科完成，于PBSC单采前5d，皮下注射重组细胞集落刺激因子G-CSF2.5～5.0μg/（kg.d），1次/d，单采前计数外血中白细胞总数及分类，若白细胞总数未达到20×10～9/L，则延长动员时间，并适当增加动员剂的剂量，直至白细胞总数达20×10～9/L。血细胞分离机全血流速50～55ml/min，平均处理周围血5000ml，分离单个核细胞浓度达1～3×10～11/L，制成单个核细胞悬液备用。2开窗减压自体髂骨移植联合外周血干细胞移植术：凿断部分髂骨块，并将所取骨块剪碎至0.5×0.5×0.5cm小骨块浸泡于浓缩干细胞悬液中搅匀，将混合液体静置30分钟后干细胞缓慢均匀附着在上,于股骨头颈交界处开窗约1.5×1.5cm大小，用骨凿探入股骨窗内,完全凿除已坏死的硬化骨质,并用刮匙彻底清除，将已混着自体干细胞的髂骨小碎块置入镶嵌于股骨头空窗内加压打实，将开窗骨片回置于骨窗口。3术后处理：患者术后第2天开始无负重于床上使髋关节活动，术后3个月内禁止患肢负重或下地，3个月后在双拐扶行下部分负重下地活动，1年内不去拐。服用促进股骨头坏死愈合药物半年至1年.介时回访，根据术前术后症状、X线及影像学结果、髋关节功能Harris评分，分析其疗效。同时观察患者术后相关并发症，股骨头修复情况，以及有无塌陷综合加以分析，进行评价。采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析，对所有患者术前、后的Harris评分进行自身配对t检验。结果:观察随访的股骨头坏死患者21例36髋，结果分析时全部纳入，无一脱落。随访时间1-4年，根据髋关节Harris评分标准[3]对随访的21例（36髋）从疼痛程度、关节功能、活动范围等方面进行评定并予以评分。其中29髋疼痛消失,活动自如，疗效为优;6髋病情缓解,疗效为良;1髋病情加重,疗效为差。优良率为97.2%（35/36）。影像学显示：36髋中31髋有不同程度的改善，6髋无明显变化，1髋失败，股骨头塌陷且关节间隙变窄。髋关节Harris评分由术前平均（44.9±5.6）分增至术后平均（90.5±5.1）分,差异有显著性统计学意义（P<0.05）。结论：头颈开窗减压病灶清除自体髂骨移植联合自体外周血干细胞移植术治疗早期股骨头坏死，能够缓解患者症状，延缓股骨头塌陷，尤其适合青壮年，该术式操作简单，安全，对人体无损害，成本较低，无与手术相关的合并症，而且修复比较快，是治疗成人早期股骨头缺血性坏死的一种有效方法。

关键词：早期股骨头缺血性坏死治疗方法外周血干细胞移植髂骨植骨髋关节harris功能评分

以肝硬化为突出表现的糖原贮积病Ⅲa型患者足月妊娠1例

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中华围产医学杂志 2024年第5期27卷 421-425页

作者：彭亚茹刘鹏郑越月周启立郭艳巍承德医学院附属医院妇产科研究生院承德067000 宁夏医科大学总医院麻醉与围术期医学科研究生院银川750000 承德医学院附属医院新生儿科承德067000 承德医学院附属医院产科承德067000

本文报道了1例糖原贮积病Ⅲa型合并足月妊娠母儿结局的临床资料。该患者生后3个月以低血糖发病,静脉滴注葡萄糖注射液后缓解;19岁时因脊柱侧弯行手术治疗时发现肝硬化、脾脏肿大和血小板减少,肝穿刺检出肝脏组织中糖原脱支酶缺乏,临床... 详细信息

本文报道了1例糖原贮积病Ⅲa型合并足月妊娠母儿结局的临床资料。该患者生后3个月以低血糖发病,静脉滴注葡萄糖注射液后缓解;19岁时因脊柱侧弯行手术治疗时发现肝硬化、脾脏肿大和血小板减少,肝穿刺检出肝脏组织中糖原脱支酶缺乏,临床诊断糖原贮积病Ⅲ型(无基因型诊断)。此次因“孕34周+3,不规律下腹痛1 d”入院,经妊娠后期多学科管理,包括药物调整、饮食指导以及术前半小时及术中输注血小板,于孕37周+1剖宫产分娩一男婴,新生儿1、5、10 min Apgar评分分别为9、10、10分。产后患者高蛋白饮食,新生儿出生后出现低血糖,静脉滴注葡萄糖后恢复正常,监测母亲及新生儿血糖维持稳定。产妇产后经全外显子组测序检测为AGL基因复合杂合变异:染色体位置:chr1:100379102-100379103,基因变异信息:NM_000642.2:c.3971_3972delAT(***1324*);染色体位置:chr1:100345603,基因变异信息:NM_000642.2:c.1735+1G>T,诊断为糖原贮积病Ⅲa型。新生儿为AGL基因杂合变异:染色体位置:chr1:100379102-100379103,基因变异信息:NM_000642.2:c.3971_3972delAT(***1324*)。产后1和2个月随访患者血糖维持稳定,新生儿生长发育未见异常。

关键词：肝硬化糖原贮积病Ⅲa型血小板减少妊娠

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敢打敢拼，展现中国冰球健儿良好风貌

敢打敢拼，展现中国冰球健儿良好风貌

甘肃省回族、藏族、东乡族、土族大学生体质状况对比研究

齐齐哈尔日报

作者：郑越宋家兴

20日,2022年北京冬奥会圆满落幕,赛场上中国冰雪健儿奋力拼搏,挥洒汗水,不断超越自我,在冬奥舞台上绽放精彩。本届冬奥会,中国男子冰球队虽然无缘8强,但是对于首次踏上冬奥赛场的男冰队员来说,比赛的意义远大于成绩本身。四场比赛里,中... 详细信息

20日,2022年北京冬奥会圆满落幕,赛场上中国冰雪健儿奋力拼搏,挥洒汗水,不断超越自我,在冬奥舞台上绽放精彩。本届冬奥会,中国男子冰球队虽然无缘8强,但是对于首次踏上冬奥赛场的男冰队员来说,比赛的意义远大于成绩本身。四场比赛里,中国男冰先后对阵世界排名第四的美国队......

关键词：齐齐哈尔冰球队

来源： cnki报纸评论

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甘肃省回族、藏族、东乡族、土族大学生体质状况对比研究