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反义bcl-2寡核苷酸对体外培养的葡萄膜黑色素瘤细胞多药耐药性的影响

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中华眼科杂志 2003年第2期39卷 73-76页

作者：郭琳洁吴中耀张胜郑建樑郑湖玲中山大学中山眼科中心广州510060

目的　探讨体外培养的葡萄膜黑色素瘤细胞对不同化疗药物的敏感性 ,并通过反义bcl 2寡核苷酸 (bcl 2antisenseoligodeoxynucleotide ,bcl 2AS ODN)特异阻断bcl 2基因的表达逆转肿瘤耐药性。方法　原代培养葡萄膜黑色素瘤细胞 ,采用噻唑... 详细信息

目的　探讨体外培养的葡萄膜黑色素瘤细胞对不同化疗药物的敏感性 ,并通过反义bcl 2寡核苷酸 (bcl 2antisenseoligodeoxynucleotide ,bcl 2AS ODN)特异阻断bcl 2基因的表达逆转肿瘤耐药性。方法　原代培养葡萄膜黑色素瘤细胞 ,采用噻唑蓝染色法测定肿瘤细胞对不同浓度的 5 氟尿嘧啶、噻替哌、顺铂、阿霉素、长春新碱和氮烯咪胺体外敏感性 ;通过阳离子脂质体导入bcl 2AS ODN ,阻断bcl 2基因的表达 ,利用免疫组化及Westenblot法测定肿瘤细胞bcl 2的表达情况 ,并根据多药相互作用原理测定肿瘤细胞对化疗药物敏感性。结果　葡萄膜黑色素瘤对不同种类的化疗药物均有不同程度的抗药性。bcl 2AS ODN可明显抑制bcl 2基因的表达 ,并随浓度升高抑制作用增强。bcl 2AS ODN与各种化疗药物呈协同作用 ,能够增加化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用。结论　所选 6种化疗药物在临床常用剂量范围对葡萄膜黑色素瘤细胞毒性作用较小 ,葡萄膜黑色素瘤细胞的多药耐药性与bcl 2基因的高表达有关 ,bcl 2AS ODN能够部分逆转肿瘤细胞的多药耐药性。

关键词：葡萄膜肿瘤黑色素瘤多药抗药性反义寡核苷酸类肿瘤细胞培养

米非司酮对培养的人眼小梁细胞外纤维连接蛋白表达的影响

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中华眼科杂志 2002年第1期38卷 42-44,W002页

作者：李芙蓉叶天才王宁利郑湖玲中山医科大学中山眼科中心广州510060

目的　探讨糖皮质激素受体拮抗剂米非司酮对培养的人眼小梁细胞外纤维连接蛋白(fibronectin ,FN)表达的影响。方法　按组织块培养法进行人眼 (8只眼 )小梁细胞体外培养 ,在传 3代的小梁细胞培养液中分别先后加入不同浓度的地塞米松和米... 详细信息

目的　探讨糖皮质激素受体拮抗剂米非司酮对培养的人眼小梁细胞外纤维连接蛋白(fibronectin ,FN)表达的影响。方法　按组织块培养法进行人眼 (8只眼 )小梁细胞体外培养 ,在传 3代的小梁细胞培养液中分别先后加入不同浓度的地塞米松和米非司酮 ,应用免疫组织化学联合计算机图像分析的方法 ,检测细胞外染色区域的吸光度 (A值 )。结果　根据培养细胞的生长特性和形态特征及细胞外基质染色特点等 ,确定培养的细胞为人眼小梁细胞。含有不同浓度地塞米松和米非司酮的小梁细胞培养组与对照组比较 ,FN变化所对应的A值排列顺序为 :1 0 - 6 mol/L地塞米松 (1 2d) >1 0 - 7mol/L地塞米松 (1 2d) >1 0 - 7mol/L地塞米松 (5d) >对照组≈ 1 0 - 7mol/L地塞米松 (5d) +1 0 - 8mol/L米非司酮 (7d)。结论　地塞米松能促进体外培养的人眼小梁细胞分泌与合成FN(A值升高 ) ,米非司酮可在受体水平拮抗并逐步逆转地塞米松引起的小梁细胞外FN的过度表达 (A值下降 )。糖皮质激素受体 (glucocorticoidrecepter,GR)

关键词：米非司酮纤维连接蛋白青光眼小梁细胞降眼压机制

硫酸软骨素在深低温角膜保存中对内皮细胞的保护作用

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中国实用眼科杂志 1998年第2期16卷 95-98,I000页

作者：黄挺陈家祺郑湖玲中山医科大学中山眼科中心

为探讨硫酸软骨素（ＣＳ）对深低温保存角膜内皮细胞的保护作用及机理，将牛角膜分成对照组及实验组Ⅰ～Ⅴ，每组６只角膜。对照组用７５％二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）为抗冻剂，实验组Ⅰ～Ⅳ除用７５％ＤＭＳＯ外，还分别加用０５％... 详细信息

为探讨硫酸软骨素（ＣＳ）对深低温保存角膜内皮细胞的保护作用及机理，将牛角膜分成对照组及实验组Ⅰ～Ⅴ，每组６只角膜。对照组用７５％二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）为抗冻剂，实验组Ⅰ～Ⅳ除用７５％ＤＭＳＯ外，还分别加用０５％、２５％、５％及７５％ＣＳ，实验组Ⅴ抗冻剂仅有２５％ＣＳ，没有ＤＭＳＯ。采用程序降温法深低温保存角膜，复温后经组织培养６～８小时检测内皮细胞密度及存活率，测量角膜厚度。结果：抗冻剂中含２５％ＣＳ时，保存的角膜内皮细胞密度及存活率最高，且复温后角膜厚度恢复最快。但仅有２５％ＣＳ，没有ＤＭＳＯ时，保存的角膜看不见内皮细胞结构。经含２５％ＣＳ的抗冻剂保存的人角膜行穿透性角膜移植术后透明率高（５／６，８３３３％），但内皮细胞存活率（８１７％）较牛角膜内皮细胞存活率（９４４％）低。结论：ＣＳ能改善深低温保存的角膜内皮细胞活性。它虽不能代替ＤＭＳＯ，但可增强ＤＭＳＯ的抗冻效果。

关键词：角膜保存低温保存内皮细胞硫酸软骨素

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F_6H_8对兔角膜内皮细胞影响的研究

中华眼科杂志 2002年第4期38卷 239-241,T005页

作者：丁小燕李春芳吕林冯官光郑湖玲张国明中山大学中山眼科中心广州510060

目的　研究F6H8对角膜内皮细胞的影响。方法　成年新西兰白兔 15只 ,实验组 12只 ,对照组 3只 ,均行前房穿刺术 ,注入F6H8(实验组 )或BSS(对照组 ) 0 15ml,手术前后定期行裂隙灯、角膜内皮摄像及组织学检查。结果　术后 4周 ,实验组与F... 详细信息

目的　研究F6H8对角膜内皮细胞的影响。方法　成年新西兰白兔 15只 ,实验组 12只 ,对照组 3只 ,均行前房穿刺术 ,注入F6H8(实验组 )或BSS(对照组 ) 0 15ml,手术前后定期行裂隙灯、角膜内皮摄像及组织学检查。结果　术后 4周 ,实验组与F6H8相接触的下方角膜内皮细胞形态不规则 ,角膜内皮细胞数目下降 ,与术前比较差异有显著意义 (F =16 6 0 2 ,P =0 0 0 2 )。光镜下见上皮细胞空泡变性 ,术后 4周有角膜后膜形成。透射电镜下见线粒体、内质网肿胀及细胞核变性。结论　F6H8作为一种硅油清洗剂使用时应避免进入前房。

关键词：角膜内皮细胞全氟己基正辛烷组织学动物实验 F6H8 影响

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脉络膜血管瘤临床病理分析

中国实用眼科杂志 2001年第12期19卷 911-913页

作者：卢凤荷张洁唐仕波文峰何丽文郑湖玲中山医科大学中山眼科中心 510060

目的 :探讨脉络膜血管瘤临床、病理及免疫组织化学改变。方法 :回顾分析 8例病理诊断为脉络膜血管瘤的临床和病理资料 ,并对其中 7例眼球标本行 VEGF、 CD34等免疫组织化学检查。结果 :摘除眼球前 2例误诊为恶性脉络膜黑色素瘤 ,2例拟... 详细信息

目的 :探讨脉络膜血管瘤临床、病理及免疫组织化学改变。方法 :回顾分析 8例病理诊断为脉络膜血管瘤的临床和病理资料 ,并对其中 7例眼球标本行 VEGF、 CD34等免疫组织化学检查。结果 :摘除眼球前 2例误诊为恶性脉络膜黑色素瘤 ,2例拟诊脉络膜血管瘤 ,4例脉络膜肿物性质待查 ,其中 5例合并新生因管性青光眼 ,全部伴渗出性视网膜脱离。病理证实为脉络膜海绵状血管瘤 ,其间被纤维结缔组织分隔 ,5例瘤体表面见视网膜色素上皮细胞脱失及 2例视网膜下见成簇状含有色素的巨噬细胞。免疫组织化学检查 :脉络膜血管瘤内皮细胞 CD34均呈强阳性 ,而 VEGF阴性表达 ,2例见个别细胞呈弱阳性。结论 :病史较长 ,各种检查提示有脉络膜肿物 ,伴视网膜脱离的继发性青光眼患者 ,应高度怀疑脉络膜血管瘤。

关键词：脉络膜肿瘤病理学血管瘤免疫组织化学

F_6H_8前房内存留对眼内压影响的实验研究

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中国实用眼科杂志 2002年第4期20卷 262-265页

作者：李春芳丁小燕吕林冯官光郑湖玲中山医科大学中山眼科中心 510060

目的:通过动物实验观察硅油清洗剂全氟己基正辛烷 (F6H8)存留于前房对眼内压的影响 ,探讨F6H8的安全性。方法 :新西兰白兔 15只 ,实验组 12只 ,对照组 3只 ,行前房穿刺术 ,注入F6H8(实验组 )或BSS (对照组 ) 0 15ml,术前后定期行裂隙... 详细信息

目的:通过动物实验观察硅油清洗剂全氟己基正辛烷 (F6H8)存留于前房对眼内压的影响 ,探讨F6H8的安全性。方法 :新西兰白兔 15只 ,实验组 12只 ,对照组 3只 ,行前房穿刺术 ,注入F6H8(实验组 )或BSS (对照组 ) 0 15ml,术前后定期行裂隙灯检查、眼内压测量 ,并对小梁网组织行组织学检查。结果 :实验组眼压值比对照组升高明显。实验组内术后眼内压呈持续缓慢升高。组织学检查见术后 8周小梁网内皮细胞水肿变性 ,前房角有大量炎症细胞浸润。透射电镜下见小梁网细胞空泡样变性 ,巨噬细胞浸润。结论 :F6H8存留于前房 ,引起眼内压持续缓慢升高 ,8周时出现小梁网内皮细胞组织学结构改变。故临床上应尽量避免硅油清洗剂F6H8进入前房。

关键词：全氟己基正辛烷眼内压小梁网组织学兔

转γ-干扰素基因防治青光眼术区滤过泡纤维化的实验研究

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中山大学学报（医学科学版） 2003年第B3期24卷 1-3,F0002页

作者：蓝育青葛坚刘海泉陈慧怡郑湖玲中山大学附属第二医院眼科中山大学中山眼科中心广东广州510120

【目的】评价转γ-干扰素基因、人重组γ-干扰素制剂(IFN-γ)、丝裂霉素(MMC)和生理盐水对家兔青光眼手术滤过区的影响。【方法】选取8只新西兰纯种家兔,行巩膜咬切术后随机分为4组,分别于术后滤过区旁球结膜下注射入重组IFN-γ、生理... 详细信息

【目的】评价转γ-干扰素基因、人重组γ-干扰素制剂(IFN-γ)、丝裂霉素(MMC)和生理盐水对家兔青光眼手术滤过区的影响。【方法】选取8只新西兰纯种家兔,行巩膜咬切术后随机分为4组,分别于术后滤过区旁球结膜下注射入重组IFN-γ、生理盐水、重组质粒 pIRES-EYFP IFN-γ和术中结膜瓣下放置浸润有0.25 mg/mL MMC 的湿棉片。术后观察滤过泡大小和形态,滤过区行病理切片,HE 染色及免疫组化分析。【结果】所有兔眼于术后3d,均有滤过泡形成,于术后2～3周逐渐扁平。其中放置 MMC 组,滤过泡壁隆起较高,壁薄,色苍白,无血管长人;注射重组人 IFN-γ组滤过泡隆起也较高,但周围可见血管,其余二组,滤过泡轻至中度隆起,弥散,注射生理盐水组充血较明显。病理组织切片经 HE 染色光镜下检查:MMC 组结膜上皮下结缔组织疏松排列;转 pIRES-EYFP IFN-γ组。结膜上皮下结缔组织稀疏,可见隧道样空间;注射 IFN-γ组,2眼结膜上皮下结缔组织稀疏,可见隧道样空间,另外2眼与注射生理盐水组相似,表现为结膜上皮下被厚实的纤维组织所覆盖。免疫组化反应,转 pIRES-EYFP IFN-γ组结膜下及浅层巩膜细胞胞浆和胶原可见 IFN-γ阳性反应;注射 IFN-γ组亦可见结膜下及浅层巩膜IFN-γ弱阳性反应;生理盐水和 MMC 组,呈阴性反应。【结论】直接注射法转 IFN-γ基因的家兔 Tenon 囊和浅层巩膜组织于术后3周的时间内表达 IFN-γ。人重组 IFN-γ对家兔青光眼术后滤过区纤维的增殖和胶原的产生具有一定程度的抑制作用。人重组 IFN-γ对青光眼术后滤过泡的影响与 MMC 不同。

关键词： Ⅱ型干扰素转基因青光跟/外科学滤泡纤维化

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干扰素α-2b对兔眼角膜毒性的实验研究

中国实用眼科杂志 1998年第3期16卷 141-142,I000页

作者：张秀兰彭大伟曾淑君郑湖玲中山医科大学中山眼科中心

为评价青光眼滤过性手术后应用干扰素α－２ｂ预防和治疗滤过道的纤维疤痕化对眼组织的毒性作用，我们对兔眼前房内直接注入干扰素α－２ｂ以及兔眼行巩膜咬切术后滤过区旁结膜下注射药物后进行角膜组织的检查：角膜上皮用１％荧光素钠... 详细信息

为评价青光眼滤过性手术后应用干扰素α－２ｂ预防和治疗滤过道的纤维疤痕化对眼组织的毒性作用，我们对兔眼前房内直接注入干扰素α－２ｂ以及兔眼行巩膜咬切术后滤过区旁结膜下注射药物后进行角膜组织的检查：角膜上皮用１％荧光素钠染色，角膜内皮用锥兰和茜素红进行内皮活性染色，并对全层角膜组织结构作光镜检查。结果发现：抗青光眼术后滤过区旁结膜下注射干扰素α－２ｂ５×１０５ＩＵ／０．２ｍｌ连续３～１４天，注射总量１．５×１０６ＩＵ～６×１０６ＩＵ，以及前房内直接注入干扰素α－２ｂ１×１０６ＩＵ２４小时和第１０天后，角膜上皮、内皮以及全层组织结构无变化。说明兔眼对干扰素α－２ｂ具有良好的耐受性。

关键词：干扰素角膜毒性青光眼滤过性手术

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全氟萘烷对兔眼前房角及眼压影响的实验研究

眼科学报 2001年第4期17卷 220-223页

作者：朱晓波唐仕波卢凤荷张洁郑湖玲中山医科大学中山眼科中心广州510060

目的:观察全氟萘烷（perfluorodecalin,PFCLs）对兔眼前房角和眼压的影响。方法:随机选择23只新西兰白兔（实验眼 17只,对照组6只）,前房穿刺实验眼注入0.05ml全氟萘烷,对照组注入等量平衡盐液。术前及术后不同时点行裂隙灯眼前段检查... 详细信息

目的:观察全氟萘烷（perfluorodecalin,PFCLs）对兔眼前房角和眼压的影响。方法:随机选择23只新西兰白兔（实验眼 17只,对照组6只）,前房穿刺实验眼注入0.05ml全氟萘烷,对照组注入等量平衡盐液。术前及术后不同时点行裂隙灯眼前段检查并测眼压,然后摘取眼球做病理检查。结果:对照组术前术后眼压改变无统计学差异。实验组术后第1周眼压（10.82±3.17mmHg）接近术前水平（11.62±6.35mmHg,P<0.05）;从第2周开始到16周眼压升高（P<0.01）。裂隙灯下对照组仅见房水闪辉（+）,但实验组还见到角膜背羊脂状Keratic precipitate（Kp）,全氟萘烷沉于前房下方呈大泡状或鱼卵样。后者组织病理切片见前房角大量泡沫状空泡及吞噬细胞;小梁网阻塞间隙增大,小梁组织变性。结论:前房内注入全氟萘烷可导致持续的眼压升高,前房角可见炎症反应及小梁组织变性,因此临床手术后应尽量清除PFCLs。眼科学报2001;17:220～223。

关键词：全氟化碳液体前房角眼压全氟萘烷动物实验眼科手术