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作者：邹朝双山东大学

学位级别：硕士

目的有机磷化合物（organophosphorus compounds, OPs）应用广泛,主要用作农药、增塑剂、阻燃剂、油料添加剂、润滑剂及神经毒剂等。有机磷化合物除可抑制胆碱酯酶而诱发急性中毒外,部分有机磷化合物还能诱发迟发性神经病（organop... 详细信息

目的有机磷化合物（organophosphorus compounds, OPs）应用广泛,主要用作农药、增塑剂、阻燃剂、油料添加剂、润滑剂及神经毒剂等。有机磷化合物除可抑制胆碱酯酶而诱发急性中毒外,部分有机磷化合物还能诱发迟发性神经病（organophosphate induced delayed neurotoxicity, OPIDN）。OPIDN的特点是在接触有机磷化合物1-3周后出现症状。首发症状多为感觉异常,很快发展为运动性肌无力与共济失调,严重者可瘫痪。临床上尚无特效治疗方法,主要是对症支持治疗,预后差。三邻甲苯磷酸酯（Tri-ortho-cresylphosphate TOCP）是典型的具有迟发性神经毒性的有机磷化合物,能在人和敏感动物中诱发OPIDN. TOCP诱导OPIDN的发病机制尚无明确定论,目前国内外研究多集中于神经元轴索,对于神经元胞体在OPIDN发病过程中的病理变化少有报导。近年来国内外学者研究表明TOCP诱导的OPIDN中发生了神经元凋亡现象,但是细胞凋亡的发生机制目前尚不清楚,因此TOCP中毒所致神经组织细胞凋亡机制需要进行深入研究。本研究通过建立TOCP中毒动物模型,在细胞凋亡的线粒体通路上探索染毒母鸡脊髓组织神经元凋亡的发生机制,进一步研究神经元凋亡在OPIDN中的作用,探索OPIDN的发病机制。方法 ***诱导母鸡OPIDN动物模型的建立将60只成年罗曼母鸡适应性饲养一周后随机分为5组,即对照组、1d、5d、10d和21d组（n=12）。TOCP溶解于玉米油中,按750mg/kg经灌胃一次性染毒,对照组给予等体积玉米油。最后在上述时间点从各组中随机抽选3只母鸡,取脊髓前角组织用于电镜观察。另在每组剩余的动物中随机抽取3只母鸡,取脊髓前角组织用于原位末端标记（TUNEL）实验和免疫组织化学实验。剩余各组动物在相应时间点处死,迅速取出脊髓,置于液氮中,-80℃保存,用于SDS-PAGE和Western-Blotting实验。 2.脊髓组织中神经元凋亡变化的测定取腰段脊髓前角组织环氧树脂组织切片,透射电镜下观察神经元凋亡的变化。另取腰段脊髓前角石蜡组织切片,应用原位末端标记法（TUNEL）测定脊髓组织中神经元凋亡数量的变化。 3.脊髓神经元细胞色素C （Cytochrome C）蛋白由线粒体向胞浆释放的测定取母鸡脊髓组织,按照组织线粒体分离试剂盒说明书分离出线粒体蛋白和胞浆蛋白,利用SDS-PAGE和Western-blotting技术分别测定两种组分中细胞色素C蛋白的含量。另取腰段脊髓前角石蜡组织切片,免疫组织化学法测定细胞色素C蛋白在脊髓神经元胞浆中含量的变化。 4.脊髓组织中凋亡相关蛋白的测定取母鸡脊髓组织,按质量体积比1：5加入预冷的的匀浆缓冲液（50mM Tris-HC1,150mM NaCl,1%Triton X-100,1%sodium deoxycholate,0.1%sodium dodecyl sulphate （SDS）,1mM phenylmethylsulfonyl fluoride （PMSF）,1mMNa3VO4,5mMNaF,和1%cocktail protein protease inhibitors, pH=7.5）,制备组织匀浆,14000转/分,4℃离心20min,取上清。利用SDS-PAGE和Western-blotting技术测定脊髓组织总蛋白中Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Cytochrome C、pro-caspase3和pro-caspase9蛋白的含量。另取母鸡脊髓组织,按照细胞核分离试剂盒说明书分离出胞核蛋白,利用SDS-PAGE和Western-blott ing技术测定脊髓胞核中cleaved-PARP蛋白表达的变化。 5.脊髓组织中自噬相关蛋白的测定按照上面方法取母鸡脊髓组织总蛋白,利用SDS-PAGE和Western-blotting技术测定脊髓中Atg5、Atg7、Atg12、Beclin-1、AMBRA1和VPS34蛋白表达的变化。结果 1.实验动物一般状况变化给予TOCP染毒后,动物未出现急性中毒症状,约在第5d出现双腿运动轻微不协调,第9d出现严重的、频发的站立和行走困难,之后OPIDN症状进展迅速,第15d所有动物完全瘫痪,此状态持续至实验结束。正常对照组活动正常,未见任何异常。 2.实验动物脊髓神经元凋亡的变化电镜观察结果显示,TOCP染毒后母鸡脊髓神经元凋亡的变化随时间呈现逐渐加重的现象。染毒1d时,神经元胞核异型化,核基质中可见异染色质,部分线

关键词：三邻甲苯磷酸酯(TOCP) 有机磷酯类化合物诱发的迟发性神经病(OPIDN) 线粒体凋亡自噬相关蛋白

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三邻甲苯磷酸酯染毒的母鸡脊髓中AKT/mTOR/p70S6K信号通路的变化

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毒理学杂志 2013年第3期27卷 157-160页

作者：寇蕊蕊邹朝双高媛谢克勤宋福永山东大学公共卫生学院毒理学研究所山东济南250012

目的研究三邻甲苯磷酸酯(TOCP)所致迟发性神经病(OPIDN)中AKT/mTOR/p70S6K信号通路的变化,探讨OPIDN发生的分子机制。方法 30只成年罗曼母鸡随机分为5组,每组6只,给予750 mg/kg TOCP一次性灌胃,然后分别在TOCP染毒后0、1、5、10和21 d... 详细信息

目的研究三邻甲苯磷酸酯(TOCP)所致迟发性神经病(OPIDN)中AKT/mTOR/p70S6K信号通路的变化,探讨OPIDN发生的分子机制。方法 30只成年罗曼母鸡随机分为5组,每组6只,给予750 mg/kg TOCP一次性灌胃,然后分别在TOCP染毒后0、1、5、10和21 d时间点处死一组动物取脊髓组织,免疫印迹法检测脊髓中AKT、p-AKT、p70S6K、p-p70S6K和mTOR的相对含量。结果 TOCP染毒引起母鸡脊髓中磷酸化AKT、p70S6K和mTOR的含量显著下降(P0.05)。结论 TOCP干扰了AKT/mTOR/p70S6K信号通路的调节机制,这可能与OPIDN的发病机制有关。

关键词：三邻甲苯磷酸酯有机磷化合物诱发的迟发性神经病 AKT mTOR p70S6K信号通路

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三邻甲苯磷酸酯诱导母鸡神经组织中自噬相关蛋白含量的变化

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中华劳动卫生职业病杂志 2012年第10期30卷 748-750页

作者：邹朝双寇蕊蕊高媛谢克勤宋福永山东大学毒理学研究所济南250012

目的研究三邻甲苯磷酸酯（TOCP）诱导的迟发性神经病（OPIDN）中自噬相关蛋白Atg1、Atg5和Beclin1的变化，探讨OPIDN发生的分子机制。方法取成年罗曼母鸡30只，随机分为对照组、1d、5d、10d和21d组（每组6只），对照组给予同体积的玉米... 详细信息

目的研究三邻甲苯磷酸酯（TOCP）诱导的迟发性神经病（OPIDN）中自噬相关蛋白Atg1、Atg5和Beclin1的变化，探讨OPIDN发生的分子机制。方法取成年罗曼母鸡30只，随机分为对照组、1d、5d、10d和21d组（每组6只），对照组给予同体积的玉米油，各染毒组动物均按750mg／kg经一次性灌胃染毒TOCP，分别在相应时间点处死动物取胫神经和脊髓，免疫印迹法检测胫神经和脊髓中Atg1、Atg5和Beclin1的相对含量。结果与对照组相比，TOCP染毒后胫神经中Atg1含量1、5、10、21d分别下降了29．8％、64．4％、43．5％和19．8％（P〈0．05）；TOCP染毒后Atg5含量1、5、10、21d分别下降了36．8％、49．6％、51．2％和31．5％（P〈0．05）；TOCP染毒后beclin1含量1、5、10天分别下降了68．5％、66．3％和32．2％（P〈0．05）。与对照组相比，TOCP染毒后脊髓组织中Atg1含量1、5、10d分别下降了23．5％、48．7％和20％（P〈0．05）；Atg5含量在TOCP染毒后1、5、10、21d分别下降了32．7％、51．5％、47．3％和39．6％（P〈0．05）；beclin1含量在TOCP染毒后1、5、10、21d分别下降了28．9％、50．2％、43．2％和28．3％（P〈0．05）。结论TOCP染毒干扰了母鸡神经组织中自噬相关蛋白的表达，可能与OPIDN的发病机制有关。

关键词：三邻甲苯磷酸酯有机磷化合物诱发的迟发性神经病自噬相关蛋白

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2，5-己二酮对大鼠神经组织中低分子量神经丝降解的影响

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中华劳动卫生职业病杂志 2012年第6期30卷 418-422页

作者：邹朝双谢克勤寇蕊蕊高媛宋福永山东大学毒理学研究所济南250012

目的研究2，5-己二酮（HD）对大鼠神经组织中低分子量神经丝（NF—L）降解的影响，探讨正己烷中毒性神经病发生的可能机制。方法雄性Wistar大鼠50只随机分为1、2、3、4周染毒组和对照组，每组10只。经腹腔注射HD（400mg／kg）染毒动物... 详细信息

目的研究2，5-己二酮（HD）对大鼠神经组织中低分子量神经丝（NF—L）降解的影响，探讨正己烷中毒性神经病发生的可能机制。方法雄性Wistar大鼠50只随机分为1、2、3、4周染毒组和对照组，每组10只。经腹腔注射HD（400mg／kg）染毒动物，剂量为，建立正己烷中毒性神经病模型。电子显微镜观察大鼠坐骨神经的超微结构变化，步态评分评价大鼠周围神经病症状的进展，免疫印迹法（Westernblot）检测坐骨神经和脊髓组织中NF—L降解率的变化。结果HD染毒2周后，大鼠逐渐出现肌力降低、步态异常等表现，至染毒4周结束时大鼠呈现轻中度瘫痪，电子显微镜观察显示坐骨神经出现退行性病变。与对照组相比较，2、3、4周染毒组大鼠坐骨神经上清和沉淀组分中NF—L降解率均呈进行性下降，其中上清NF—L降解率分别下降25．8％、70．4％和69．7％，沉淀中NF-L降解率分别下降14．7％、64．6％和67．3％，差异均有统计学意义（P〈0．01）。在脊髓组织中，与对照组相比较，1周染毒组脊髓上清中NF—L降解率下降33．87％，4周染毒组脊髓上清中NF—L降解率升高16．2％，1、2周染毒组脊髓沉淀中NF—L降解率分别下降46．3％和13．0％，差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论HD染毒显著抑制了坐骨神经中NF—L的降解，这可能与正己烷中毒性神经病轴突中NF变性堆积有关。

关键词： 2,5-己二酮神经组织坐骨神经

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活细胞成像技术研究2,5-己二酮对中分子量神经丝运输的影响

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毒理学杂志 2013年第3期27卷 168-171页

作者：韩晓英安丽红邹朝双朱明星谢克勤山东大学公共卫生学院毒理学研究所山东济南250012 山东师范大学生命科学学院

目的用活细胞成像技术研究2,5-己二酮对中分子量神经丝蛋白(NF-M)在体外培养的背根神经节神经元轴突中的运输的影响。方法转染pPA-GFP-NFM质粒的背根神经节神经元体外培养,给予2,5-己二酮作用24 h后,荧光显微镜下定量观察GFP-NFM的转运... 详细信息

目的用活细胞成像技术研究2,5-己二酮对中分子量神经丝蛋白(NF-M)在体外培养的背根神经节神经元轴突中的运输的影响。方法转染pPA-GFP-NFM质粒的背根神经节神经元体外培养,给予2,5-己二酮作用24 h后,荧光显微镜下定量观察GFP-NFM的转运量。结果给药4、8和16 mmol/L 2,5-HD组,NF-M在轴突中被转运的量分别为28.5±11.6%(P<0.05)、22.6±9.2%(P<0.01)和18.5±8.6%(P<0.01),而空白对照组中NF-M被转运的量为35.6±11.0%。结论 2,5-己二酮降低了NF-M的轴浆运输速率,这可能是2,5-己二酮引起中毒性周围神经病的致病机制之一。

关键词：活细胞成像 2,5-己二酮背根神经节神经丝轴浆运输

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二硫化碳对大鼠神经组织中轴突运输马达蛋白表达的影响

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中华劳动卫生职业病杂志 2014年第9期32卷 660-663页

作者：王沙沙高媛王译苹寇蕊蕊邹朝双谢克勤宋福永山东大学公共卫生学院毒理学研究所济南250012

目的研究二硫化碳染毒大鼠脊髓和坐骨神经中微管马达蛋白表达的变化,探讨二硫化碳所致周围神经病中轴突运输变化的可能分子机制.方法成年雄性健康Wistar大鼠随机分为1个对照组和3个染毒组,每组10只.3个染毒组经口灌胃染毒二硫化碳,染... 详细信息

目的研究二硫化碳染毒大鼠脊髓和坐骨神经中微管马达蛋白表达的变化,探讨二硫化碳所致周围神经病中轴突运输变化的可能分子机制.方法成年雄性健康Wistar大鼠随机分为1个对照组和3个染毒组,每组10只.3个染毒组经口灌胃染毒二硫化碳,染毒剂量分别为200、400和600mg/kg,对照组给予相同体积的玉米油,每周6次,持续6周.染毒结束后处死动物取神经组织,用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测脊髓和坐骨神经中dynein、dynactin和kinesin的相对含量.结果二硫化碳染毒引起坐骨神经中dynein、dynactin和kinesin含量明显下降.与对照组比较,400和600 mg/kg组坐骨神经中dynein分别降低了23.47％和33.34％,3个染毒组坐骨神经中dynactin分别降低了19.91％、24.23％和41.30％,600 mg/kg剂量组坐骨神经中kinesin降低了25.98％,差异均有统计学意义（P＜0.01）.与对照组比较,600 mg/kg剂量组脊髓中dynactin下降了28.24％,差异有统计学意义（P＜0.01）,dynein和kinesin均无明显变化.结论二硫化碳染毒影响了神经组织中微管马达蛋白的表达,这可能与其所致周围神经病的发生机制有关.

关键词：二硫化碳神经组织轴突运输马达蛋白

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德州市某职业技术院校毕业生岗前纯音听力测试结果分析

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工业卫生与职业病 2018年第3期44卷 214-216页

作者：赵文静邹朝双韩良兵德州市疾病预防控制中心山东德州253016

探讨德州市职业技术院校毕业生听力状况,为开展职业技术院校学生听力保护提供研究依据。对德州市525名职业技术院校毕业生进行上岗前职业健康检查及问卷调查。结果显示,共检出噪声作业职业禁忌证28人,男生职业禁忌证检出率(6.5%)高于女... 详细信息

探讨德州市职业技术院校毕业生听力状况,为开展职业技术院校学生听力保护提供研究依据。对德州市525名职业技术院校毕业生进行上岗前职业健康检查及问卷调查。结果显示,共检出噪声作业职业禁忌证28人,男生职业禁忌证检出率(6.5%)高于女生(1.1%),差异有统计学意义(χ2=3.98,P2h的占70.0%。耳机使用时间对听力的影响,差异有统计学意义(χ2=4.36,P0.05)。提示,在校学生普遍使用耳机,不科学地使用耳机方式是造成在校学生听力下降的主要因素。加强听力保护的宣教,开展上岗前职业健康检查,对保护职业技术院校毕业生听力,预防职业病的发生有重要意义。

关键词：噪声职业技术院校毕业生听力

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职业性噪声对作业人员听力和心血管系统影响

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职业卫生与应急救援 2018年第3期36卷 227-229页

作者：赵文静邹朝双德州市疾病预防控制中心山东德州253000

[目的]探讨职业性噪声对作业人员听力和心血管系统的影响。[方法]以山东德州某电动车制造企业521名噪声接触工人为暴露组,该企业521名管理人员为对照组,对两组工人进行听力测定、血压测量和心电图的检查,分析检查结果。[结果]暴露组的... 详细信息

[目的]探讨职业性噪声对作业人员听力和心血管系统的影响。[方法]以山东德州某电动车制造企业521名噪声接触工人为暴露组,该企业521名管理人员为对照组,对两组工人进行听力测定、血压测量和心电图的检查,分析检查结果。[结果]暴露组的听力异常率、耳鸣检出率、高血压患病率和心电图异常率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);暴露组的听力异常亚组的高血压患病率高于听力正常亚组,差异亦有统计学意义(P<0.05)。[结论]长期噪声暴露对作业工人的听觉系统和心血管系统均有一定损害。

关键词：职业性噪声听力血压心血管系统电动车制造

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2015年德州市城乡居民健康素养状况调查

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预防医学论坛 2018年第12期24卷 912-915页

作者：李敏尹胜利邹朝双德州市疾病预防控制中心山东德州253016

目的了解德州市城乡居民健康素养现状,分析主要影响因素,为政府制定健康政策,有针对性开展健康教育与健康促进工作提供依据。方法采用多阶段分层整群随机抽样方法,于2015年4～7月对德州市11个县区2 640名15～69岁常住人口进行问卷调查,... 详细信息

目的了解德州市城乡居民健康素养现状,分析主要影响因素,为政府制定健康政策,有针对性开展健康教育与健康促进工作提供依据。方法采用多阶段分层整群随机抽样方法,于2015年4～7月对德州市11个县区2 640名15～69岁常住人口进行问卷调查,运用SPSS 19.0软件进行统计分析。结果 2015年德州市常住居民健康素养总体水平为5.16%,城市(6.81%)高于农村(4.69%)(P0.05);25～34岁健康素养水平最高(10.13%),不同年龄差异有统计意义(P<0.01);文化程度越高素养水平越高(P<0.01)。3个方面素养水平由高到低分别为:健康基本技能素养(11.55%)、基本知识和理念(8.72%)、健康生活方式与行为(6.84%);6类健康问题素养水平由高到低分别为:安全与急救素养(34.23%)、健康信息素养(21.17%)、科学健康观(18.59%)、传染病防治素养(15.23%)、基本医疗素养(6.84%)、慢性病防治素养(3.15%)。结论 2015年德州市居民健康素养低于全省平均水平,特别是慢病防治素养水平。

关键词：常住居民健康素养健康教育

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德州市某燃煤电厂作业人员职业健康检查结果

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职业与健康 2018年第5期34卷 591-594页

作者：赵文静邹朝双韩良兵德州市疾病预防控制中心职业健康监护科山东德州253000

目的分析德州市某燃煤电厂存在的主要职业病危害因素及对作业人员的职业健康危害。方法选择该燃煤电厂562名作业人员为研究对象,结合工作场所职业病危害因素测定结果,对其职业健康检查结果进行分析。结果煤尘检测结果超标率为10.53%,噪... 详细信息

目的分析德州市某燃煤电厂存在的主要职业病危害因素及对作业人员的职业健康危害。方法选择该燃煤电厂562名作业人员为研究对象,结合工作场所职业病危害因素测定结果,对其职业健康检查结果进行分析。结果煤尘检测结果超标率为10.53%,噪声岗位8 h等效声级的M为84.7(74.9~90.4)dB(A),超标率为17.07%。受检人员异常检出率:血压22.42%、听力14.41%、心电图5.88%、胸片2.14%,其中1名疑似尘肺病,3名疑似噪声聋,5名噪声职业禁忌证。接噪人员听力异常检出率随年龄、工龄以及所接触噪声强度的增加而增加(P<0.05)。接触粉尘的浓度对胸片异常率的影响,差异有统计学意义(P<0.05)。结论该燃煤电厂粉尘和噪声危害较重。应加强工作场所粉尘、噪声的控制工作,做好职业卫生知识培训和个体防护,定期进行职业健康检查,保障工人健康。

关键词：燃煤电厂职业健康检查粉尘噪声

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