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重组人骨形成蛋白2在皮肤成纤维细胞中的表达

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上海第二医科大学学报 2003年第6期23卷 508-511页

作者：王英邹嫣琼仓辉李慧汤雪明易静上海第二医科大学细胞生物学教研室上海200025

目的构建人骨形成蛋白2(BMP2)的真核表达载体以探讨成纤维细胞表达BMP2的情况。方法构建携带人BMP2基因的真核表达载体pRK5-hBMP2,并将其转染CHO细胞、NIH3T3细胞和正常人皮肤成纤维细胞后,采用RT-PCR方法检测人BMP2在mRNA水平上的表达... 详细信息

目的构建人骨形成蛋白2(BMP2)的真核表达载体以探讨成纤维细胞表达BMP2的情况。方法构建携带人BMP2基因的真核表达载体pRK5-hBMP2,并将其转染CHO细胞、NIH3T3细胞和正常人皮肤成纤维细胞后,采用RT-PCR方法检测人BMP2在mRNA水平上的表达。结果RT-PCR显示转染后的CHO细胞、NIH3T3细胞和正常人皮肤成纤维细胞可以有效地转录BMP2 mRNA。结论含有人BMP2 cDNA的重组质粒pRK5-hBMP2转染正常人皮肤成纤维细胞后可以有效地表达BMP2。

关键词：重组人骨形成蛋白2 皮肤成纤维细胞表达 RT-PCR

细胞特异性的非病毒载体增强BMP-2在成纤维细胞中表达

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上海交通大学学报（医学版） 2006年第5期26卷 466-469页

作者：王茸影邹嫣琼朱振安易静上海交通大学基础医学院细胞生物学教研室上海200025 上海交通大学医学院第九人民医院骨科

目的构建含有胶原蛋白1A2启动子和增强子的人皮肤成纤维细胞(HDFs)特异的非病毒骨形成蛋白-2(BMP-2)表达载体pcDNA3-CEP-BMP-2,验证其是否增强BMP-2特异性在HDFs表达并增强成骨诱导作用,从而探索非病毒载体介导正常细胞的基因修饰用于... 详细信息

目的构建含有胶原蛋白1A2启动子和增强子的人皮肤成纤维细胞(HDFs)特异的非病毒骨形成蛋白-2(BMP-2)表达载体pcDNA3-CEP-BMP-2,验证其是否增强BMP-2特异性在HDFs表达并增强成骨诱导作用,从而探索非病毒载体介导正常细胞的基因修饰用于骨修复的可能性。方法将胶原蛋白增强子、启动子及BMP-2基因导入pcDNA3质粒中,用脂质体法转入HDFs,将血管内皮细胞(VEC)作为对照,RT-PCR检测BMP-2基因在两种细胞中的表达差异,并检测转染后HDFs体外成骨表型。结果转染pcDNA3-CEP-BMP-2在HDFs造成BMP-2表达高于pcDNA3-BMP-2,而在VEC的BMP-2表达不增高。转染了pcDNA3-CEP-BMP-2的HDFs骨钙素的分泌和矿化能力高于pcDNA3-BMP-2。结论胶原蛋白1A2启动子和增强子能特异性地增强BMP-2基因在HDFs中的表达。

关键词：细胞特异成纤维细胞骨形成蛋白-2 胶原蛋白启动子增强子基因治疗

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RIG-Ⅰ与干扰素信号通路的关系

上海交通大学学报（医学版） 2007年第10期27卷 1210-1214页

作者：孙岳平肖家祁邹嫣琼王铸钢上海交通大学基础医学院细胞生物学教研室上海200025 上海交通大学基础医学院病原生物学教研室上海200025 上海交通大学基础医学院医学遗传学教研室上海200025

目的研究干扰素(IFNs)对维甲酸诱导Ⅰ型基因(RIG-Ⅰ)的调控作用,同时探讨RIG-Ⅰ对IFNs生物学效应的介导作用。方法Northern杂交和半定量RT-PCR检测小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)、在IFNs作用前后RIG-Ⅰ基因的表达。MTT比色法和细胞病变抑制... 详细信息

目的研究干扰素(IFNs)对维甲酸诱导Ⅰ型基因(RIG-Ⅰ)的调控作用,同时探讨RIG-Ⅰ对IFNs生物学效应的介导作用。方法Northern杂交和半定量RT-PCR检测小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)、在IFNs作用前后RIG-Ⅰ基因的表达。MTT比色法和细胞病变抑制法比较野生型和RIG-基因剔除(RIG-Ⅰ-/-)小鼠的MEFs在IFNs作用前后的生长情况和抗病毒活性。结果IFN-γ、IFN-β均能上调小鼠MEFs中RIG-Ⅰ的表达;100 U/mL IFN-γ处理后,野生型小鼠MEFs的生长抑制较RIG-Ⅰ-/-小鼠的MEFs明显;RIG-Ⅰ缺失后,IFN-β对细胞病毒感染的保护作用较野生型明显减弱。结论RIG-Ⅰ是一新发现的介导干扰素细胞效应的基因,它可能通过调节细胞因子的产生参与干扰素介导的炎症反应。

关键词：维甲酸诱导Ⅰ型基因干扰素炎症反应

含EGFP的人BMP2表达载体在人皮肤成纤维细胞中的表达

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上海第二医科大学学报 2004年第12期24卷 1007-1010页

作者：邹嫣琼王英陈玉英胡庆沈李慧易静上海第二医科大学基础医学院细胞生物学教研室上海200025

目的构建带加强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因的人骨形成蛋白 2 (hBMP2 )真核表达载体 ,观察其在正常人皮肤成纤维细胞中的表达情况。方法构建携带hBMP2和EGFP基因的真核表达载体 pcDNA3 hBMP2 IRES EGFP(pcBE) ,将其转染NIH3T3细胞和正... 详细信息

目的构建带加强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因的人骨形成蛋白 2 (hBMP2 )真核表达载体 ,观察其在正常人皮肤成纤维细胞中的表达情况。方法构建携带hBMP2和EGFP基因的真核表达载体 pcDNA3 hBMP2 IRES EGFP(pcBE) ,将其转染NIH3T3细胞和正常人皮肤成纤维细胞后 ,采用RT PCR和免疫组化染色方法分别检测人BMP2和EGFP基因在mRNA和蛋白质水平上的表达情况。结果转染后的NIH3T3和正常人皮肤成纤维细胞均能转录人BMP2mRNA和表达人BMP2蛋白 ,同时显示绿色荧光。结论 pcBE真核表达载体可在正常人皮肤成纤维细胞内有效表达人BMP2蛋白 ,并以其荧光报告基因起示踪作用。

关键词： BMP2 人皮肤成纤维细胞正常人真核表达载体 EGFP基因转染绿色荧光蛋白 RNA 转录报告基因

重组Nox1在NIH3T3细胞中的表达及其对活性氧的影响

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上海第二医科大学学报 2005年第5期25卷 471-474页

作者：仓辉邹嫣琼杨洁王毓美王英史桂英易静上海第二医科大学基础医学院细胞生物学教研室上海200025

目的构建Nox1的真核表达载体,探讨其在NIH3T3细胞中表达后对活性氧水平和药物细胞毒易感性的影响。方法构建携带Nox1基因的真核表达载体pcDNA3-Nox1,并将其转染NIH3T3细胞,采用RT-PCR方法检测Nox1在mRNA水平上的表达,检测细胞活性氧和... 详细信息

目的构建Nox1的真核表达载体,探讨其在NIH3T3细胞中表达后对活性氧水平和药物细胞毒易感性的影响。方法构建携带Nox1基因的真核表达载体pcDNA3-Nox1,并将其转染NIH3T3细胞,采用RT-PCR方法检测Nox1在mRNA水平上的表达,检测细胞活性氧和细胞活力。结果RT-PCR显示转染后的NIH3T3细胞可以有效地转录Nox1mRNA,细胞中的活性氧水平明显升高,同时对As2O3细胞毒作用更加敏感。结论含有Nox1cDNA的重组质粒pcDNA3-Nox1转染细胞后可有效表达Nox1,使活性氧水平升高,并因此增加细胞对药物细胞毒的敏感性。

关键词： NIH3T3细胞活性氧表达及 RT-PCR方法真核表达载体 mRNA水平细胞毒作用 As2O3 细胞活力转染细胞重组质粒 cDNA 易感性 1基因 Nox 敏感性药物检测升高

消除小鼠肝脏冰冻切片自发荧光4种封闭方法的比较

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第二军医大学学报 2020年第8期41卷 871-875页

作者：刘晓宁邹嫣琼袁继行李贵苹杭勤黄莹上海交通大学医学院基础医学公共技术平台上海200025 海军军医大学(第二军医大学)基础医学院医学遗传学教研室上海200433

目的通过对小鼠肝脏冰冻切片进行不同的封闭处理,探寻消除小鼠肝脏自发荧光的最佳方法,以降低对免疫荧光阳性信号的干扰,提高免疫荧光结果的准确性。方法(1)经脾静脉注射肝脏荷瘤裸小鼠:将Hepa1-6-GFP细胞通过脾脏注射方法使其在雄性无... 详细信息

目的通过对小鼠肝脏冰冻切片进行不同的封闭处理,探寻消除小鼠肝脏自发荧光的最佳方法,以降低对免疫荧光阳性信号的干扰,提高免疫荧光结果的准确性。方法(1)经脾静脉注射肝脏荷瘤裸小鼠:将Hepa1-6-GFP细胞通过脾脏注射方法使其在雄性无胸腺BALB/c裸小鼠肝脏定植,并将肝脏进行冰冻连续切片,对切片分别进行AB液(内源性生物素封闭液)、blocking、AB液+blocking、丙酮+AB液+blocking封闭处理,然后检测小鼠肝脏冰冻切片自发荧光。(2)C57BL/6小鼠:对C57BL/6小鼠肝脏进行冰冻连续切片,对切片分别进行上述4种封闭处理,用F4/80标记肝巨噬细胞(Kupffer细胞),然后检测小鼠肝脏冰冻切片自发荧光。结果肝脏组织冰冻切片免疫荧光染色时,4种封闭处理都可以减弱肝脏切片的自发荧光,但丙酮+AB液+blocking封闭处理效果最佳。结论丙酮+AB液+blocking联合应用对小鼠肝脏组织冰冻切片自发荧光的消除效果最好。

关键词：小鼠肝冰冻切片自发荧光免疫荧光技术

病毒与非病毒载体在BMP2基因治疗用于骨修复的比较

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病毒与非病毒载体在BMP2基因治疗用于骨修复的比较

小泛素样修饰物蛋白酶3调控小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬

中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会

作者：王茸影邹嫣琼陈玉英王英李慧易静上海第二医科大学细胞生物学教研室上海第二医科大学细胞生物学教研室上海第二医科大学细胞生物学教研室上海第二医科大学细胞生物学教研室上海第二医科大学细胞生物学教研室上海第二医科大学细胞生物学教研室

大面积骨缺损和骨折不愈合是临床上难以攻克的一个难题。骨形成蛋白2(Bone Morphogenetic protein 2)可诱导骨、软骨及骨有关的结缔组织形成。本研究利用逆转录病毒与非病毒载体系统将 hBMP2基因转入人皮肤成纤维细胞(HDF),比较两种载体... 详细信息

大面积骨缺损和骨折不愈合是临床上难以攻克的一个难题。骨形成蛋白2(Bone Morphogenetic protein 2)可诱导骨、软骨及骨有关的结缔组织形成。本研究利用逆转录病毒与非病毒载体系统将 hBMP2基因转入人皮肤成纤维细胞(HDF),比较两种载体在hBMP2介导的骨修复中的作用。我们构建了含hBMP2基因的病毒载体质粒pLXSN-BMP2,用CaCl2方法转入包装细胞PA317, 产生含hBMP2基因的病毒颗粒,感染HDF后,用RT-PCR和免疫组化法检测到hBMP2表达,在体外检测到稳定的成骨表型,碱性磷酸酶升高,骨钙素稳定升高,矿化能力明显提高,将HDF注入裸鼠肌肉内能诱导异位成骨,X线检查到钙化骨组织,HE染色见到软骨内成骨的形态,而对照组均阴性;感染大鼠皮肤成纤维细胞(RDF),将RDF植入大鼠颅骨缺损处,观察其原位成骨隋况;而用脂质体转染法将普通非病毒载体pcNDA3-BMP2转入HDF后只有很弱的成骨表型,体内只能形成软骨;因此我们利用成纤维细胞特异的α1(Ⅰ)胶原蛋白基因增强子-启动子盒(α1(Ⅰ)collagen enhancer and promoter cassette),代替pcNDA3的CMV启动子构建新型的非病毒载体pcDUE-BMP2,用脂质体方法将hBMP2基因转入HDF和RDF后发现hBMP2表达强度高于pCDNA3-BMP2,我们将用此成纤维细胞特异的非病毒载体与病毒载体介导的局部基因治疗进行比较,在避免病毒生物安全性弊端的同时为局部基因治疗的临床应用提供新的思路和方法。

关键词：非病毒载体基因治疗骨修复

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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实验动物与比较医学 2020年第4期40卷 270-278页

作者：朱慧琴邹嫣琼杨洁易静杨洁上海交通大学医学院生物化学与分子细胞生物学系上海200025 上海交通大学医学院基础医学公共技术平台上海200025

目的探讨小泛素样修饰物(small ubiquitin-like modifier,SUMO)特异性蛋白酶3(SUMO-specific protease 3,SENP3)对小鼠肺组织细胞自噬的调控作用及分子机制。方法应用免疫荧光技术检测SENP3在肺组织细胞中的定位;对SENP3基因野生型C57BL... 详细信息

目的探讨小泛素样修饰物(small ubiquitin-like modifier,SUMO)特异性蛋白酶3(SUMO-specific protease 3,SENP3)对小鼠肺组织细胞自噬的调控作用及分子机制。方法应用免疫荧光技术检测SENP3在肺组织细胞中的定位;对SENP3基因野生型C57BL/6J小鼠(SENP3^+/+)和SENP3基因敲除杂合子小鼠(SENP3^+/-)进行饥饿处理,诱导细胞自噬;应用免疫印迹法评估细胞自噬水平;应用电子显微镜观察和免疫荧光技术分析发生自噬的细胞类型;应用免疫共沉淀方法检测自噬相关分子卷曲螺旋状Myosin样Bcl-2相互作用蛋白1(coiled-coil myosin-like Bcl-2-interacting protein 1,BECN1)的SUMO化修饰。结果 SENP3在肺泡Ⅱ型上皮细胞中高表达。小鼠经饥饿处理后,肺泡Ⅱ型上皮细胞出现自噬现象,且SENP3^+/-小鼠较SENP3^+/+小鼠更明显。同时,肺组织样品中BECN1的SUMO2/3化修饰被SENP3去除。结论 SENP3抑制饥饿应激时小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的自噬,并可对细胞自噬程度进行精细调控。

关键词：小泛素样修饰物蛋白酶3 自噬肺泡Ⅱ型上皮细胞小鼠

我国彝族一个新的DR15(2)等位基因的核苷酸序列分析

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中华微生物学和免疫学杂志 1995年第1期15卷 45-48页

作者：费虹明陆嫣林标扬蒋伟宏邹嫣琼陈仁彪上海第二医科大学生物学教研室

对一组彝族样本的寡核苷酸分型中发现的９个与ＤＲＢ１１５０１反应格局基本相似，但有差异的ＤＲ１５（２）阳性细胞进行了组特异性扩增并对扩增产物进行了Ｍ１３克隆和测序。发现它们第二外显子为６７位氨基酸编码的密码子由ＤＲＢ１... 详细信息

对一组彝族样本的寡核苷酸分型中发现的９个与ＤＲＢ１１５０１反应格局基本相似，但有差异的ＤＲ１５（２）阳性细胞进行了组特异性扩增并对扩增产物进行了Ｍ１３克隆和测序。发现它们第二外显子为６７位氨基酸编码的密码子由ＤＲＢ１１５０１的ＡＴＣ（为异亮氨酸编码）转换成为苯丙氨酸编码的ＴＴＣ。它是与所有已发表的ＤＲ２组的等位基因不同的一个新的等位基因，我们暂称之为ＤＲＢ１１５Ｙ１。

关键词：寡核苷酸分型人白细胞抗原聚合酶链反应