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刚地弓形虫抗缓殖子期抗原1单克隆抗体的制备与应用

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年第5期40卷 587-593页

作者：邹伟浩吴蔚玲廖远鹏陈敏彭鸿娟南方医科大学公共卫生学院病原生物学系广东省热带病研究重点实验室广州510515

目的制备弓形虫抗缓殖子期抗原1 (BAG1)的单克隆抗体,探究其在弓形虫缓殖子鉴定上的应用。方法分别收集碱性培养基(pH 8.2)诱导5 d后的弓形虫ME49虫株(体外诱导)和慢性感染后2个月的小鼠脑组织匀浆中的ME49虫株(体内形成)。提取体外诱... 详细信息

目的制备弓形虫抗缓殖子期抗原1 (BAG1)的单克隆抗体,探究其在弓形虫缓殖子鉴定上的应用。方法分别收集碱性培养基(pH 8.2)诱导5 d后的弓形虫ME49虫株(体外诱导)和慢性感染后2个月的小鼠脑组织匀浆中的ME49虫株(体内形成)。提取体外诱导的弓形虫ME49虫株缓殖子总RNA, RT-PCR扩增bag1开放读码框片段,亚克隆至原核表达载体pET-28a (+),转化至BL21 (DE3)大肠埃希菌,用1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达BAG1,采用Ni-NTA柱纯化重组蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测重组蛋白BAG1表达情况。取6只BALB/c小鼠,皮下注射纯化的重组BAG1蛋白(20μg/鼠) 3次后(首次免疫用弗氏完全佐剂,后两次免疫用等量弗氏不完全佐剂,每隔2周免疫1次),选择血清抗体效价高的小鼠,取脾组织分离脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合后,用纯化的BAG1蛋白经间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞,经多次亚克隆筛选稳定分泌抗BAG1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,收集培养上清,间接ELISA法检测抗体效价和抗体亚型。取BALB/c小鼠4只,液体石蜡腹腔注射(0.5 ml/鼠) 1周后,腹腔注射单克隆杂交瘤细胞106个/鼠,2周后收集腹水,亲和色谱法纯化抗BAG1的单克隆抗体。制备体外诱导和体内形成的弓形虫裂解蛋白,以纯化后的抗BAG1单克隆抗体为一抗,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测ME49虫株中BAG1蛋白的表达情况,间接免疫荧光试验(IFA)检测ME49虫株缓殖子情况。结果RT-PCR扩增获得bag1的开放读码框片段,长690 bp,编码229个氨基酸。重组质粒pET-28a (+)-bag1经菌落PCR和测序后鉴定正确。SDS-PAGE结果显示,重组BAG1蛋白相对分子质量(Mr)约为27 000,以可溶性蛋白和包涵体形式表达。间接ELISA检测结果显示,纯化的BAG1蛋白免疫小鼠3次后,血清抗体平均效价可达1∶102 400。融合筛选获得4株阳性单克隆杂交瘤细胞株,分别为mAb1H03、 mAb4B04、 mAb5H07、 mAb8B12,以mAb4B04单克隆抗体效价最高,达1∶25 600,该抗体亚型为IgG1型。Western blotting结果显示,mAb4B04单克隆抗体可识别体外诱导和体内形成的ME49虫株BAG1蛋白。IFA结果显示,mAb4B04单克隆抗体可检测到体外诱导和体内形成的ME49虫株缓殖子。结论制备了抗弓形虫BAG1的单克隆抗体,其中效价最高的mAb4B04单克隆抗体能特异性识别弓形虫ME49虫株的BAG1蛋白和缓殖子。

关键词：刚地弓形虫缓殖子期抗原1 克隆表达单克隆抗体

弓形虫ROP18蛋白与人视网膜特异性蛋白CLUL1相互作用调节神经细胞凋亡

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弓形虫ROP18蛋白与人视网膜特异性蛋白CLUL1相互作用调节神经细胞...

作者：邹伟浩南方医科大学

学位级别：硕士

背景:弓形虫作为一种机会性致病性原虫,在免疫系统正常的人群中,弓形虫一般为隐性感染。而在长期免疫力低下、免疫抑制或者免疫缺陷的人群中,会引发严重的弓形虫病。比如弓形虫脑炎,弓形虫眼病等。而其中弓形虫眼病发病的分子机制目前... 详细信息

背景:弓形虫作为一种机会性致病性原虫,在免疫系统正常的人群中,弓形虫一般为隐性感染。而在长期免疫力低下、免疫抑制或者免疫缺陷的人群中,会引发严重的弓形虫病。比如弓形虫脑炎,弓形虫眼病等。而其中弓形虫眼病发病的分子机制目前仍不清楚。弓形虫棒状体蛋白ROP18（TgROP18）是弓形虫重要的毒力蛋白,是一种丝/苏氨酸激酶,据文献报道,TgROP18蛋白可以通过磷酸化宿主细胞的关键蛋白,调节宿主免疫,细胞周期、凋亡等相关信号通路,进而促进弓形虫入侵宿主细胞和在宿主细胞内的存活。我们前期利用双分子荧光互补技术（BiFC）筛选与ROP18互作的宿主蛋白实验中,我们筛选到与TgOP1811蛋白互作的宿主人视网膜特异性蛋白CLUL1。本研究通过验证TgROP1811蛋白与CLUL1的互作以及两者的互作特点,研究CLUL1在神经胶质瘤细胞中的功能,以探究CLUL1蛋白在弓形虫眼病中是否可能是发病的一个潜在靶点。方法:构建质粒,体外过表达CLUL1蛋白和TgROP18以及TgROP18突变体蛋白,用FRET和CO-IP方法验证两者之间的相互作用以及互作结构域,应用CRIPR-Cas9的方法构建TgROP18蛋白C端融合表达标签蛋白的ME49虫株,以检测弓形虫内源性ROP18蛋白与CLUL1蛋白相互作用,应用Western Blot检测CLUL1的磷酸化水平、泛素化水平。RNAi敲低CLUL1蛋白,用流式细胞术检测CLUL1在神经细胞中的功能。结果:TgROP18蛋白与CLUL1蛋白存在相互作用,ROP18激酶区是两者之间的互作结构域。ROP18可以促进CLUL1磷酸化,并促进CLUL1泛素化经蛋白酶体途径降解,而且该过程依赖于ROP18蛋白与E3连接酶的结合。通过RNAi敲低细胞内CLUL1后,神经细胞的凋亡率显著上升,CLUL1蛋白发挥抑制凋亡的作用。结论:弓形虫在入侵视网膜神经细胞时,分泌ROP18蛋白,ROP18蛋白发挥其激酶活性,使CLUL1蛋白磷酸化,而磷酸化的CLUL1蛋白被泛素标记,使CLUL1蛋白经泛素-蛋白酶体途径降解,进而抑制CLUL1蛋白抗凋亡相关通路的功能,促进细胞的凋亡,从而可能参与弓形虫眼病的发生。

关键词： TgROP18 CLUL1 互作机制弓形虫眼病

实践教学改革在应用型公共卫生人才培养中的探索

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同方学位论文库

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热带病与寄生虫学 2023年第5期21卷 301-304页

作者：邹伟浩彭鸿娟杨杏芬南方医科大学公共卫生学院广东广州510515

《“健康中国2030”规划纲要》提出我国卫生健康事业要从以治病为中心向以人民健康为中心转变,公共卫生的重要性日益凸显。当前,公共卫生教育的首要任务是培养应用型公共卫生人才,而作为公共卫生人才培养重要环节的实践教学还存在着一... 详细信息

《“健康中国2030”规划纲要》提出我国卫生健康事业要从以治病为中心向以人民健康为中心转变,公共卫生的重要性日益凸显。当前,公共卫生教育的首要任务是培养应用型公共卫生人才,而作为公共卫生人才培养重要环节的实践教学还存在着一流实践教学课程建设不足、公共卫生实践教学“双师制”培养体系不完善、实践教学过程中思政教育被弱化、实践教学效果评价方法简单化等短板。对此,南方医科大学在对预防医学专业本科生的实践教学中,改革实践教学课程,构建多元的实践教学体系,建立师资互通机制,加强实践基地思政教育,建立多维度的实践教学评价体系,旨在提高学生的岗位胜任能力,为培养适应社会发展和公共卫生事业需求的公共卫生人才提供有益参考。

关键词：公共卫生预防医学实践教学应用型人才人才培养

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装配式预应力混凝土小箱梁横隔板设置

广东公路交通 2013年第4期39卷 51-53页

作者：邹伟浩广东肇阳高速公路有限公司广州510850

随着装配式预应力混凝土小箱梁在桥梁工程中的广泛应用,是否在跨中设置横隔板以约束箱梁的扭转等畸变效应逐渐引起设计人员的注意。以实践中的简支小箱梁为例,采用ANSYS有限元软件对是否在桥梁跨中设置中横隔板的不同情况进行对比分析,... 详细信息

随着装配式预应力混凝土小箱梁在桥梁工程中的广泛应用,是否在跨中设置横隔板以约束箱梁的扭转等畸变效应逐渐引起设计人员的注意。以实践中的简支小箱梁为例,采用ANSYS有限元软件对是否在桥梁跨中设置中横隔板的不同情况进行对比分析,结果显示跨中横隔板的设置能改善上部结构的整体性。

关键词：小箱梁横隔板挠度

高速公路沥青路面裂缝病害成因分析及维修措施

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广东公路交通 2009年第3期35卷 23-24,44页

作者：邹伟浩广东省高速公路有限公司广州510100

沥青路面是广东省主要的路面结构形式之一,半刚性基层沥青路面较为普遍。裂缝是半刚性路面早期破损最常见的病害之一,它的危害在于从裂缝中不断进入水份使基层甚至路基软化,导致路面承载能力下降,加速路面破坏。裂缝的养护维修措施主要... 详细信息

沥青路面是广东省主要的路面结构形式之一,半刚性基层沥青路面较为普遍。裂缝是半刚性路面早期破损最常见的病害之一,它的危害在于从裂缝中不断进入水份使基层甚至路基软化,导致路面承载能力下降,加速路面破坏。裂缝的养护维修措施主要有灌缝和压缝两种。

关键词：沥青路面半刚性基层裂缝

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基于近红外反射光谱的外来入侵植物的辨识

光谱学与光谱分析 2009年第11期29卷 2955-2958页

作者：虞佳佳邹伟何勇徐正浩浙江大学生物系统工程与食品科学学院浙江杭州310029 浙江大学环境与资源学院浙江杭州310029

提出了一种利用可见-近红外反射光谱技术对婆婆纳、波斯婆婆纳、直立婆婆纳等3种入侵植物和本地杂草宝盖草的植物辨别方法,可以对外表相似度极高的这4种植物进行有效鉴别。研究在对光谱曲线进行预处理和聚类分析后,随机采用30×4个样本... 详细信息

提出了一种利用可见-近红外反射光谱技术对婆婆纳、波斯婆婆纳、直立婆婆纳等3种入侵植物和本地杂草宝盖草的植物辨别方法,可以对外表相似度极高的这4种植物进行有效鉴别。研究在对光谱曲线进行预处理和聚类分析后,随机采用30×4个样本作为建模样本,其余的20×4个样本作为预测样本,应用独立软模式法SIMCA(soft independent models of class analogy)进行分类,在显著性水平为5%下,其预测分辨率为78.75%,去除婆婆纳后的预测分辨率为90%。根据变量建模能力(modeling power)值,找到敏感波段496～521,589～626和789～926nm,并将相应的波段的光谱值作为最小二乘的支持向量机LS-SVM(least squares support vector machine)的输入,进行建模预测,并以预测结果作为目标函数值,进行遗传算法GA(genetic algorithm)优化,结果发现,预测分辨率达95.35%,辨识效果好,能快速正确区分外来入侵植物。

关键词：可见-近红外光谱外来入侵植物主成分分析遗传算法

1株木质素降解菌的筛选、鉴定及固态发酵产酶优化

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饲料研究 2023年第9期46卷 85-92页

作者：寇慧黄长浩严骋邹伟四川轻化工大学生物工程学院四川宜宾644005

研究旨在通过筛选高效木质素降解菌,优化其产酶过程,提高木质素降解率和秸秆降解率。试验以木质素为唯一碳源初筛,通过苯胺蓝-PDA培养基、愈创木酚-PDA培养基、碱性木质素降解率复筛,最终以在发酵培养基中木质素过氧化酶、锰过氧化酶、... 详细信息

研究旨在通过筛选高效木质素降解菌,优化其产酶过程,提高木质素降解率和秸秆降解率。试验以木质素为唯一碳源初筛,通过苯胺蓝-PDA培养基、愈创木酚-PDA培养基、碱性木质素降解率复筛,最终以在发酵培养基中木质素过氧化酶、锰过氧化酶、漆酶酶活为指标进行筛选,通过单因素和正交法进行固态发酵产酶优化。结果显示,试验筛选出1株高木质素降解率的菌株M20,经形态和内转录间隔区(ITS)序列分析初步确定为Aspergillus oryzae。在以油菜秸秆为基质的发酵培养基上进行产酶优化,秸秆与麸皮比例、发酵时间、氮源添加量为产木质素酶显著影响因子;正交试验确定油菜秸秆固体培养基最优条件为秸秆与麸皮比为2∶1、(NH4)2SO4添加量为3%、发酵4 d。在此条件下,优化后木质素过氧化酶酶活为1796.74 U/g,锰过氧化酶酶活为146.78 U/g,漆酶3.979 U/g,比未优化的3种木质素降解酶分别提高了60.28%、45.14%、27.00%。研究表明,菌株M20在油菜秸秆生物降解方面具有较大的应用前景,可在一定程度上为秸秆资源化利用提供了新的微生物资源。

关键词：油菜秸秆木质素生物降解木质素酶固态发酵

苏北骆马湖浮游植物群落结构及其水质生物评价

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湖泊科学 2018年第1期30卷 183-191页

作者：彭凯李太民刘利邹伟吴天浩龚志军中国科学院南京地理与湖泊研究所湖泊与环境国家重点实验室南京210008 中国科学院大学北京100049 江苏省骆运水利工程管理处宿迁223800

为了解骆马湖浮游植物的群落结构及其水质健康状态,于2014年对骆马湖浮游植物进行逐月野外调查研究.共鉴定出浮游植物7门71种属,其中蓝藻门和硅藻门最多,其次为绿藻门.全湖细胞丰度在1.52×10~6~7.89×10~6 cells/L之间,全湖生物量在0.0... 详细信息

为了解骆马湖浮游植物的群落结构及其水质健康状态,于2014年对骆马湖浮游植物进行逐月野外调查研究.共鉴定出浮游植物7门71种属,其中蓝藻门和硅藻门最多,其次为绿藻门.全湖细胞丰度在1.52×10~6~7.89×10~6 cells/L之间,全湖生物量在0.048~12.44 mg/L之间.非多维度量尺度分析结果显示,骆马湖全湖浮游植物生物量从冬春季喜低温的硅藻门为主演替到夏秋季喜高温的蓝藻门为主,表明骆马湖浮游植物有着明显的季节演替规律.与20世纪相比,骆马湖浮游植物优势种属有着很大的变化,富营养化指示属隐藻、纤维藻、针杆藻、鱼腥藻、伪鱼腥藻等明显增多,表明自20世纪以来,骆马湖富营养化程度正在加剧.与邻近的洪泽湖、南四湖、高邮湖、邵伯湖和宝应湖相比,骆马湖浮游植物细胞丰度高于宝应湖,但低于其他4个湖泊.基于浮游植物的水质评价结果,骆马湖目前处于从寡污带向β-中污带过渡的状态,富营养化程度轻于洪泽湖,与南四湖部分湖区富营养化程度相似.

关键词：浮游植物群落演替生物指标骆马湖指示种富营养化大运河

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番禺区水资源安全评价

环境科学与技术 2010年第S2期33卷 615-620页

作者：邹伟廉浩李耀初海南省环境科学研究院海南海口570206 中山大学环境科学与工程学院广东广州510275

水资源是基础性的自然资源和战略性的经济资源,是经济社会可持续发展和维系生态平衡的重要基础。任何一个国家或地区发展过程中都要消耗大量的水资源,使得区域水资源安全问题越来越突出。文章介绍了水资源安全的基本概念,在对番禺区水... 详细信息

水资源是基础性的自然资源和战略性的经济资源,是经济社会可持续发展和维系生态平衡的重要基础。任何一个国家或地区发展过程中都要消耗大量的水资源,使得区域水资源安全问题越来越突出。文章介绍了水资源安全的基本概念,在对番禺区水资源现状调查的基础上,采用集对分析法与函数曲线法对番禺区水资源安全进行评价,两种评价结果均表明,番禺区水资源安全问题较为严重;对两种方法的评价效果也进行了分析比较。

关键词：水资源安全评价番禺区