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蜂毒肽与基因变构IL-2融合蛋白在肿瘤细胞中的表达及生物学活性研究

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蜂毒肽与基因变构IL-2融合蛋白在肿瘤细胞中的表达及生物学活性研...

作者：邵光灿青岛大学

学位级别：硕士

目的构建融合基因蜂毒肽(melittin)与人变构白介素-2[M-IL-2(88Arg,125Ala)]表达载体,验证构建成功后将重组基因转染进宫颈癌He La细胞,神经胶质瘤U87细胞,检测融合基因[M-IL-2(88Arg,125Ala)]在这两种细胞中的表达以及检测重组蛋白对... 详细信息

目的构建融合基因蜂毒肽(melittin)与人变构白介素-2[M-IL-2(88Arg,125Ala)]表达载体,验证构建成功后将重组基因转染进宫颈癌He La细胞,神经胶质瘤U87细胞,检测融合基因[M-IL-2(88Arg,125Ala)]在这两种细胞中的表达以及检测重组蛋白对宫颈癌He La细胞,神经胶质瘤U87细胞的影响,为蜂毒肽和白介素2在肿瘤方面的基因治疗提供实验基础。方法设计PCR扩增引物,并在引物上添加相应的酶切位点,以p PICZαA/M-IL-2(88Arg,125Ala)为模板,使用PCR方法,获得实验所需要的M-IL-2目的片段。以p LEGFP-C1和p EGFP-N3为载体构建M-IL-2融合基因的真核表达载体p LEGFP-C1-M-IL-2(88Arg,125Ala),p EGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala)。使用质粒提取试剂盒提取重组质粒,采用双酶切和DNA序列的方法鉴定重组质粒,鉴定成功后,使用Lipofectamine 2000脂质体将重组质粒转染进宫颈癌He La细胞和神经胶质瘤细胞U87中。M-IL-2融合蛋白在宫颈癌He La细胞和神经胶质瘤U87细胞中的表达采用RT-PCR及Western blot的方法进行检测,表达验证成功后使用CCK-8的方法及流式细胞仪检测融合蛋白的生活学活性,检测其对宫颈癌He La细胞和神经胶质瘤U87细胞增殖和凋亡的影响。结果重组质粒p LEGFP-C1-M-IL-2(88Arg,125Ala),p EGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala)经过酶切及DNA测序证实构建成功,经过RT-PCR及Western blot检测证实重组基因M-IL-2(88Arg,125Ala)可在宫颈癌细胞He La,神经胶质瘤细胞U87中表达,经过CCK-8实验及细胞流式仪分析融合蛋白在细胞内的表达对以上两种肿瘤细胞的增殖具有一定的抑制作用。结论真核表达载体pLEGFP-C1-M-IL-2(88Arg,125Ala),pEGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala)构建成功,融合基因M-IL-2(88Arg,125Ala)可在He La细胞和U87细胞中表达且融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala)对宫颈癌细胞He La,神经胶质瘤细胞U87增殖具有一定的抑制作用,对Hela细胞的凋亡具有一定的促进作用,为融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala)的进一步研究提供了实验基础。

关键词：白介素2 蜂毒肽融合蛋白真核表达生物活性

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既有铁路双曲线改造成单曲线施工技术

中小企业管理与科技 2011年第9期 102-103页

作者：邵光灿中铁十四局集团第五工程有限公司

本文从技术组织、人员组织、机械组织、安全措施等方面详细介绍了既有铁路两个曲线改造成一个单圆曲线的现场施工技术。

关键词：既有铁路曲线改造施工

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昌邑市相对湿润度指数变化特征分析

农村科学实验 2020年第24期 103-104页

作者：龙晓斌刘亚南胡鲲邵光灿山东省昌邑市气象局山东昌邑261300

基于昌邑国家气象观测站1986~2010年逐日气象观测数据,计算相对湿润度指数(M),分析了昌邑近30年年、季、月尺度干湿变化特征。结果表明:昌邑地区7月、8月属于无旱的月份,3月、4月干旱最为严重,在四个季节当中,除夏季外,其他3个季节,干... 详细信息

基于昌邑国家气象观测站1986~2010年逐日气象观测数据,计算相对湿润度指数(M),分析了昌邑近30年年、季、月尺度干湿变化特征。结果表明:昌邑地区7月、8月属于无旱的月份,3月、4月干旱最为严重,在四个季节当中,除夏季外,其他3个季节,干旱都较为明显,其中春季达到重旱标准,并且干旱有加重趋势,但加重趋势不明显。

关键词：气象观测变化特征湿润度

TRIZ算法在无线充电宝创新设计中的应用研究

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科技创新与应用 2015年第2期5卷 60-61页

作者：盖红辉金刘洋白程程邵光灿黑河学院物理化学系黑龙江黑河164300

源自前苏联的TRIZ理论是解决创新问题的理论。文中对TRIZ理论进行了阐述,对TRIZ理论在无线充电宝创新设计过程中的应用进行了探讨,应用该理论快速有效地找到问题的解决方案,为无线充电宝的推广提供了理论依据。

关键词： TRIZ理论无线充电宝创新

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基于层次分析法暖棚西瓜移栽期评价与选择

农业科学 2023年第10期13卷 971-977页

作者：马英洁邵光灿张芹王成玉申雨欣昌乐县气象局山东潍坊潍坊市气象局山东潍坊

为筛选出昌乐暖棚西瓜的最佳移栽期和适宜移栽期,采用层次分析法对开展的10期暖棚西瓜气象观测与创新种植试验,进行综合评价。以气温、西瓜糖含量、口感、产量、生长日数、价格作为6个指标,确定进行西瓜移栽期评价的3级10个评价因子,建... 详细信息

为筛选出昌乐暖棚西瓜的最佳移栽期和适宜移栽期,采用层次分析法对开展的10期暖棚西瓜气象观测与创新种植试验,进行综合评价。以气温、西瓜糖含量、口感、产量、生长日数、价格作为6个指标,确定进行西瓜移栽期评价的3级10个评价因子,建立其综合评价模型。根据评价结果,将供试的十期西瓜移栽期分为5个等级,I级有第三移栽期,为最佳移栽期。糖含量高,口感非常好,且产量较高,价格高。II级有第五移栽期、第六移栽期、第七移栽期,为适宜移栽期。糖含量和产量、价格均略低于第三期。III级有第一移栽期、第二移栽期、第四移栽期、第八移栽期,为较适宜移栽期。糖含量普遍不高,口感一般,价格不高。IV级有第九移栽期,为较不适宜移栽期。V级有第十移栽期,为不适宜移栽期。综合分析认为,昌乐暖棚西瓜最佳移栽时间为12月下旬,适宜移栽时间为12月6日~1月15日。

关键词：温度西瓜层次分析法移栽期评价

真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(^(88)Arg,^(125)Ala)的构建表达及对神经胶质瘤细胞U87的影响

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中国免疫学杂志 2014年第12期30卷 1647-1651,1657页

作者：邵光灿钱冬萌胡明张丽娜宋旭霞付加朕王斌青岛大学医学院病原生物学教研室青岛266071

目的:以pEGFP-N3为载体,构建融合基因M-IL-2(88Arg,125Ala)的真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala),检测融合基因在神经胶质瘤细胞U87中的表达以及重组蛋白对U87细胞的影响,为癌症的基因治疗提供实验基础。方法:通过PCR获得实验... 详细信息

目的:以pEGFP-N3为载体,构建融合基因M-IL-2(88Arg,125Ala)的真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala),检测融合基因在神经胶质瘤细胞U87中的表达以及重组蛋白对U87细胞的影响,为癌症的基因治疗提供实验基础。方法:通过PCR获得实验所需要的M-IL-2(88Arg,125Ala)基因片段,酶切后克隆入载体pEGFP-N3,构建M-IL-2(88Arg,125Ala)融合基因的真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala)。重组质粒经PCR、限制性内切酶分析及DNA序列测定证实构建成功后,用脂质体LipofectamineTM2000转染神经胶质瘤细胞U87,使用荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR及Western blot检测M-IL-2(88Arg,125Ala)融合蛋白在U87细胞中的表达,CCK-8方法检测融合蛋白对U87细胞的影响并观察细胞形态变化。结果:经PCR、限制性内切酶酶切分析及DNA序列测定证实,重组真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala)构建成功,经RT-PCR及Western blot检测证实重组基因可在U87细胞中表达,CCK-8方法检测到融合蛋白对U87细胞增殖有一定的影响。结论:真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2(88Arg,125Ala)构建成功,融合基因M-IL-2(88Arg,125Ala)可在U87细胞中表达且融合蛋白对肿瘤细胞的增殖有一定影响,为融合毒素M-IL-2(88Arg,125Ala)基因的进一步研究奠定了基础。

关键词：白细胞介素2 蜂毒肽真核表达神经胶质瘤细胞

海洋放线菌F1发酵条件优化及抑菌物质性质的初步研究

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中国海洋药物 2014年第3期33卷 43-48页

作者：邵光灿钱冬萌宋旭霞陈豪秦盼盼王轶王斌青岛大学医学院病原生物学教研室山东青岛266071

目的对筛选出的海洋放线菌F1的发酵培养基及条件进行优化,并对菌株F1分泌的有活性的次级代谢产物的特性进行了初步研究。方法采用单因素实验和正交试验的方法对发酵培养基及发酵条件进行优化,观察pH值、温度、光照、紫外线、储藏温度对... 详细信息

目的对筛选出的海洋放线菌F1的发酵培养基及条件进行优化,并对菌株F1分泌的有活性的次级代谢产物的特性进行了初步研究。方法采用单因素实验和正交试验的方法对发酵培养基及发酵条件进行优化,观察pH值、温度、光照、紫外线、储藏温度对抑菌物质稳定性的影响,了解抑菌物质的极性及疏水特性。结果优化的最佳培养基为：可溶性淀粉20.0g,NaCl 1.0g,胰蛋白胨0.5g,Yeast Extract 2.0g,K2HPO4·3H2O 0.5g,MgSO4·7H2O 0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g,陈海水1000mL,pH 7.4~7.6,固体培养基加1.5%的琼脂粉。摇瓶装量30%,接种量10%,发酵时间168h时抑菌抑菌圈最大,抑菌物质有较好的热、光、紫外线及储藏温度稳定性,pH值在3~12有活性,在强酸环境中失活,耐碱不耐酸,活性物质溶于石油醚和乙酸乙酯,不溶于正丁醇。结论通过优化实验确定了菌株F1最优发酵培养基及发酵条件,抑菌物质有较好的稳定性,有较大极性和水溶性。

关键词：海洋放线菌F1 发酵优化活性物质

1961~2015年拉尼娜对昌邑市旱涝灾害的影响

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农村科学实验 2021年第24期 195-196页

作者：龙晓斌刘亚南邵光灿胡鲲周玉兰山东省昌邑市气象局山东昌邑261300

为揭示拉尼娜事件对昌邑市1961至2015年的旱涝灾害的影响,以昌邑市同期降水量为基础,利用Z指数,分析拉尼娜事件发生期间昌邑市旱涝灾害的发生规律,其研究结论如下:①昌邑市年降水量呈现下降趋势。②昌邑市1961至2015年共有24年涝年、16... 详细信息

为揭示拉尼娜事件对昌邑市1961至2015年的旱涝灾害的影响,以昌邑市同期降水量为基础,利用Z指数,分析拉尼娜事件发生期间昌邑市旱涝灾害的发生规律,其研究结论如下:①昌邑市年降水量呈现下降趋势。②昌邑市1961至2015年共有24年涝年、16年正常年份、15年旱年。③在拉尼娜事件发生时,Z指数呈现出弱拉尼娜事件偏大,强拉尼娜事件偏小的特征。

关键词：旱涝灾害 Z指数拉尼娜事件昌邑市

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比况句式义的浮现与固化

广西大学学报(哲学社会科学版) 2024年 57-68页

作者：许光灿广西大学文学院

学界普遍意识到，比较与比况在形式上有较为明显的差异。但在语义上仍然没有将二者分离开来，只是认为比况是特殊的比较，甚至把比况视为修辞上的比喻。实际上，比况在形式和语用上均显著不同于比较，比况义“X很W”更已发展为独立的句... 详细信息

学界普遍意识到，比较与比况在形式上有较为明显的差异。但在语义上仍然没有将二者分离开来，只是认为比况是特殊的比较，甚至把比况视为修辞上的比喻。实际上，比况在形式和语用上均显著不同于比较，比况义“X很W”更已发展为独立的句式义，与比较义已经相距甚远了。比况句是由比较句发展而来的独立句式，二者之间存在一个过渡状态。比较到比况在语义、形式、语用上出现了多个连续统。这一演变过程受语义推理、语用推理、高频效应、重新分析等机制的深刻影响。比况义“X很W”是比较句在语篇中浮现出来并逐渐固化的句式义，比况句式是交际需求下比较句篇章语法化的结果。

关键词：比较比况句式义浮现语法演变