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原发性胆汁性肝硬化患者Th17细胞体外分化诱导条件的研究

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原发性胆汁性肝硬化患者Th17细胞体外分化诱导条件的研究

作者：邓日辉广州中医药大学

学位级别：硕士

背景Th17细胞是近年来发现的不同于Th1、Th2细胞的CD4+T细胞亚群,通过分泌IL-17、IL-21、IL-22等效应因子在自身免疫疾病和感染性疾病中发挥作用。原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis, PBC)是一类器官特异性自身免疫性肝病,... 详细信息

背景Th17细胞是近年来发现的不同于Th1、Th2细胞的CD4+T细胞亚群,通过分泌IL-17、IL-21、IL-22等效应因子在自身免疫疾病和感染性疾病中发挥作用。原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis, PBC)是一类器官特异性自身免疫性肝病,发病原因不明,可能机体免疫紊乱相关。本研究拟从Th17细胞的角度对PBC进行研究,希望从中找到增强其免疫调节功能的干预措施,为临床治疗PBC提供新的策略和实验依据,具有重要意义。目的本研究拟以新近发现的以分泌IL-17为主要特征的CD4+T细胞亚群—Th17细胞为主要线索,经免疫磁珠分选技术分选出初始T(Naive T)细胞,通过加入细胞因子或细胞因子组合行体外培养,诱导其分化为Th17细胞。应用流式细胞术(FCM)、荧光定量PCR技术和酶联免疫吸附试验(ELISA)等技术评估Th17细胞的最优体外分化条件,同时比较原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者和正常人外周血Th17细胞分化条件的差异。期冀通过研究,初步建立人外周血Th17细胞体外分化诱导条件,并为进一步探索Th17细胞与PBC发病机制的相关性提供实验依据。方法1人外周血Th17细胞体外分化诱导条件的建立：采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC);免疫磁珠分选技术(MACS)从PBMC中进一步分选初始T(Naive T)细胞。将Naive T细胞以1×109／L的密度分4组培养在48孔培养板中,每组设2个复孔,每孔500ul,培养第1天起在各孔均加入anti-CD3、anti-CD28和anti-IL-4、anti-IFN-γ作为基础培养剂后,4组再各自加入不同的细胞因子进行诱导培养：(1)不加任何细胞因子为空白对照组;(2)IL-1β组;(3)IL-1β+IL-6组;(4)IL-1β+IL-6+IL-23组于37℃、5%CO2孵箱中进行细胞培养,每3天换液一次,并及时补充相应的细胞因子。培养9天后在PMA、Ionomycin与monensin的刺激下继续培养4小时,收集培养后的细胞,经流式细胞术评估Th17细胞最佳分化效果。2 PBC患者和正常人外周血Th17细胞分化效果差异的观察：(1)Ficoll-Hypaque密度梯度离心法及免疫磁珠分选技术(MACS)从PBC患者和正常人外周血中分选Naive T细胞,各自按上述条件进行细胞培养。(2)培养72小时收集细胞上清液-80℃迅速冻存,用于IL-17的ELISA检测。(3)细胞培养时每3天换液一次,并及时补充相应的细胞因子,培养9天后在PMA、Ionomycin与monensin的刺激下继续培养4小时。(4)收集培养的细胞洗涤离心,弃上清液,迅速加入Trizol液,提取RNA逆转录成cDNA,经荧光定量PCR检测IL-17mRNA基因的表达量。(5)统计分析并比较PBC患者组与正常人组胞外IL-17含量及胞内IL-17mRNA表达差异,间接分析两组Th17细胞分化效果的差异。结果1流式细胞术检测结果与正常人比较,PBC患者IL-1β+IL-6+IL-23组诱导Naive T细胞分化为Th17细胞频率最高,两者有显著性差异(P<0.01)。对于PBC患者本身,IL-1β组;IL-1β+IL-6组;IL-1β+IL-6+IL-23组均能显著诱导Th17细胞分化(P<0.01);但IL-1β+IL-6+IL-23组Th17细胞分化频率最高,显著高于其它各组(P<0.01)。2 ELISA检测结果收集细胞培养上清液经ELISA检测表明：与正常人比较,PBC患者IL-1β+IL-6+IL-23组培养上清液中IL-17浓度更高,两者有统计学差异(P<0.05)。3荧光定量PCR检测结果IL-1β+IL-6+IL-23联用时,PBC患者外周血Naive T细胞经培养9天后,经荧光定量PCR检测：IL-17mRNA基因表达率是正常人的3.73倍,且两者有显著性差异(P<0.01)。结论1 IL-1β、IL-6、IL-23单独或联用均能诱导PBC患者Th17细胞分化,且IL-1β、IL-6、IL-23联用时其效果明显高于正常人。联用IL-1β、IL-6、IL-23时可使PBC患者Th17细胞体外分化效率达到最佳。2 IL-1β、IL-6、IL-23联用能有效诱导PBC患者和正常人Naive T向Th17细胞分化,且两者分化效果差异显著,表明Th17细胞体

关键词：原发性胆汁性肝硬化 Th17细胞 IL-17 细胞因子免疫磁珠分选技术荧光定量PCR 流式细胞术酶联免疫吸附试验

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HJ物流公司绩效管理研究

HJ物流公司绩效管理研究

作者：邓日辉上海交通大学

学位级别：硕士

绩效管理对组织管理发挥的重要性已成为全球范围的业界共识。这不仅是因绩效管理对组织战略目标的实现起到重要作用,而且绩效管理对员工的发展和组织竞争力的增强具有重要的现实意义。对绩效管理的研究也越来越受关注。绩效管理作为一... 详细信息

绩效管理对组织管理发挥的重要性已成为全球范围的业界共识。这不仅是因绩效管理对组织战略目标的实现起到重要作用,而且绩效管理对员工的发展和组织竞争力的增强具有重要的现实意义。对绩效管理的研究也越来越受关注。绩效管理作为一个系统,包括绩效计划、绩效实施、绩效考评、绩效反馈和绩效结果利用等一系列管理环节,系统的构建涉及到对绩效管理系统目的的选择及对绩效管理的层次和流程进行分析等过程。本文是应用绩效管理的相关理论知识比较全面、系统地对HJ物流公司绩效管理现状以及存在的问题进行了分析,并对如何实施有效的绩效管理进行了相应的研究。在研究中,充分应用SWOT分析工具确定转型期公司的发展战略,把平衡记分卡(BSC)和绩效关键指标(KPI)相结合,层层分解公司战略目标。为更好实现战略目标,重新调整公司组织机构设置并对各部门、岗位职责进行分工,设计出KPI绩效考评表,构建出HJ物流公司绩效管理体系。笔者希望本文能对“事转企”的国有物流企业改进绩效管理体系有所帮助。

关键词：绩效管理平衡记分卡(BSC) 关键绩效指标(KPl) 战略目标

自身免疫性疾病中Th_(17)细胞效应因子的生物学功能研究进展

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广东医学 2009年第6期30卷 993-995页

作者：邓日辉陈曲波广东省中医院免疫室广州510120

近来发现,机体存在一种新的CD4+~T细胞亚型--Th_(17)细胞.该类IL-23相关细胞通过分泌IL-17,IL-6和IL-21等多种效应因子介导炎症反应,参与自身免疫病.

关键词：自身免疫性疾病 T细胞亚型效应因子功能研究进展 CD4^+T细胞生物学介导炎症反应免疫调节效应

白细胞介素-1β和白细胞介素-23对原发性胆汁性肝硬化患者Th17细胞的影响

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广东医学 2014年第8期35卷 1238-1240页

作者：邓日辉周迎春陈曲波广州中医药大学第一附属医院检验科广州510405 广东省中医院检验科广州510120

目的探讨细胞因子IL-1β与IL-23对原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血Th17细胞诱导分化效应。方法分离PBC患者及正常人外周血初始T细胞,分为4组,空白对照组仅为基础培养基,不加细胞因子;IL-1β组基础培养基加入细胞因子IL-1β培养;IL-1... 详细信息

目的探讨细胞因子IL-1β与IL-23对原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血Th17细胞诱导分化效应。方法分离PBC患者及正常人外周血初始T细胞,分为4组,空白对照组仅为基础培养基,不加细胞因子;IL-1β组基础培养基加入细胞因子IL-1β培养;IL-1β+IL-6组基础培养基加入细胞因子IL-1β+IL-6培养;IL-1β+IL-6+IL-23组基础培养基加入细胞因子IL-1β、IL-6、IL-23培养。诱导其分化为Th17细胞,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR评估Th17细胞的最佳分诱导条件,并比较PBC患者和正常人Th17细胞分化效果差异。结果与空白对照组比较,IL-1β组、IL-23组、IL-1β+IL-23组Th17细胞中IL-17 mRNA表达增高,差异有统计学意义(P0.05),但同时低于IL-1β+IL-23组(P0.05)。而IL-1β+IL-23组中,PBC患者组IL-17水平高于正常人组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 IL-1β、IL-23能诱导PBC患者Th17细胞分化,而联用IL-1β、IL-23时,可使PBC患者Th17细胞体外分化效应最佳。

关键词：原发性胆汁性肝硬化 Th17细胞细胞因子

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油菜花开(外二首)

参花(下) 2019年第1期 71-72页

作者：邓日辉

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浅议城市生活固体废弃物物流

物流工程与管理 2010年第9期32卷 37-39页

作者：邓日辉上海环境实业有限公司上海200336

随着经济的发展、人口的增长和城市化进程的加速,我国城市生活固体废弃物在逐年增加。尤其是在人口集中的城市,城市生活固体废弃物造成的危害非常突出,已严重影响着城市居民的生活质量和身体健康。城市生活固体废弃物的复杂化和难处理... 详细信息

随着经济的发展、人口的增长和城市化进程的加速,我国城市生活固体废弃物在逐年增加。尤其是在人口集中的城市,城市生活固体废弃物造成的危害非常突出,已严重影响着城市居民的生活质量和身体健康。城市生活固体废弃物的复杂化和难处理、难回收的特性成为我国政府最头疼的问题之一。为了能够有效地处理城市生活固体废弃物,文中从废弃物物流特性研究入手,对国内废弃物物流的现状进行分析,参考国外废弃物物流的先进做法和经验,结合我国实际,进而提出解决相关问题的方法,希望为我国处理城市生态环境问题提供借鉴和依据。

关键词：废弃物生活固体废弃物废弃物物流

原发性胆汁性肝硬化患者辅助性T细胞17及白细胞介素-17A表达的初步研究

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中华肝脏病杂志 2010年第5期18卷 379-380页

作者：陈颖邓日辉周丹孙静黄羽曾星陈曲波广州中医药大学第二附属医院免疫室 510120 广州中医药大学第二附属医院中心实验室 510120

本研究通过对原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis,PBC）患者外周血辅助性T淋巴细胞（Th）17/CD4＋T淋巴细胞（简称T细胞）比例和白细胞介素（IL）-17A表达水平的检测,为进一步研究Th17细胞在自身免疫性肝病中的作用提供实... 详细信息

本研究通过对原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis,PBC）患者外周血辅助性T淋巴细胞（Th）17/CD4＋T淋巴细胞（简称T细胞）比例和白细胞介素（IL）-17A表达水平的检测,为进一步研究Th17细胞在自身免疫性肝病中的作用提供实验依据.

关键词：肝硬化,胆汁性自身免疫疾病白细胞介素类

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胸苷激酶1在肿瘤疾病中的应用研究

热带医学杂志 2009年第9期9卷 1084-1087页

作者：邓日辉陈曲波广州中医药大学第二附属医院检验科广州510120

胸苷激酶(TK,ATP:thymidine5′-phosphotransferase,EC.2.***.1.21,简称TK)是DNA合成过程中的关键酶之一,在ATP和Mg2+参与下,催化脱氧胸苷(TdR)为脱氧1-磷酸胸苷酸(dTMP)。TK在人类细胞中以两种同功酶形式存在:细胞质胸苷激酶(TK1)和线粒体胸苷激酶(TK2)。TK1与DNA复制密切相关,在细胞周期G1期含量较低,S期逐渐升高,到G2期最高,临床研究证明,TK1在95%的恶性肿瘤细胞中都有升高,故TK1被认为是一种极具生命潜力的细胞增殖标志物,它在肿瘤早期发现、肿瘤疗效评估、肿瘤预后判断等方面都有广阔的临床应用前景。有鉴于此,本文就TK1在肿瘤疾病中的应用研究作一简要综述。

关键词：胸苷激酶1 肿瘤增殖标志物

IL-1β、IL-6和IL-23对原发性胆汁性肝硬化患者Th17细胞形成的影响

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中国免疫学杂志 2010年第5期26卷 449-452页

作者：邓日辉陈颖黄羽孙静何敏周丹曾星陈曲波广州中医药大学第二临床医学院免疫室广州510120 广州中医药大学第二临床医学院中心实验室广州510120

目的:研究IL-1β、IL-6和IL-23对原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者Th17细胞形成的影响,以探讨PBC患者与正常人Th17细胞体外分化条件的异同。方法:从PBC患者和正常人外周血中分离初始T细胞,在以anti-CD3、anti-CD2... 详细信息

目的:研究IL-1β、IL-6和IL-23对原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者Th17细胞形成的影响,以探讨PBC患者与正常人Th17细胞体外分化条件的异同。方法:从PBC患者和正常人外周血中分离初始T细胞,在以anti-CD3、anti-CD28和anti-IL-4、anti-IFN-γ作为基础培养基条件下,加入不同细胞因子分组培养,诱导其分化为Th17细胞,分组情况:①不加任何细胞因子为空白对照组;②IL-1β组;③IL-1β+IL-6组;④IL-1β+IL-6+IL-23组。培养后行流式细胞术(flowcy-tometry,FCM)评估各组Th17细胞分化效果。结果:与正常人比较,PBC患者IL-1β+IL-6+IL-23组诱导Th17细胞分化的频率最高,两者有显著性差异(P<0.01)。对于PBC患者本身,IL-1β组;IL-1β+IL-6组;IL-1β+IL-6+IL-23组均能显著诱导Th17细胞分化(P<0.01);而IL-1β+IL-6+IL-23组Th17细胞分化频率最高,显著高于其它各组(P<0.01)。结论:IL-1β、IL-6、IL-23单独或联用均能诱导PBC患者Th17细胞分化,且IL-1β、IL-6、IL-23联用时其效果明显高于正常人。联用IL-1β、IL-6、IL-23时可使PBC患者Th17细胞体外分化效率达到最佳。

关键词：原发性胆汁性肝硬化 Th17细胞细胞因子流式细胞术