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补阳还五汤苷类有效组分及其有效成分配伍对血管平滑肌细胞增殖及相关信号转导通路的影响

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中国中药杂志 2016年第10期41卷 1889-1897页

作者：曹浪邓常清湖南中医药大学分子病理实验室中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室湖南长沙410208

研究补阳还五汤苷类有效组分和其主要有效成分黄芪甲苷、苦杏仁苷、芍药苷及其配伍抗血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的作用,阐明其抗VSMC增殖的主要药效物质,并从细胞信号转导途径研究其作用机制。大鼠口服给药... 详细信息

研究补阳还五汤苷类有效组分和其主要有效成分黄芪甲苷、苦杏仁苷、芍药苷及其配伍抗血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的作用,阐明其抗VSMC增殖的主要药效物质,并从细胞信号转导途径研究其作用机制。大鼠口服给药后制备含药血浆。培养大鼠主动脉VSMC,采用血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)刺激VSMC增殖,加入含药血浆,测定细胞增殖活性、细胞周期及其相关蛋白表达、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、磷脂酰肌醇3激酶(phos-phatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)、Janus激酶/信号转导与激活因子(Janus kinase/signal transducer and activator of transcription,JAK/STAT)信号通路相关蛋白表达。结果显示,PDGF刺激后,VSMC增殖活性增强(P<0.01),G0/G1期细胞减少(P<0.01),S/M期细胞增多(P<0.01),同时细胞周期相关蛋白PCNA,cyclin D1蛋白表达增强(P<0.01)。苷类组分、3个主要有效成分黄芪甲苷、芍药苷、苦杏仁苷及其配伍均可抑制细胞增殖(P<0.05或P<0.01),作用呈量效关系和时效关系;且可使G0/G1期细胞增多(P<0.01),S/M期细胞减少(P<0.01),PCNA,cyclin D1蛋白表达下调(P<0.01),3个有效成分配伍的作用强于单个有效成分(P<0.05)。PDGF诱导VSMC增殖后,p-ERK1/2表达增强(P<0.01),PI3K表达降低(P<0.01),p-PI3K表达增强(P<0.01),STAT3表达降低(P<0.01),p-STAT3表达增高(P<0.01)。苷类有效组分和主要有效成分黄芪甲苷、芍药苷、苦杏仁苷及其配伍可使p-ERK1/2表达降低(P<0.05),PI3K表达升高(P<0.01),p-PI3K表达降低(P<0.05或P<0.01),STAT3表达升高(P<0.01),p-STAT3表达下调(P<0.05或P<0.01)。上述结果表明PDGF可诱导VSMC细胞周期转化,使VSMC增殖。其机制与ERK,PI3K/Akt,JAK/STAT信号通路激活有关。补阳还五汤苷类有效组分和其主要有效成分黄芪甲苷、芍药苷、苦杏仁苷及其配伍可抑制VSMC细胞周期转换,具有抗VSMC增殖的作用,其作用机制与其抑制PI3K/Akt、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、JAK/STAT 3个信号通路激活有关。黄芪甲苷、芍药苷、苦杏仁苷为其抗VSMC增殖的主要有效成分,三者配伍对VSMC增殖的抑制具有增强作用。

关键词：补阳还五汤苷类有效组分黄芪甲苷苦杏仁苷芍药苷血管平滑肌细胞增殖细胞周期

基于网络药理学的降脂理肝汤治疗非酒精性脂肪肝病作用机制研究

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中草药 2018年第15期49卷 3493-3500页

作者：唐标邓常清湖南中医药大学湖南长沙410028

目的筛选降脂理肝汤主要活性成分,预测其活性成分的作用靶点,探讨降脂理肝汤治疗非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的多成分-多靶点-多通路作用机制。方法通过多个数据库联合检索并筛选降脂理肝汤活性成分和... 详细信息

目的筛选降脂理肝汤主要活性成分,预测其活性成分的作用靶点,探讨降脂理肝汤治疗非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的多成分-多靶点-多通路作用机制。方法通过多个数据库联合检索并筛选降脂理肝汤活性成分和其作用靶点以及NAFLD相关靶点,并预测降脂理肝汤治疗NAFLD的潜在靶点。采用Cytoscape软件构建降脂理肝汤活性成分-作用靶点网络,通过Cytoscape的插件Clue GO对靶点基因功能及通路进行富集分析。结果网络分析结果表明,从降脂理肝汤中筛选得到82个活性成分,涉及NAFLD靶点53个,靶点主要关联NAFLD中胰岛素抵抗、氧化应激和炎症反应,并且参与了NAFLD中PI3K/Akt信号通路、炎症小体途径、白细胞介素-10(IL-10)信号通路以及T细胞信号通路,这些生物过程和信号通路介导了降脂理肝汤干预NAFLD潜在机制。结论为进一步深入研究降脂理肝汤治疗NAFLD作用机制提供了重要依据。

关键词：降脂理肝汤非酒精性脂肪肝病网络药理学靶点胰岛素抵抗氧化应激炎症

黄芪-当归通过TGF-β_(1)/Smad2信号途径抑制兔血管内膜增生模型外膜成纤维细胞的活化作用

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中国实验方剂学杂志 2023年第3期29卷 61-69页

作者：李霞曹旺邓常清湖南中医药大学中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室长沙410028 湖南省中医药研究院长沙410028

目的:探讨黄芪-当归配伍对兔血管内膜增生模型血管外膜成纤维细胞(VAF)活化的影响及其作用机制。方法:清洁级家兔,雌雄各半,随机分为假手术组、模型组、单用黄芪组(1 g·kg^(-1))、单用当归组(1 g·kg^(-1))、黄芪-当归1∶1组(黄芪1 g·... 详细信息

目的:探讨黄芪-当归配伍对兔血管内膜增生模型血管外膜成纤维细胞(VAF)活化的影响及其作用机制。方法:清洁级家兔,雌雄各半,随机分为假手术组、模型组、单用黄芪组(1 g·kg^(-1))、单用当归组(1 g·kg^(-1))、黄芪-当归1∶1组(黄芪1 g·kg^(-1)+当归1 g·kg^(-1))、黄芪-当归1∶5组(黄芪1 g·kg^(-1)+当归5 g·kg^(-1))、黄芪-当归5∶1组(黄芪5 g·kg^(-1)+当归1 g·kg^(-1))、阿托伐他汀钙组(5 mg·kg^(-1)),采用颈总动脉套管复合高胆固醇饮食制备家兔血管内膜增生模型,假手术组只进行分离操作,不进行套管。术后第1天开始假手术组喂饲普通饲料,其余各组喂饲高胆固醇饲料(2%胆固醇+3%橄榄油+95%普通饲料),同时各用药组给予相应药物灌胃,假手术组、模型组给予等体积蒸馏水灌胃,持续给药28 d。实验结束后腹主动脉采血,马松(Masson)染色观察血管外膜形态学变化,免疫组化法检测外膜局部促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)的表达,免疫荧光双标法测定外膜成纤维细胞标记物波形蛋白(Vimentin)及肌成纤维细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达反映VAF活化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测相关通路蛋白转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、Smad2、磷酸化(p)-Smad2表达。结果:与假手术组比较,模型组血管外膜增生明显,损伤血管局部TNF-α、IL-1β表达显著升高,受损段血管α-SMA、Vimentin、TGF-β_(1)、Smad2、p-Smad2表达均明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,黄芪-当归1∶1、5∶1组可使血管外膜增生减轻,血管局部TNF-α、IL-1β表达降低,α-SMA、Vimentin表达下调,并且可降低TGF-β_(1)、Smad2、p-Smad2表达(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芪当归配伍可抑制血管内膜增生模型的外膜增生,抑制外膜成纤维细胞向肌成纤维细胞转化,减轻血管局部炎症反应,以黄芪-当归1∶1、5∶1组的作用明显。其作用机制可能与黄芪当归配伍抑制TGF-β_(1)/Smad2信号通路激活有关。

关键词：黄芪当归血管外膜成纤维细胞肌成纤维细胞转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))/Smad2信号通路

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中药复方有效组分研究的思路与实践

中西医结合学报 2010年第12期8卷 1107-1113页

作者：邓常清湖南中医药大学中西医结合学院湖南长沙410208

作者通过分析目前中药复方药效物质的研究现状并结合自己的研究成果,指出对中药复方药效物质的研究应当根据其功能主治来研究有效组分的作用,从而确定复方某一药效的主要有效组分,然后开展有效组分配伍研究,研制有效组分配伍复方。作者... 详细信息

作者通过分析目前中药复方药效物质的研究现状并结合自己的研究成果,指出对中药复方药效物质的研究应当根据其功能主治来研究有效组分的作用,从而确定复方某一药效的主要有效组分,然后开展有效组分配伍研究,研制有效组分配伍复方。作者进一步强调重视有效组分的配伍研究、加强复方功能组分与有效组分关系的研究及多环节、多靶点开展复方有效组分作用的研究是深化中药复方有效物质研究的重要途径。

关键词：中药复方有效组分研究设计

补阳还五汤有效组分对血管内皮细胞黏附分子表达的影响及其信号转导机制

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中国中西医结合杂志 2009年第5期29卷 430-434页

作者：欧明娥唐利文李花邓常清湖南中医药大学病理生理实验室长沙410007 广东肇庆医学高等专科学校肇庆526000

目的研究补阳还五汤有效组分生物碱、苷对凝血酶刺激的血管内皮细胞株黏附分子表达的影响及其信号转导机制。方法(1)体外培养脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞,以凝血酶(Thr)刺激,加入原方、生物碱、苷后培养,免疫细胞化学法检测黏附分子PEC... 详细信息

目的研究补阳还五汤有效组分生物碱、苷对凝血酶刺激的血管内皮细胞株黏附分子表达的影响及其信号转导机制。方法(1)体外培养脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞,以凝血酶(Thr)刺激,加入原方、生物碱、苷后培养,免疫细胞化学法检测黏附分子PECAM-1(CD31)、ICAM-1(CD54)、E-selectin和PKCα的表达;(2)培养的ECV-304细胞,分别给予Thr、Thr+H7[1-(5-异喹啉磺酰基)-2-甲基哌嗪]、PMA(佛波脂)、PMA+H7、Thr+CATG(组织蛋白酶-G)、Thr+原方、Thr+生物碱、Thr+苷,免疫细胞化学法检测细胞蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(phospho-p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38MAPK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phospho-extracellular signal regula-ted kinase,p-ERK)和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)表达的变化。结果(1)凝血酶刺激后黏附分子PECAM-1、ICAM-1和E-selectin增强(P<0.05)。与凝血酶组比较,原方组这3种黏附分子表达降低(P<0.05);生物碱组和苷组PECAM-1、ICAM-1表达降低(P<0.05),E-selectin表达无显著变化;(2)凝血酶可促进ECV-304细胞PKCα的表达(P<0.01)。PKC激活剂PMA刺激细胞后,PKCα表达增强(P<0.01);PKC抑制剂H7作用于PMA刺激的ECV-304细胞后,PKCα表达被抑制;PAR-1抑制剂CATG作用于凝血酶刺激的细胞后,PKCα表达被显著抑制(P<0.05)。原方(50、100 mg/mL)、生物碱(2 mg/mL)和苷(1.25、2.5、5 mg/mL)均可显著抑制凝血酶诱导的PKCα表达(P<0.05);(3)凝血酶刺激后细胞p-p38MAPK及p-ERK表达无变化,加入PMA、H7、CATG后,p-p38MAPK及p-ERK表达亦无变化。原方及有效组分生物碱和苷对p-p38MAPK和p-ERK表达无显著影响;(4)各组NF-κB的表达均无显著变化。结论补阳还五汤可下调凝血酶诱导的ECV-304细胞黏附分子的表达,生物碱和苷可能是方中产生该作用的有效物质。凝血酶激活ECV-304细胞的作用主要是通过PKC活化而介导的,p38MAPK、ERK、NF-κB信号通路并不是凝血酶活化ECV-304细胞的主要信号途径,补阳还五汤及其有效组分生物碱、苷可能通过抑制凝血酶激活PKC这一信号途径而发挥其抗凝血酶活化血管内皮细胞的作用。

关键词：补阳还五汤血管内皮细胞黏附分子信号转导

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面向制鞋企业的虚拟试鞋关键技术研究与实现

面向制鞋企业的虚拟试鞋关键技术研究与实现

作者：邓常清河北工程大学

学位级别：硕士

虚拟试鞋对制鞋企业中鞋靴产品的研发与迭代升级有着重要作用,数据管理,脚楦匹配和脚模型变形是虚拟试鞋过程中的关键技术。本文中结合数据库技术,计算机图形学知识以及微分域变形技术构建了虚拟试鞋系统,对虚拟试鞋关键技术进行了研究... 详细信息

虚拟试鞋对制鞋企业中鞋靴产品的研发与迭代升级有着重要作用,数据管理,脚楦匹配和脚模型变形是虚拟试鞋过程中的关键技术。本文中结合数据库技术,计算机图形学知识以及微分域变形技术构建了虚拟试鞋系统,对虚拟试鞋关键技术进行了研究与实现。本文的主要研究内容有:在C++以及PHP开发环境中连接MySQL数据库,通过建立数据库、数据表实现对鞋模型、脚模型以及鞋楦模型数据的有效管理;增加身份验证程序,保证用户数据安全;通过PHP实现在网页端对数据库的更新与维护。提出了一种基于OBB包围盒与平面识别相结合的脚楦匹配算法,首先通过OBB包围盒确定脚模型大致方向,然后通过平面识别,精确定位脚底平面,得到脚模型数据信息,将关键信息与鞋楦数据库中信息比对,确定大小相当的鞋楦模型,然后以脚底平面中心为特征点,将脚模型与鞋楦模型移动至同一空间位置,通过旋转变换使脚底平面重合,完成脚楦匹配。该匹配算法与脚模型的初始姿态以及脚踝部分长度无关,通用性较好。提出了一种将特征曲线与微分坐标相结合的脚模型变形算法,分别求取鞋楦模型特征曲线与脚模型特征曲线的关联点,在各个关联点处建立局部正交标架,将特征曲线上各个关联点局部正交标架之间的旋转变换转化为脚模型三角网格梯度场的改变,通过构建泊松方程,求解梯度场改变之后的脚模型网格顶点坐标,得到变形后的脚模型。该变形方法结合微分域变形方法,可以较好的保持脚模型的几何细节特征。以MFC程序为基础,整合OpenGL函数库及MySQL数据库,构建虚拟试鞋平台。实现了虚拟试鞋中的数据管理、模型文件的读取及三维显示、脚楦模型匹配以及脚模型变形等关键功能。

关键词：虚拟试鞋 MySQL数据库脚楦匹配脚模型变形微分域变形

基于网络药理学探讨黄芪-当归配伍活性成分改善血管内膜增生的作用机制

同方学位论文库评论

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中草药 2020年第15期51卷 3987-3995页

作者：李霞曹旺唐标邓常清湖南中医药大学中西医结合学院湖南长沙410028 湖南中医药大学医学院湖南长沙410028

目的采用网络药理学方法探讨黄芪-当归配伍改善血管内膜增生的药效物质和可能的作用靶点。方法利用TCMSP数据库,获取黄芪-当归的有效成分,利用Pharmmaper数据库搜集活性成分所对应的靶标。通过Genecards、DigSeE和OMIM数据库,收集血管... 详细信息

目的采用网络药理学方法探讨黄芪-当归配伍改善血管内膜增生的药效物质和可能的作用靶点。方法利用TCMSP数据库,获取黄芪-当归的有效成分,利用Pharmmaper数据库搜集活性成分所对应的靶标。通过Genecards、DigSeE和OMIM数据库,收集血管内膜增生相关的靶标,并与药物作用靶标相比较,筛选出共同部分,作为药物成分作用的预测靶标。利用STRING获取预测靶蛋白之间的相互关系,根据相互关系大小筛选出核心靶标。利用Cytoscape 3.6.1软件,绘制"药物-成分-疾病-靶标"网络图、核心靶标相互作用网络图。用R语言进行核心靶标的KEGG通路富集分析和GO生物过程分析。结果收集到黄芪-当归药对的20个活性成分,共得到193个潜在药物作用靶点、487个潜在疾病靶点,主要作用于EGFR、ESR1、ALB、MAPK8、PGR等多个靶标,涉及PI3K-Akt、MAPK、Ras等多条信号通路以发挥抗血管内膜增生的作用。结论基于网络药理学方法,初步探讨了黄芪-当归配伍改善血管内膜增生可能的靶标和信号通路,可为黄芪-当归配伍作用机制的研究提供参考。

关键词：黄芪当归血管内膜增生网络药理学作用靶标

补阳还五汤有效组分对血管内皮细胞抗血栓功能及蛋白激酶C的影响

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中草药 2008年第10期39卷 1514-1520页

作者：欧明娥唐利文邓常清湖南中医药大学中西医结合学院湖南长沙410007

目的探讨补阳还五汤及其有效组分生物碱、苷对凝血酶诱导的血管内皮细胞抗血栓功能改变及蛋白激酶C(PKC)活化的影响。方法以凝血酶(10 U/mL)作用于培养的人脐静脉内皮细胞(ECV304),同时加入药物,24 h后测定上清液中组织型纤溶酶原激活物... 详细信息

目的探讨补阳还五汤及其有效组分生物碱、苷对凝血酶诱导的血管内皮细胞抗血栓功能改变及蛋白激酶C(PKC)活化的影响。方法以凝血酶(10 U/mL)作用于培养的人脐静脉内皮细胞(ECV304),同时加入药物,24 h后测定上清液中组织型纤溶酶原激活物(tPA)和纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)水平、细胞组织因子(TF)、组织因子途径抑制物(TFPI)、凝血酶调节蛋白(TM)mRNA表达及PKCα蛋白表达。结果凝血酶作用内皮细胞后,tPA释放增加(P0.05);PKCα表达增强(P0.05);苷(1.25 mg/mL)可使凝血酶诱导的tPA分泌增加(P<0.05);原方、生物碱(2 mg/mL)和苷(5 mg/mL)均可抑制内皮细胞分泌PAI-1(P<0.01)。原方、生物碱(1,2 mg/mL)和苷均可抑制凝血酶诱导的TF mRNA表达增强;生物碱(0.5和1 mg/mL)可抑制TFPI mRNA表达(P<0.05);各药对TM mRNA表达无显著影响;原方、生物碱和苷均可抑制凝血酶诱导的内皮细胞PKCα表达的增强(P<0.01)。PKC激活剂佛波酯(PMA)刺激内皮细胞后,PKCα被激活(P<0.01);PKC抑制剂H7作用于PMA刺激的内皮细胞后,PKCα表达增强不明显,PAR-1受体抑制剂CATG作用于凝血酶刺激的ECV304细胞后,PKCα表达显著抑制(P<0.05)。结论凝血酶可诱导内皮细胞抗血栓性发生变化。补阳还五汤原方、生物碱和苷对凝血酶诱导的血管内皮细胞抗凝、纤溶功能的改变具有调节作用,使血管内皮细胞的抗凝、纤溶作用趋于正常,其作用可能主要是通过抑制凝血酶诱导的PKCα的激活而介导的。生物碱和苷类有效组分可能为该方抗血栓作用的药效物质基础。

关键词：补阳还五汤血管内皮细胞组织型纤溶酶原激活物纤溶酶原激活物抑制物-1 蛋白激酶C

黄芪甲苷配伍三七总皂苷对OGD/R大鼠骨髓间充质干细胞增殖、凋亡、迁移及神经分化的影响

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中草药 2019年第23期50卷 5795-5801页

作者：刘晓丹丁煌邓常清湖南中医药大学分子病理实验室中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室

目的观察黄芪甲苷(ASTIV)配伍三七总皂苷(PNS)对氧糖剥夺后再复糖复氧(OGD/R)大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、凋亡、迁移及神经分化的影响。方法全骨髓贴壁法分离、培养、扩增、纯化BMSCs,流式细胞仪检测BMSCs表面标志物CD29、CD90、... 详细信息

目的观察黄芪甲苷(ASTIV)配伍三七总皂苷(PNS)对氧糖剥夺后再复糖复氧(OGD/R)大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、凋亡、迁移及神经分化的影响。方法全骨髓贴壁法分离、培养、扩增、纯化BMSCs,流式细胞仪检测BMSCs表面标志物CD29、CD90、CD34、CD45阳性表达率。取第3代BMSCs,采用AST IV与PNS高(100μmol/L+60μmol/L)、中(50μmol/L+30μmol/L)、低(25μmol/L+15μmol/L)剂量配伍预处理24 h,以OGD/R建立缺血再灌注损伤模型,同时设立对照组和模型组。CCK-8法测定细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移,巢蛋白(Nestin)/神经元特异性烯醇化酶(NSE)、Nestin/胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光双标观察BMSCs向神经元及星形胶质细胞分化情况。结果成功培养分离BMSCs,流式细胞仪检测CD29、CD90阳性率分别为94.23%、94.69%;而CD34、CD45阳性表达率分别为5.76%、5.31%;与对照组比较,模型组细胞存活数量明显减少(P<0.05)、细胞凋亡率显著增加(P<0.05),与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍均能促进BMSCs增殖(P<0.05、0.01),并抑制细胞凋亡(P<0.05、0.01);与对照组比较,模型组、AST IV与PNS不同剂量配伍均能促进BMSCs迁移(P<0.05),与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍组的迁移细胞数量明显增加(P<0.05);与对照组比较,模型组与AST IV与PNS不同剂量配伍组均能促进BMSCs向神经元及星形胶质细胞分化(P<0.01),与模型组比较,ASTIV与PNS不同剂量配伍组的Nestin/NSE、Nestin/GFAP阳性表达率明显增高(P<0.01)。结论ASTIV配伍PNS在体外能促进缺血再灌注模型BMSCs增殖、迁移,抑制其凋亡,并诱导其向神经元、星形胶质细胞定向分化。

关键词：黄芪甲苷三七总皂苷骨髓间充质干细胞脑缺血再灌注凋亡迁移神经分化