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李树皮坏死茎痘伴随病毒RdRp蛋白介导的体外转录体系的创建

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植物病理学报 2024年第4期54卷 835-842页

作者：孙庆丰刘志菲陈妮迟胜起原雪峰曹欣然青岛农业大学青岛266109 山东农业大学泰安271018 寿光市蔬菜高科技示范园管理服务中心寿光262700 烟台市福山区农业农村局福山264000

本研究针对李树皮坏死茎痘病毒(plumbark necrosis stempitting-associated virus,PBNSPaV),一种长线型病毒科(Closteroviridae)、葡萄卷叶病毒属(Ampelovirus)的正单链植物RNA病毒,利用大肠杆菌进行异源表达和纯化其编码的RNA依赖的RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase,RdRp)。通过体外实验发现,异源表达的重组RdRp具备复制酶活性,并能够识别PBNSPaV基因组的3'UTR区域,从而建立了RdRp介导的PBNSPaV体外转录体系。樱桃上病毒病多存在复合侵染现象,同科病毒之间的RdRp能否具有通用性未见报道,本研究选取田间对产量影响较重的同科病毒樱桃小果1号病毒(little cherry virus-1,LChV-1),利用已经建立的该病毒体外转录体系探究RdRp的通用性,实验结果显示,异源表达的LChV-1RdRp无法有效识别PBNSPaV相关启动子序列,表明该两种病毒的RdRp不具有通用性。本试验所创建的体外转录体系可用于研究PBNSPaV复制调控研究。

关键词：李树皮坏死茎痘伴随病毒樱桃小果1号病毒体外转录 RNA依赖的RNA聚合酶

马铃薯气生茎腐病pcc-pmrA基因的克隆与原核表达

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马铃薯气生茎腐病pcc-pmrA基因的克隆与原核表达

第二十五届中国马铃薯大会

作者：张兆良朱艳慧李文义谢鑫张金明常云李光菊张琼李颍风曹欣然迟胜起张剑峰青岛农业大学内蒙古民丰种业有限公司陇南市种子管理总站

以马铃薯气生茎腐病病原Pectobacterium carotovorum ***(Pcc),克隆了Pcc-PmrA基因,开放阅读框(ORF)长669 bp。构建了pMD19T-Pcc-Pmr A,并以pET-28a为基础重新构建了原核表达载体pET28a-Pcc-Pmr A。原核表达了Pcc-PmrA蛋白,大小约为27 k... 详细信息

关键词：马铃薯气生茎腐病 PmrA基因原核表达

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不同地区马铃薯Y病毒的差异类型分析比较

不同地区马铃薯Y病毒的差异类型分析比较

山东半岛腐生小球腔菌属中国新记录种(英文)

第二十五届中国马铃薯大会

作者：赵亮杜桂霞朱艳慧张金明陈宏芳邓佳燕谢鑫李文义李颍风曹欣然迟胜起张剑峰青岛农业大学陇南市种子管理总站内蒙古民丰种业有限公司

比较了内蒙古自治区宝昌镇、山东省寿光市、青岛市平度市3个地区采集的马铃薯Y(Potato virus Y, PVY)病毒样本。经测序分析发现, 3个来源不同的样本PVY序列存在差异, PVY基因组的部分相同区域或位置存在不同的基因序列片段,发现这些位... 详细信息

比较了内蒙古自治区宝昌镇、山东省寿光市、青岛市平度市3个地区采集的马铃薯Y(Potato virus Y, PVY)病毒样本。经测序分析发现, 3个来源不同的样本PVY序列存在差异, PVY基因组的部分相同区域或位置存在不同的基因序列片段,发现这些位点主要集中在P1-1、 HC-Pro/P3、 6K2/VPg-1、 NIb-1/CP等区域。3个样本PVY构建的多个基因(P1、 VPg、NIa、 NIb、 CP基因)核苷酸序列和氨基酸序列进化树相同株系型分离物以较高的置信度相聚在一起,说明侵染的马铃薯植株体内同时存在多种PVY复合侵染株系。

关键词：马铃薯 Y病毒基因组变异

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菌物学报 2013年第2期32卷 208-215页

作者：迟胜起于辉霞蔡晨金静路炳声青岛农业大学农学与植物保护学院山东省植物病虫害综合防控重点实验室山东青岛266109 蓬莱市农业局山东烟台265600

在山东半岛腐生真菌调研过程中,鉴定出生于枯木上的4个小球腔菌属中国新记录种:光洁小球腔菌Leptosphaeriaagnita,灌丛小球腔菌***,嘴状小球腔菌***和茄小球腔菌***。对各菌的形态学特征进行了描述、图解及讨论,并编制了中国小球腔菌属... 详细信息

在山东半岛腐生真菌调研过程中,鉴定出生于枯木上的4个小球腔菌属中国新记录种:光洁小球腔菌Leptosphaeriaagnita,灌丛小球腔菌***,嘴状小球腔菌***和茄小球腔菌***。对各菌的形态学特征进行了描述、图解及讨论,并编制了中国小球腔菌属腐生种的检索表。研究标本保存在青岛农业大学菌物学实验室。

关键词：座囊菌纲形态学分类学真菌多样性

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冬虫夏草的微循环产孢及其无性型的分离

菌物系统 2001年第4期20卷 482-485页

作者：莫明和迟胜起张克勤云南大学省工业微生物发酵工程重点实验室

从采自云南德钦白马雪山的冬虫夏草子实体上,利用改进的子囊孢子弹射法获得其无性型中国被毛孢,并利用冬虫夏草子囊孢子的微循环产孢和无性型菌丝的载片培养,证明我们获得纯培养是冬虫夏草的无性型。

关键词：冬虫夏草微循环产孢分离方法无性型

番茄褪绿病毒CP基因克隆、序列分析及原核表达

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华北农学报 2016年第4期31卷 57-62页

作者：韩磊迟胜起张剑峰青岛农业大学农学与植物保护学院山东青岛266109

为制备番茄褪绿病毒（Tomato chlorosis virus,To CV）抗血清,以番茄病叶为试验材料,提取总RNA,根据To CV CP基因设计特异性引物,利用RT-PCR方法克隆目的基因,构建原核表达载体p ET32a-To CVCP,在大肠杆菌Rosetta（DE3）菌株中表达CP蛋... 详细信息

为制备番茄褪绿病毒（Tomato chlorosis virus,To CV）抗血清,以番茄病叶为试验材料,提取总RNA,根据To CV CP基因设计特异性引物,利用RT-PCR方法克隆目的基因,构建原核表达载体p ET32a-To CVCP,在大肠杆菌Rosetta（DE3）菌株中表达CP蛋白。结果表明：To CV CP基因（Gen Bank登录号：KT809400）全长774 bp,编码257个氨基酸,与Gen Bank中其他地区分离物核苷酸序列同源性为97.2%～99.6%,推导的氨基酸序列同源性为97.3%～100.0%。核苷酸序列保守位点占全部位点的91.3%,氨基酸序列保守位点占全部位点的88.3%,表明不同地理来源的番茄褪绿病毒的CP基因保守性较高。将To CV CP基因克隆到原核表达载体p ET-32a（＋）上,并在体外条件下诱导表达出融合蛋白。SDS-PAGE分析表明,转p ET32a-To CVCP载体的大肠杆菌Rosetta（DE3）菌株表达了分子量约33 k Da的重组蛋白。该重组蛋白在37℃,1.0 mmol/L IPTG、诱导6 h,表达量最大。

关键词：番茄褪绿病毒外壳蛋白基因原核表达基因克隆

甘薯4种RNA病毒多重RT-PCR检测方法的建立

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华北农学报 2022年第4期37卷 206-211页

作者：冯丽婷张剑峰迟胜起青岛农业大学植物医学学院山东青岛266109

针对甘薯生产上发生为害严重的甘薯RNA病毒-甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)、甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)、甘薯G病毒(SPVG)和甘薯C病毒(SPVC),建立了多重RT-PCR检测方法。首先根据GenBank中收录的这些病毒的外壳蛋白(CP)基因的保守序列,利用Prem... 详细信息

针对甘薯生产上发生为害严重的甘薯RNA病毒-甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)、甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)、甘薯G病毒(SPVG)和甘薯C病毒(SPVC),建立了多重RT-PCR检测方法。首先根据GenBank中收录的这些病毒的外壳蛋白(CP)基因的保守序列,利用Premier 5.0软件分别设计并合成了上述4种病毒的特异性引物;以4种病毒的下游特异性引物合成的cDNA为模板,在同一体系中同时加入上述4种甘薯病毒引物进行PCR扩增,初步建立这4种甘薯RNA病毒的最佳多重RT-PCR体系;通过对该多重RT-PCR体系的退火温度、延伸时间、dNTPs量、模板量、引物浓度等条件的优化,建立了能够同时检测这4种甘薯RNA病毒的最优四重RT-PCR检测体系,并对优化的多重RT-PCR体系进行了挑战测试和灵敏度测试。试验结果显示,优化的多重RT-PCR体系,各病毒引物之间不会出现交叉干扰,所扩增的4条目的条带清晰,能够明确区分上述4种甘薯病毒;挑战检测和灵敏度测试显示,此检测体系特异性强且灵敏度高。所建立的上述4种甘薯RNA病毒的多重RT-PCR检测方法能同时检测4种甘薯病毒,不仅准确灵敏,而且降低了检测成本,提高了病毒检测效率。

关键词：甘薯 SPFMV SPCSV SPVG SPVC 多重RT-PCR

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暗球腔菌属三个中国新记录种

菌物学报 2013年第1期32卷 136-141页

作者：于辉霞迟胜起李秀岚尹德彩路炳声青岛农业大学农学与植物保护学院山东省植物病虫害综合防控重点实验室山东青岛266109

在对福建武夷山、安徽黄山和山东昆嵛山的真菌采集鉴定中,发现了暗球腔菌属Phaeosphaeria3个中国新记录种:肩状暗球腔菌***、马西山暗球腔菌***和香蒲暗球腔菌***。该属真菌多数腐生在禾本科、莎草科、灯心草属等单子叶植物的枯死茎上... 详细信息

在对福建武夷山、安徽黄山和山东昆嵛山的真菌采集鉴定中,发现了暗球腔菌属Phaeosphaeria3个中国新记录种:肩状暗球腔菌***、马西山暗球腔菌***和香蒲暗球腔菌***。该属真菌多数腐生在禾本科、莎草科、灯心草属等单子叶植物的枯死茎上或其他木材上。对3个种进行了形态描述、图示和讨论,标本保存在青岛农业大学菌物研究室(MHQAU)。

关键词：子囊菌暗球腔菌科形态特征双囊壁

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几丁质寡糖诱导小麦抗白粉病作用的研究

植物保护 2001年第5期27卷 1-3页

作者：刘亚君迟胜起张克勤董志扬云南大学微生物发酵工程重点实验室昆明650091 中国科学院微生物研究所北京100080

试验表明 ,应用工业化生产的几丁质寡糖液 (COS)可以减轻小麦白粉病的发生。随着COS浓度的增加 ,其诱导小麦产生抗白粉病的效果越好。通过不同施用方式的比较 ,表明小麦的抗性是由于植株吸收COS后 ,引发体内系统诱导抗性而表达的。

关键词：几丁质寡糖小麦白粉病诱导抗性生物防治