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新型冠状病毒巢式PCR检测方法的建立与初步应用

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中华实验和临床病毒学杂志 2022年第2期36卷 214-218页

作者：石伟先冯兆民崔淑娟潘阳钱城辛若雷杨鹏王全意张代涛高志勇北京市疾病预防控制中心传染病地方病控制所北京100013

目的建立一种检测新型冠状病毒的巢式PCR方法,作为实时荧光PCR法检测新型冠状病毒的补充,并探讨该方法在临床样本检测中的初步应用价值。方法根据新型冠状病毒基因保守序列,利用在线软件设计N、S基因引物,构建巢式PCR反应体系,N基因巢式... 详细信息

目的建立一种检测新型冠状病毒的巢式PCR方法,作为实时荧光PCR法检测新型冠状病毒的补充,并探讨该方法在临床样本检测中的初步应用价值。方法根据新型冠状病毒基因保守序列,利用在线软件设计N、S基因引物,构建巢式PCR反应体系,N基因巢式PCR及产物测序用于定性检测,S基因PCR产物测序用于型别初步鉴定。检测梯度稀释新型冠状病毒阳性样本评价检测灵敏度,检测流感病毒和人冠状病毒OC43、229E、HKU1、NL63等样本评价其特异性。分别检测Ct值>33与Ct值<33的各15份新型冠状病毒阳性样本,对扩增产物进行测序及比对分析,对检测方法进行验证。结果所建立的巢式PCR法可扩增出355 bp N基因片段及449 bp S基因片段的特异性条带,冠状病毒229E、OC43、HKU1、NL63、H3N2亚型流感病毒、甲型H1N1流感病毒、乙型流感病毒阳性样本无扩增条带。N基因片段最低检测限可达Ct值37.21。30份新冠核酸阳性样本中,巢式PCR检测的N基因阳性符合一致率达100%(30/30);S基因阳性符合一致率达60%(18/30)。28份样本N基因片段测序成功,BLAST与新型冠状病毒相似性100%。12份样本S基因片段可获得位点突变特征结果。结论建立了可特异检测新型冠状病毒的巢式PCR方法,并可通过对PCR扩增产物测序分析其位点突变特征,可作为实时荧光PCR法的补充。

关键词：新型冠状病毒实时荧光PCR法巢式PCR法

北京男男性行为者HIV-1基因多样性及相关因素研究

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中国艾滋病性病 2020年第3期26卷 268-272页

作者：周知涵张晶辛若雷阮玉华卢红艳冯毅康瑞华廖玲洁邵一鸣邢辉中国疾病预防控制中心北京102206 北京市疾病预防控制中心北京100013

目的了解北京男男性行为者(MSM)1型艾滋病病毒(HIV-1)基因多样性情况及影响因素。方法对北京HIV阳性MSM采用横断面调查,通过建立的基于Illumina平台的二代测序技术(NGS),综合两个部分pol基因区片段和一个env基因区片段的结果进行亚型和... 详细信息

目的了解北京男男性行为者(MSM)1型艾滋病病毒(HIV-1)基因多样性情况及影响因素。方法对北京HIV阳性MSM采用横断面调查,通过建立的基于Illumina平台的二代测序技术(NGS),综合两个部分pol基因区片段和一个env基因区片段的结果进行亚型和系统进化分析。结果获得NGS结果的376例样本中,单一亚型样本313例(占83.2%),重组率和共感染率分别为8.2%(31例)和8.5%(32例)。313例单一亚型样本中CRF01_AE亚型188例(60.1%),CRF07_BC亚型86例(27.5%),B亚型32例(10.2%),C亚型3例(1.0%),CRF55_01B亚型4例(1.3%)。376例样本中,亚型内重组率为1.9%(7例),亚型间重组率为6.4%(24例);亚型内共感染率为1.3%(5例),亚型间共感染率为7.2%(27例)。多因素Logistic回归分析结果显示,与HIV-1基因多样性相关的影响因素是无工作(P=0.03),过去3个月使用新型毒品(P=0.03),和通过互联网寻找男性性伴侣的方式(P=0.01)。结论北京MSM的HIV感染者中有较高的HIV-1基因多样性,反映了HIV阳性MSM复杂的高危行为。

关键词：艾滋病病毒二代测序亚型基因多样性共感染

HIV抗体快速检测试剂在北京MSM中应用的真实性评价

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中国艾滋病性病 2014年第8期20卷 577-579页

作者：夏冬艳王娟赵月娟孙伟东张琴李佳辛若雷苏雪丽卢红艳北京市疾病预防控制中心性病艾滋病防治所北京100013

目的评价艾滋病病毒(HIV)抗体快速检测试剂,应用于男男性行为人群(MSM)中检测的真实性。方法用两种HIV抗体口腔黏膜渗出液快速检测试剂和指尖血HIV抗体快速检测试剂,对MSM进行快速检测。同时每位调查对象抽取静脉血,用酶联免疫吸附试验(... 详细信息

目的评价艾滋病病毒(HIV)抗体快速检测试剂,应用于男男性行为人群(MSM)中检测的真实性。方法用两种HIV抗体口腔黏膜渗出液快速检测试剂和指尖血HIV抗体快速检测试剂,对MSM进行快速检测。同时每位调查对象抽取静脉血,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HIV抗体,阳性者用蛋白免疫印迹法(WB)进行确认检测。以ELISA和WB结果作为金标准,将快速检测结果与之相比较。结果 HIV抗体口腔黏膜渗出液快速检测试剂1的阴性样本检测错误百分比为6.4%(6/94),阳性样本检测错误百分比为0.1%(1/800)。HIV抗体口腔黏膜渗出液快速检测试剂2的阴性样本检测错误百分比为25.2%(26/103),阳性样本检测错误百分比为0(0/795)。指尖血检测的阴性样本检测错误百分比为0(0/197),阳性样本检测错误百分比为0.1%(1/1595)。结论两种口腔黏膜渗出液快速检测试剂都可能导致一部分HIV感染者漏检。在选择口腔黏膜渗出液快速检测试剂时需要进行多方比较和评价,同时加强对开展HIV抗体快速检测的MSM志愿者的培训。对HIV抗体口腔黏膜渗出液快速检测结果的咨询显得尤为重要。

关键词：男男性行为人群 HIV抗体快速检测评价

应用分子流行病学调查一起HIV-1 CRF02_AG家庭内传播

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国际病毒学杂志 2019年第1期26卷 21-25页

作者：辛若雷刘安孙丽君李佳张琴卢红艳孙伟东北京市疾病预防控制中心北京市预防医学研究中心性病艾滋病防治所 100013 首都医科大学附属北京佑安医院性病艾滋病诊疗中心 100069

目的通过调查一起家庭内HIV-1传播事件,阐明家庭成员HIV-1毒株传播关系。方法通过流行病学调查方法,对1例HIV-1抗体筛查有反应孕产妇及其配偶和所育婴儿进行随访和检测。运用一步法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HIV-1 gag基因和pol... 详细信息

目的通过调查一起家庭内HIV-1传播事件,阐明家庭成员HIV-1毒株传播关系。方法通过流行病学调查方法,对1例HIV-1抗体筛查有反应孕产妇及其配偶和所育婴儿进行随访和检测。运用一步法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HIV-1 gag基因和pol基因片段,构建系统进化树分析其进化传播关系。结果孕产妇(EID1107M)在孕期保健期间存在HIV抗体血清阳转现象。其丈夫(EID1107F)随后确诊为HIV-1抗体阳性;其所育婴儿(EID1107I)在出生后8个月HIV-1核酸检测阳性。3个病例均感染HIV-1 CRF02_AG毒株,进化树上聚集成可靠进化簇,拓扑学结构表明"父-母-子"之间的传播关系。结论加强婚前检查和孕期保健感染性疾病筛查,对阳性孕产妇病例实施及时有效的母婴阻断,避免传染性疾病的家庭内二代传播,提高出生人口质量。

关键词：人免疫缺陷病毒1型家庭内母婴传播分子流行病学

北京市HIV抗体快速检测为阳性的男男性行为人群后续确认检测行为的相关因素分析

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中华预防医学杂志 2016年第2期50卷 153-157页

作者：夏冬艳刘国武曾吉李洋苏雪丽孙伟东李佳张琴郝明强叶景荣辛若雷赵月娟王娟卢红艳北京市疾病预防控制中心性病艾滋病防治所 100013

目的分析北京市经HIV抗体快速检测为阳性的男男性行为人群（MSM）后续确认检测行为情况及其相关因素。方法采用连续抽样的方法，选取2013年5月1日至12月31Et在北京市参加中国卫生部．比尔及梅琳达盖茨基金会艾滋病防治合作项目延期项目... 详细信息

目的分析北京市经HIV抗体快速检测为阳性的男男性行为人群（MSM）后续确认检测行为情况及其相关因素。方法采用连续抽样的方法，选取2013年5月1日至12月31Et在北京市参加中国卫生部．比尔及梅琳达盖茨基金会艾滋病防治合作项目延期项目的MSM为调查对象，纳入标准为：18岁以上，自报既往发生过男男性行为，经口腔黏膜渗出液HIV抗体快速检测为阳性，且非既往报告到中国疾病预防控制信息系统的HIV抗体阳性者。共调查1003例。根据项目策略，由MSM草根组织将调查对象转介到指定的CDC或医院进行后续确认检测，包括HIV抗体指尖血快速检测、静脉血ELISA法HIV抗体检测、静脉血Western blot HIV抗体检测。采用x^2检验比较不同特征调查对象后续确认检测情况差异，采用多因素二分类非条件logisitc回归模型分析调查对象后续确认检测的相关因素。结果1003例调查对象的年龄为（30．9±9．1）岁，87．8％（881例）接受了HIV抗体指尖血快速检测，阳性率为85．4％（752／881），其中98．0％（737，752）接受了静脉血ELISA和Westernblot确认检测，阳性率为94．4％（696／737）。与前往CDC进行后续确认检测的MSM相比，前往医院者接受后续确认检测的OR（95％CI）值为5．10（1．69—15．36）；与近6个月无肛交行为／或有肛交每次使用安全套的MSM相比，有时使用安全套和从未使用安全套者接受后续确认检测的OR（95％CI）值分别为5．81（2．14～15．77）和3．45（2．00—5．97）；与通过网络被干预动员的MSM相比，浴池、公园，公厕和酒吧被干预动员者后续确认检测的0R（95％CI）值分别为0．17（0．05～0．53）、0．10（0．04～0．29）和0．22（0．06～0．79）；随着MSM近3个月男性性伴数的增加，接受后续确认检测的可能性降低，0R（95％CI）值为0．92（0．86～0．99）。结论在浴池、公园／公厕和酒吧被动员的MSM后续确认检测率较低，肛交行为中不能每次使用安全套者的后续确认检测率较高。由医疗机构进行后续确认检测可以增加快检阳性的MSM进行后续确认检测的可能性，男性性伴数与是否接受后续确认检测呈负相关。

关键词：同性恋男性 HIV抗体影响因素横断面研究

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临床实验室人员艾滋病职业暴露情况分析

中国国境卫生检疫杂志 2022年第2期45卷 121-123页

作者：刘意孙丽君辛若雷冯霞李宇魏虹娟娄金丽首都医科大学附属北京佑安医院北京100069 北京市疾病预防控制中心(北京市预防医学研究中心)性病艾滋病防治所

目的分析临床实验室检测人员艾滋病职业暴露风险与防护对策,更好地做好艾滋病诊疗和艾滋病职业暴露处置。方法统计2017—2020年北京佑安医院处置并上报到“全国艾滋病检测实验室信息管理系统”中的临床实验室检测人员艾滋病职业暴露事件... 详细信息

目的分析临床实验室检测人员艾滋病职业暴露风险与防护对策,更好地做好艾滋病诊疗和艾滋病职业暴露处置。方法统计2017—2020年北京佑安医院处置并上报到“全国艾滋病检测实验室信息管理系统”中的临床实验室检测人员艾滋病职业暴露事件,按暴露方式、暴露场所及HIV抗体检测结果等进行统计分析。结果共上报12例实验室检测人员艾滋病职业暴露,暴露方式以粘膜暴露或不完整皮肤暴露(9例)为主,3例为针刺或轻度锐器刺伤。其中7例暴露源HIV抗体检测情况不详,4例轻度暴露于HIV阳性血样,1例重度暴露于HIV阳性血样。12例职业暴露者均实施暴露后预防用药,随访期内无HIV血清阳转发生。结论临床实验室人员发生的艾滋病职业暴露以粘膜及不完整皮肤暴露为主要途径。应进一步加强生物安全培训,严格遵守标准操作程序,降低实验室职业暴露的发生机率。

关键词：艾滋病病毒职业暴露临床实验室粘膜暴露

在我国传播的HIV-1 CRF65＿CPX亚型毒株pol基因序列特征

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中国艾滋病性病 2018年第6期24卷 540-543页

作者：赵帅冯毅洪坤学卢红艳辛若雷廖玲洁阮玉华胡婧郝明强邵一鸣邢辉中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京102206 北京市疾病预防控制中心北京100013

目的探索亚型为CRF65_CPX艾滋病病毒（HIV）毒株在中国不同高危人群间的传播特征,基因序列及其CTL表位的变化。方法收集2017年6月之前中国鉴定HIV-1亚型为CRF65_CPX的毒株的pol基因区序列,使用比对好的pol基因区序列进行贝叶斯分析。以... 详细信息

目的探索亚型为CRF65_CPX艾滋病病毒（HIV）毒株在中国不同高危人群间的传播特征,基因序列及其CTL表位的变化。方法收集2017年6月之前中国鉴定HIV-1亚型为CRF65_CPX的毒株的pol基因区序列,使用比对好的pol基因区序列进行贝叶斯分析。以系统进化树为根据,选择其中同性性传播人群和异性性传播人群序列,分别生成共享序列后,比较两个人群氨基酸位点和HLA-B位点等位基因限制的CTL表位的差异。结果共收集获得CRF65_CPX HIVpol基因区序列52条。贝叶斯分析结果显示,异性性传播人群的最近共同祖先的时间为1999年,同性性传播人群的最近共同祖先的时间为2003年,CRF65_CPX毒株出现在异性性传播人群的时间早于同性性传播人群。与异性性传播人群相比,同性性传播人群pol区共享序列有10个氨基酸位点发生变化;丢失了两个有数据证明的保护性CTL表位（B＊2702、B＊5103）。结论 CRF65_CPX毒株为中国近些年才发现的多重重组的新型毒株,其在中国的传播途径从异性性传播转变为以同性性传播为主,氨基酸位点和CTL表位在传播过程中也产生了变化,这种变化可能加速了疾病进程,故应引起并加强对该亚型及其类似的新型病毒株不断扩散传播的重视。

关键词：艾滋病病毒 CRF65_CPX 传播途径 CTL表位

北京市HIV-1抗体阳性人群蛋白印迹试验带型分析

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国际病毒学杂志 2019年第4期26卷 245-249页

作者：李佳王娟张琴孙燕鸣辛若雷卢红艳孙伟东北京市疾病预防控制中心北京市预防医学研究中心性病艾滋病防治所 100013

目的分析HIV-1抗体阳性者流行病学特征及样本的蛋白印迹试验(western blot,WB)带型,为开展艾滋病防治提供科学依据.方法研究对象为2015—2017年北京市HIV确证中心实验室检测的HIV-1抗体阳性的人群,对该人群人口学特征进行统计分析,并对... 详细信息

目的分析HIV-1抗体阳性者流行病学特征及样本的蛋白印迹试验(western blot,WB)带型,为开展艾滋病防治提供科学依据.方法研究对象为2015—2017年北京市HIV确证中心实验室检测的HIV-1抗体阳性的人群,对该人群人口学特征进行统计分析,并对标本进行WB带型分析.结果 3196份HIV-1阳性样本中,男性占95.6%,20~39岁占74.9%,大专及以上文化程度占57.0%,未婚占69.1%,同性传播和异性传播分别占80.3%、17.8%.3196份HIV-1阳性样本的WB条带中,2653份样本出现全条带(83.0%);单条带型的反应性率分析中,出现率排在前三的是gp160(99.9%)、p66(99.6%)和p24(99.4%);带型p31在不同年龄间差异有统计学意义(P0.05).结论北京市HIV-1抗体阳性HIV感染者在20~39岁、具有大专及以上文化程度、未婚男性人群中较为多见,应加强对此类人群的行为干预,WB带型分析中全条带所占比例较高,说明本市大多数感染者在病毒活跃期能被及时发现.

关键词： HIV-1抗体阳性免疫印迹条带

应用系统进化分析作为HIV传播关系证据的专家共识

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中国艾滋病性病 2024年第4期30卷 347-353页

作者：冯毅钟平李敬云潘晓红张佳峰梁姝陈敏吴建军赵锦梁淑家辛若雷安明晖何翔郝静静袁丹李林韩晓旭廖玲洁阮玉华邢辉邵一鸣中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心北京102206 上海市疾病预防控制中心上海200051 军事医学研究院微生物流行病研究所北京100071 浙江省疾病预防控制中心杭州310057 四川省疾病预防控制中心成都610044 云南省疾病预防控制中心昆明650034 安徽省疾病预防控制中心合肥230601 深圳市疾病预防控制中心广东深圳518055 广西壮族自治区疾病预防控制中心南宁530028 北京市疾病预防控制中心北京100013 中国第一医科大学沈阳110001 广东省公共卫生研究院广州510635

HIV主要通过性行为、共用针具吸毒等途径传播,多数由尚未知晓自身HIV感染状态的HIV感染者传播,但也有知晓自己HIV阳性仍然与他人发生高危行为,甚至故意通过无保护高危行为传播他人的HIV感染者。故意传播HIV的事件尽管报道的不多,但后果... 详细信息

HIV主要通过性行为、共用针具吸毒等途径传播,多数由尚未知晓自身HIV感染状态的HIV感染者传播,但也有知晓自己HIV阳性仍然与他人发生高危行为,甚至故意通过无保护高危行为传播他人的HIV感染者。故意传播HIV的事件尽管报道的不多,但后果严重、影响恶劣,有时还会形成生物恐怖事件,社会危害极大。

关键词：系统进化分析艾滋病病毒传播证据