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唾液菌群的直接PCR扩增-高分辨率熔解曲线分析及其法医学应用

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法医学杂志 2022年第6期38卷 709-718页

作者：杨瑞陈炯赵贵森河南科技大学法医学院河南洛阳471023

目的建立一种基于直接PCR(direct PCR,dPCR)扩增和高分辨率熔解(high resolution melting,HRM)曲线分析的唾液菌群快速检测技术,评估其法医学应用价值。方法离心收集唾液中的细菌后重悬于Tris-EDTA(TE)缓冲液,直接作为模板用于16S rDN... 详细信息

目的建立一种基于直接PCR(direct PCR,dPCR)扩增和高分辨率熔解(high resolution melting,HRM)曲线分析的唾液菌群快速检测技术,评估其法医学应用价值。方法离心收集唾液中的细菌后重悬于Tris-EDTA(TE)缓冲液,直接作为模板用于16S rDNA V4区的扩增和HRM曲线分析,即dPCR-HRM,计算样本HRM图谱相对于参考图谱的判型置信度(genotype confidence percentage,GCP)。以传统的试剂盒(kit)提取模板DNA后再行PCR-HRM(即kPCR-HRM)为参考,验证dPCR-HRM的可行性。用dPCR-HRM法分析梯度稀释模板、群体样本和模拟唾液斑样本,评估其灵敏度、分型能力和检材适应性。结果 dPCR-HRM法可在90 min内得到唾液菌群的HRM图谱,与kPCR-HRM法之间的GCP>95.85%。应用dPCR-HRM法,一般个体0.29 nL的唾液即可测得菌群HRM型。61例唾液样本可分为10种型,8 h之内的唾液斑与新鲜唾液分型相同(GCP>90.83%)。结论 dPCR-HRM技术可用于唾液菌群的快速分型,且具有成本低、操作简单等优点。

关键词：法医遗传学高分辨率熔解聚合酶链反应唾液菌群结构

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DNA甲基化标记法医学应用探讨

法医学杂志 2005年第1期21卷 61-64页

作者：赵贵森杨庆恩华中科技大学同济医学院法医学系湖北武汉430030

CpG的胞嘧啶在DNA复制后多数被甲基化,5-甲基胞嘧啶的分布是贮存表遗传信息的主要形式。近年来研究表明,DNA甲基化标记具有信息含量丰富、相对稳定、检测和结果处理方便、可与SNP联合分析等优点,是一种新的强有力的遗传分析工具。基因... 详细信息

CpG的胞嘧啶在DNA复制后多数被甲基化,5-甲基胞嘧啶的分布是贮存表遗传信息的主要形式。近年来研究表明,DNA甲基化标记具有信息含量丰富、相对稳定、检测和结果处理方便、可与SNP联合分析等优点,是一种新的强有力的遗传分析工具。基因组的甲基化差异可用甲基化敏感性限制酶、重亚硫酸盐转化、Maxam-Gilbert裂解等技术来分析。人类基因组甲基化谱有时空特异性、亲源特异性、病理特异性等特征,在法医亲子鉴定、个人识别等方面有潜在应用价值。

关键词： DNA甲基化表遗传学法医学遗传标记

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Alu家族在法医DNA分析中的应用

法医学杂志 2010年第1期26卷 47-50页

作者：赵贵森常林莫耀南中国政法大学证据科学教育部重点实验室北京100088 河南科技大学法医学院河南洛阳471003

Alu家族是灵长类特有的短散在重复序列,在人类基因组内含量丰富,分布广泛,甲基化程度高,有种属特异性和插入变异,为法医DNA分析面临的许多问题提供了潜在的解决途径。目前,Alu元件在法医DNA分析中的应用包括:DNA定量、种属鉴定、种族鉴... 详细信息

Alu家族是灵长类特有的短散在重复序列,在人类基因组内含量丰富,分布广泛,甲基化程度高,有种属特异性和插入变异,为法医DNA分析面临的许多问题提供了潜在的解决途径。目前,Alu元件在法医DNA分析中的应用包括:DNA定量、种属鉴定、种族鉴定、性别鉴定、个体识别和亲子鉴定,以及全基因组扩增等。本文总结各种基于Alu元件的法医DNA分析技术的原理和特点,探讨Alu元件的法医学研究和应用前景,供相关学者参考。

关键词：法医遗传学 Alu元件综述[文献类型】

消化后片段长度差异等位基因特异性PCR技术——印记SNP rs220028多态性和甲基化模式研究

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中华医学遗传学杂志 2005年第1期22卷 58-60页

作者：赵贵森黄代新冯文芳杨庆恩华中科技大学同济医学院法医学系武汉430030 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学系武汉430030

目的建立一种能同时分析甲基化和单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)的新方法。方法以印记SNPrs220028(A/G)为例,基因组DNA经甲基化敏感限制酶消化后用片段长度差异等位基因特异性PCR(fragmentlengthdiscrepantallele-specificPCR,FLDAS-PCR)分型;用扩增产物酶消化法来排除酶切位点序列变异,证实检出的是甲基化等位基因。结果消化后FLDAS-PCR可选择性检出甲基化等位基因,家系分析表明其来自母亲。等位基因频率A=0.5085,G=0.4915,多态信息含量为0.3749。结论消化后FLDAS-PCR技术可以实现甲基化和SNP的复合分析;印记SNPrs220028在Prader-Willi/Angelman综合征诊断中有潜在意义。

关键词：甲基化 SNP 等位基因检出特异性 PCR技术诊断酶切位点片段 PCR)

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血色原微量分光法血痕确证试验

中国法医学杂志 2016年第6期31卷 601-604页

作者：李亚琴赵贵森陈炯詹飞河南科技大学法医学院河南洛阳471003

目的探讨血色原微量分光法作为血痕确证试验的可行性。方法用离心分离的检材浸洗液代替检材,与改良高山试剂进行血色原反应,用微量分光光度计测定吸收光谱,判断检材是否含血。在优化参数的基础上,用倍比稀释的粗制人血红蛋白测定方法的... 详细信息

目的探讨血色原微量分光法作为血痕确证试验的可行性。方法用离心分离的检材浸洗液代替检材,与改良高山试剂进行血色原反应,用微量分光光度计测定吸收光谱,判断检材是否含血。在优化参数的基础上,用倍比稀释的粗制人血红蛋白测定方法的灵敏度,用常见疑似血液/血斑,以及不同保存时间、不同基质的血斑测定方法的特异性和检材适应能力。结果用血色原微量分光法,仅血液(斑)具有415nm、525nm和555nm三个吸收峰组成的特异光谱,与常见疑似血液/斑没有交叉。反应2min,上样2.5μL,稀释1000倍的人血可稳定获得三峰光谱。通过延长浸洗时间、设置基质对照,10年陈旧血纱、有色布上的血斑等均可有效确证。三个吸收峰的高度与检液的血含量呈正相关,且525nm和555nm的吸光度变化趋势一致(y=0.523 2x+0.027 4,R2=0.997 1)。结论血色原微量分光法灵敏度高、特异性强,快速简便,可纳入DNA检验流程之中,在实际检案中有较好的应用前景。替代传统结晶法用于教学,更符合当前学生技能和意识的培养要求。

关键词：法医物证学血色原分光光度法确证试验

片段长度差异等位基因特异性PCR—一种改良的SNP分型新方法

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法医学杂志 2005年第1期21卷 11-14页

作者：黄代新杨庆恩赵贵森华中科技大学同济医学院法医学系湖北武汉430030

目的建立一种基于等位基因特异性PCR原理的改良SNP分型新方法:片段长度差异等位基因特异性PCR,并考察特异性引物的3'端第3位、第4位碱基错配对特异性延伸的影响。方法以SNP位点rs759117和rs760887为例,设计两条长度不同、3'末端分别与SN... 详细信息

目的建立一种基于等位基因特异性PCR原理的改良SNP分型新方法:片段长度差异等位基因特异性PCR,并考察特异性引物的3'端第3位、第4位碱基错配对特异性延伸的影响。方法以SNP位点rs759117和rs760887为例,设计两条长度不同、3'末端分别与SNP两个等位基因碱基配对的上游引物,同时在两个等位基因特异性引物3'端第3或第4位碱基引入错配以增加特异性,下游为公用引物。PCR产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显带后确定样本的基因型。结果不同SNP纯合子为长度不同的单一谱带,杂合子则为两条带,其结果与直接测序完全一致。两条特异性上游引物3'端第3或第4位碱基引入错配后非特异性延伸显著减少,且对PCR反应条件的严格性要求明显降低。结论片段长度差异等位基因特异性PCR是一种简单快速而有效的SNP分型新方法;两条特异性引物3'端第3。

关键词：单核苷酸多态性片段长度差异等位基因特异性PCR 碱基错配法医物证检验学

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溺死诊断中的浮游生物检测法

中国法医学杂志 2005年第2期20卷 89-91页

作者：赵贵森黄代新杨庆恩华中科技大学同济医学院法医学系湖北武汉430030

溺水是常见的死亡原因之一,浮游生物检验是法医学鉴定溺死的重要依据。浮游生物检验方法可分为破机法、非破机法和分子生物学方法三大类。前两者主要以形态标记为检验对象,依赖于浮游生物的理化特性,有很大局限性。分子生物学方法以分... 详细信息

溺水是常见的死亡原因之一,浮游生物检验是法医学鉴定溺死的重要依据。浮游生物检验方法可分为破机法、非破机法和分子生物学方法三大类。前两者主要以形态标记为检验对象,依赖于浮游生物的理化特性,有很大局限性。分子生物学方法以分子标记为检验对象,适用范围广,信息丰富,是值得探索的新方法。本文回顾溺死鉴定中的各种浮游生物检测法,供法医工作者在实践和研究中进行参考。

关键词：溺死诊断浮游生物检测法法医病理学

降解检材STR分型Ladder-Like条带形成原因的探讨

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中国法医学杂志 2005年第6期20卷 332-334页

作者：楼迪栋余纯应黄代新赵贵森任文杨庆恩浙江省温州医学院法医学系浙江温州325000 华中科技大学同济医学院法医系湖北武汉430030

目的探讨降解DNA短串联重复序列PCR扩增产物在PAGE中Ladder-L ike条带的形成原因。方法用一组人工合成的不同长度的D8S1179DNA单链,模拟降解检材中的断裂DNA;利用John M设计的D8S1179引物对模拟模板的DNA单链进行PCR扩增,PAGE分离。结... 详细信息

目的探讨降解DNA短串联重复序列PCR扩增产物在PAGE中Ladder-L ike条带的形成原因。方法用一组人工合成的不同长度的D8S1179DNA单链,模拟降解检材中的断裂DNA;利用John M设计的D8S1179引物对模拟模板的DNA单链进行PCR扩增,PAGE分离。结果不同模拟模板的DNA单链的组合可以扩增出不同的Lad-der-L ike条带。结论短串联重复序列Ladder-like条带是PCR过程中降解DNA多态区互补扩增的产物。

关键词：法医物证学短串联重复序 Ladder-like条带 PCR—STR分型降解检材降解检材

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浅论如何做好医学鉴定人

洛阳医专学报 2001年第4期19卷 349-350页

作者：赵贵森莫耀南李凡洛阳医专法医学系河南洛阳471003

在我国现行医学鉴定体系中,鉴定人可分为专职的法医学鉴定人和非专职的医学鉴定人两大类[1].实践证明,具有丰富临床理论知识、经验和技能的各科专家参与医学鉴定工作,是对法医鉴定必要的、有益的补充.1996年修订后的第120条补充规定:'... 详细信息

在我国现行医学鉴定体系中,鉴定人可分为专职的法医学鉴定人和非专职的医学鉴定人两大类[1].实践证明,具有丰富临床理论知识、经验和技能的各科专家参与医学鉴定工作,是对法医鉴定必要的、有益的补充.1996年修订后的第120条补充规定:'对人身伤害的医学鉴定有争议时需要重新鉴定或者对精神病的医学鉴定,由省级人民政府指定的医院进行.

关键词：医学鉴定人医学鉴定临床医生法医鉴定