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基于CRISPR/Cas9技术构建与鉴定敲除ACE2基因的Huh7肝癌细胞株

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生物技术通报 2023年第6期39卷 181-188页

作者：张祖霖刘方芳周青鸟赵瑞强贺菽嘉林文珍广西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室南宁530021 广西高校生物分子医学研究重点实验室南宁530021

利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除人Huh7肝癌细胞的血管紧张素转化酶2(ACE2)基因,构建ACE2基因敲除细胞株,为研究ACE2在肝细胞癌的作用提供细胞模型。首先,对ACE2结构域进行鉴定,利用在线网站设计两条破坏所有结构域、靶向作用于ACE2外... 详细信息

利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除人Huh7肝癌细胞的血管紧张素转化酶2(ACE2)基因,构建ACE2基因敲除细胞株,为研究ACE2在肝细胞癌的作用提供细胞模型。首先,对ACE2结构域进行鉴定,利用在线网站设计两条破坏所有结构域、靶向作用于ACE2外显子的sgRNA。其次,构建重组载体并转染肝癌细胞Huh7,嘌呤霉素筛选出单克隆细胞株。最后,免疫印迹鉴定敲除效果。结构域鉴定结果显示,在340-520号氨基酸位置存在Zn结合位点和激活位点,根据sgRNA靶点设计原则,采用片段敲除的方式,针对ACE2的第9、第10外显子设计两对sgRNA,并成功构建PX459-ACE2-sgRNA重组质粒。嘌呤霉素成功筛选出单克隆细胞株,并测序证实了发生片段敲除,ACE2蛋白在敲除细胞株中不表达;成功构建ACE2敲除的Huh7细胞株,为日后研究ACE2在肝细胞癌的发生机制奠定基础。

关键词：血管紧张素转化酶2 肝细胞癌 CRISPR-Cas9 单克隆细胞株

AZ91D镁合金复合膜层的制备及其性能研究

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电镀与环保 2018年第1期38卷 33-35页

作者：赵立新张飞飞邵忠财赵瑞强牡丹江师范学院物理系黑龙江牡丹江157400 沈阳理工大学环境与化学工程学院辽宁沈阳110159

AZ91D镁合金试样经微弧氧化处理后,采用溶胶涂覆的方法在其表面附着硅溶胶,制备出复合膜层。通过扫描电镜、X射线衍射、能谱分析及电化学测试等手段,研究了微弧氧化膜与复合膜层的性能。结果表明:经硅溶胶封孔处理后的复合膜层的致密性... 详细信息

AZ91D镁合金试样经微弧氧化处理后,采用溶胶涂覆的方法在其表面附着硅溶胶,制备出复合膜层。通过扫描电镜、X射线衍射、能谱分析及电化学测试等手段,研究了微弧氧化膜与复合膜层的性能。结果表明:经硅溶胶封孔处理后的复合膜层的致密性有了显著的提高,氧化孔径变小;复合膜层的自腐蚀电流比微弧氧化膜的降低了一个数量级,耐蚀性提高;复合膜层中Si元素的含量比微弧氧化膜的高,说明复合膜层中SiO_2胶粒能渗透到微孔中。

关键词： AZ91D镁合金微弧氧化硅溶胶复合膜层

银行为中小企业提供全方位的金融服务针对中小企业特点量身打造创新型融资模式——广发银行：融资“及时雨”贷款“好融通”

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中小企业投融资 2011年第5期 46-47页

作者：钮海津（采访）赵瑞强刘玮（通讯员） SMEIF广州编辑部

2011年初，被中小企业誉为“融资及时雨”的广发银行“好融通”融资方案喜获中国银行业协会颁发的“服务小企业及三农十佳特色金融产品”称号，这是广发银行致力产品创新，积极提升中小企业金融服务所获的又一重大荣誉。

关键词：中小企业广发银行金融服务融资模式企业特点创新型行为贷款

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圆桌对话2012中国金融业的国际化

中小企业投融资 2012年第4期 54-55页

作者：赵瑞强林卓军柴妍郭冰峰 SMEIF记者

利明献：其实中国的金融业为什么要国际化这个话题从数据上可以看出来。

关键词：中国金融业国际化对话

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工业三废处理技术及应用研究

环境与发展 2017年第6期29卷 126-127页

作者：赵瑞强雷秀卿施孟华浙江奇彩环境科技股份有限公司浙江绍兴312099

工业三废分为废水、废弃和固体废弃物,对环境和人体的影响,阻碍我国工业企业发展也阻碍我国从工业大国发展为工业强国。本文对工业三废及污染进行了具体分类与解析,揭示了三废处理排放的实际意义,并列举出排污的集中处理措施,从几个方... 详细信息

工业三废分为废水、废弃和固体废弃物,对环境和人体的影响,阻碍我国工业企业发展也阻碍我国从工业大国发展为工业强国。本文对工业三废及污染进行了具体分类与解析,揭示了三废处理排放的实际意义,并列举出排污的集中处理措施,从几个方面提出改善措施,帮助我国工业企业在污染排放方面的水平提高,改善生态环境,提高国际竞争力。

关键词：工业三废处理技术技术应用

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攀西金属矿开采集中区的地质条件初步研究

有色金属文摘 2015年第3期30卷 29-30,32页

作者：赵瑞强梁伟李卫洲河南省地质矿产勘查开发局第三地质矿产调查院河南信阳464000 山东省第七地质矿产勘查院山东临沂276006

攀西地区位于四川省的南部,该地区是我国重要的金属成矿区带之一,其中矿藏包括许多有色、黑色等重要的金属矿产。攀西地区是我国重要的稀有金属矿产生产基地,同时,该地区的地质构造比较复杂。本文重点针对四川攀西地区金属矿开采集中区... 详细信息

攀西地区位于四川省的南部,该地区是我国重要的金属成矿区带之一,其中矿藏包括许多有色、黑色等重要的金属矿产。攀西地区是我国重要的稀有金属矿产生产基地,同时,该地区的地质构造比较复杂。本文重点针对四川攀西地区金属矿开采集中区域内的地质条件作为研究对象,对该地区复杂的地质环境以及金属矿床成因进行初步的探究。

关键词：金属矿床地质条件特征分布规律

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让个体工商户活得由尊严、挣得由奔头

中小企业投融资 2012年第6期 20-21页

作者：钮海津侯燕吴永秀赵瑞强 SMEIF记者

尊敬的读者：您好!如您所知，改革开故以来，中国的市场经济目益发育，其中一各位突出表现即是个体工商户飞速发展。个体工商户因分散、灵话、流动性强的径营特点，承载着中国上亿人的就业机会、养话着无数的底层家庭，对社会径济发展... 详细信息

尊敬的读者：您好!如您所知，改革开故以来，中国的市场经济目益发育，其中一各位突出表现即是个体工商户飞速发展。个体工商户因分散、灵话、流动性强的径营特点，承载着中国上亿人的就业机会、养话着无数的底层家庭，对社会径济发展有着重要的作用，有效地促进了生产发展、市场繁芾，具生存与发展颇具时代色彩与中国特色，为中国突破计划径济的藩篱、建立社会主义市场经济体制立下了汗马功芳。

关键词：个体工商户社会主义市场经济体制中国特色尊严就业机会生产发展时代色彩流动性

侏罗系弱胶结顶板采动破坏规律与发育高度预测

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工程地质学报 2023年第4期31卷 1474-1485页

作者：徐智敏韩宇航陈天赐陈歌郇博程赵瑞强孙亚军中国矿业大学资源与地球科学学院徐州221116 矿山水害防治技术基础研究国家级专业中心实验室徐州221116 徐州长城基础工程有限公司徐州221116

煤层采动后形成的顶板导水裂隙带是沟通顶板充水含水层的主要通道之一,同时也是顶板水害防治需要重点研究的关键问题。近年来,西部矿区已成为我国煤炭资源主要开采区,其主采侏罗系含煤地层与东部石炭-二叠系有着明显差异,并具有典型的... 详细信息

煤层采动后形成的顶板导水裂隙带是沟通顶板充水含水层的主要通道之一,同时也是顶板水害防治需要重点研究的关键问题。近年来,西部矿区已成为我国煤炭资源主要开采区,其主采侏罗系含煤地层与东部石炭-二叠系有着明显差异,并具有典型的孔隙度高、胶结程度差等特征,顶板采动导水裂隙的演化特征也与东部矿区具有较大差异,相关的研究尚未形成普适性成果。因此,本文选取典型的弱胶结地区——新疆哈密大南湖矿区为例,采用UDEC数值模拟、现场三维钻孔电视成像等方法,并结合“S-R”稳定理论,以垮落带高度为自变量,建立砌体梁承载强度与垮落带高度关系式,全面揭示该区煤层开采过程中顶板的采动破坏过程与演化特征,并以此为依据确定顶板导水裂隙带的发育高度。在此基础上,通过收集侏罗系同类型煤矿导水裂隙带高度的实测数据,采用回归分析方法,拟合并修正现有经验公式。研究表明:研究区顶板导水裂隙带发育高度的范围是60.07~62m,裂采比为17.67~18.24,整体形态呈“梯台”型特征,结合邻矿现场实测对比证实了此次实测结果的可靠性;开采范围内导水裂隙带发育高度受垮落带高度增量、岩块回转角变化的影响呈现:“快速增加-缓慢增加-逐渐稳定”的发展与演化规律;验证计算结果表明,论文提出的回归公式预测精度一般在10.30%~17.25%之间,相较于传统经验公式平均误差降低了51.84%,显著提高了导水裂隙带高度的预测精度。论文的相关研究成果可为新疆地区相似开采条件下顶板导水裂隙带发育高度计算提供理论依据。

关键词：导水裂隙带弱胶结顶板 S-R稳定理论岩块回转角垮落带高度

利用CRISPR-Cas9技术敲除MAS1基因的质粒构建与酶切方案优化的研究

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基因组学与应用生物学 2019年第4期38卷 1552-1559页

作者：孙芳廖维芳张洋洋赵瑞强贺淑嘉廖志红林文珍广西医科大学生物化学与分子生物学教研室南宁530021 广西高校生物分子医学研究重点实验室南宁530021

CRISPR-CAS9技术是新一代基因编辑技术,可简便快捷地对哺乳动物细胞进行指定基因的敲除,实现沉默外源基因表达的目的。但传统的CRISPR-CAS9技术提供的酶切方案没有特异性,致使酶切效率不稳定,影响胶回收率以及后续实验。本实验通过改变... 详细信息

CRISPR-CAS9技术是新一代基因编辑技术,可简便快捷地对哺乳动物细胞进行指定基因的敲除,实现沉默外源基因表达的目的。但传统的CRISPR-CAS9技术提供的酶切方案没有特异性,致使酶切效率不稳定,影响胶回收率以及后续实验。本实验通过改变酶切体系大小,以及酶切反应时间,继而通过胶回收率及测序检测的方法验证最佳酶切条件,最后通过荧光定量PCR和Western blotting实验检测目的基因的表达量,确认是否成功敲除目的基因。研究结果说明:BbsⅠ酶与px459质粒比值为1μL:500 ng,酶切体系为50μL,酶切时间为45 min时,酶切效果最佳、胶回收率最高,且此时目的基因在细胞内的表达量为0,确定该实验条件下目的基因被成功敲除。

关键词： CRISPR-Cas9技术优化酶切效率胶回收效率