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产黄青霉工业生产菌种基因报告系统的构建及启动子效率的评价

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菌物学报 2005年第3期24卷 376-384页

作者：任志红徐平王富强苏彩云丰玫玫张佳戴梦韦春玲穆岷贺建功华北制药集团新药研究开发有限责任公司石家庄050015

本研究以四种不同物种来源,不同代谢途径功能基因的启动子为材料,分别构建了以产黄青霉异青霉素N合成酶(IPNS)基因pcbC的启动子Pipns、构巢曲霉3-磷酸甘油醛脱氢酶基因gpdA的启动子PgpdA、构巢曲霉色氨酸合成基因trpC的启动子PtrpC、粗... 详细信息

本研究以四种不同物种来源,不同代谢途径功能基因的启动子为材料,分别构建了以产黄青霉异青霉素N合成酶(IPNS)基因pcbC的启动子Pipns、构巢曲霉3-磷酸甘油醛脱氢酶基因gpdA的启动子PgpdA、构巢曲霉色氨酸合成基因trpC的启动子PtrpC、粗糙脉胞霉氨基酸合成交叉途径控制基因cpc的启动子Pcpc为启动子,腐草霉素(phleomycin)抗性基因为报告基因,构巢曲霉色氨酸合成基因trpC的终止子TtrpC为终止信号的丝状真菌转基因质粒,建立了产黄青霉工业生产菌种启动子筛选、评价体系,调查了这四种启动子的强弱。结果表明选择性标记基因受强启动子驱动可以提高产黄青霉工业生产菌种的转基因效率。研究也显示这四种启动子的强弱的顺序为PgpdA、Pcpc、Pipns和PtrpC。

关键词：调控元件抗性基因转化效率

蛇孢菌素产生菌F02Z2172的形态及分子鉴定

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蛇孢菌素产生菌F02Z2172的形态及分子鉴定

2010年中国药学大会暨第十届中国药师周

作者：李业英石英路新华崔晓兰赵颖刘静张华贺建功华北制药集团新药研究开发中心微生物药物国家工程研究中心河北省工业微生物代谢工程技术研究中心

从厦门武夷山自然保护区土壤样品中分离得到一株可产生蛇孢菌素的丝状真菌,编号为F02Z2172。通过对其宏观特征、显微特征进行研究并对其ITS序列进行分子系统学分析,将其鉴定为伪弯头曲霉,并对伪弯头曲霉与焦色组内其他菌种的关系进行了... 详细信息

从厦门武夷山自然保护区土壤样品中分离得到一株可产生蛇孢菌素的丝状真菌,编号为F02Z2172。通过对其宏观特征、显微特征进行研究并对其ITS序列进行分子系统学分析,将其鉴定为伪弯头曲霉,并对伪弯头曲霉与焦色组内其他菌种的关系进行了讨论。

关键词：蛇孢菌素形态学分子系统学焦色组伪弯头曲霉

蛇孢菌素产生菌F02Z2172的形态及分子鉴定

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蛇孢菌素产生菌F02Z2172的形态及分子鉴定

2009年中国药学大会暨第九届中国药师周

关键词：蛇孢菌素形态学分子系统学焦色组伪弯头曲霉

酮古龙酸菌WB0104中L-山梨糖脱氢酶的分离和性质研究

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工业微生物 2008年第1期38卷 10-14页

作者：郝爱鱼贾茜吴洪涛周华芮耿文飞高文利赵军强贺建功华北制药集团新药研究开发公司石家庄050015 华北制药集团维尔康公司石家庄050015

从两步法生产维生素C重要前体2-酮基-L-古龙酸(2-Keto-L-gulonic acid,简称2-KLGA)的第二步转化菌酮古龙酸菌***0104的细胞质中,经SP-SepharoseFast Flow、DEAE-CL6B和凝胶过滤的方法,分离到了L-山梨糖脱氢酶(L-Sorbose Dehydrogenase,简称SDH),质谱测定该酶分子量为60.499kd,而用凝胶过滤法测定其分子量为139.053±4.96kd,由此推测该酶为具有两个相同亚基的二聚体;辅基分析表明SDH含有辅基pyrroloquinolinequinone(PQQ)。以L-山梨糖(L-Sorbose)为底物,2,6-Dichlorophenolindophenol(DCIP)为电子受体,SDH具有明显的脱氢酶活性;以L-Sorbose为底物的Km值为23.94mmol/L。在无细胞体系中,在phenazine methosulfate(PMS)存在的情况下,SDH能将底物L-Sorbose直接转化为2-KLGA。

关键词： L-山梨糖 2-酮基-L-古龙酸 L-山梨糖脱氢酶维生素C

一种磷脂酶A2抑制剂体外高通量筛选方法的建立

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一种磷脂酶A2抑制剂体外高通量筛选方法的建立

2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周

作者：朱京童郑智慧路新华范玉玲张华贺建功华北制药集团新药研究开发中心微生物药物国家工程研究中心

目的:磷脂酶A2（PLA2）是一个重要的抗炎和心血管疾病药物靶点,本研究拟建立一种荧光的磷脂酶A2（PLA2）抑制剂体外高通量药物筛选方法。方法:以7-Hydroxycoum arinyl-arachidonate为荧光底物,水解产物在355ex/460em下有特定荧光,间接... 详细信息

目的:磷脂酶A2（PLA2）是一个重要的抗炎和心血管疾病药物靶点,本研究拟建立一种荧光的磷脂酶A2（PLA2）抑制剂体外高通量药物筛选方法。方法:以7-Hydroxycoum arinyl-arachidonate为荧光底物,水解产物在355ex/460em下有特定荧光,间接反映酶活性。利用96孔板,通过对酶浓度、反应时间等多个条件的优化,摸索最佳的反应条件。利用阳性药二乙烯三胺五乙酸进行模型验证。结果:在酶浓度2.25U/ml、底物浓度30μM和反应时间30min时,为最适反应条件。阳性药在该模型上表现出好的浓度剂量依赖抑制效果,IC50为0.37μmol/L。利用该模型,本研究从微生物次生代谢产物筛选得到两个活性化合物F02ZA-2396A、F02ZA-2396B,其IC50分别为152μM和72μM。结论:本研究建立了一个高通量的磷脂酶A2抑制剂体外药物筛选方法,该方法灵敏、快捷、可操作强,可用于各种来源的化合物的快速活性筛选。

关键词：磷脂酶A2 抑制剂体外荧光法

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蛇莓化学成分的研究

蛇莓化学成分的研究

2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周

作者：张兰天段宏泉路新华郑智慧张华贺建功华北制药集团新药研究开发有限责任公司天津医科大学基础医学研究中心药学院

目的:研究蛇莓Duchesnea indica（Andr.）Focke.中的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、反相HPLC制备色谱等多种方法分离纯化得到化合物,采用波谱方法鉴定化合物的结构。结果:从蛇莓中分离得到10个化合物,2α-3α-dihydroxyur... 详细信息

目的:研究蛇莓Duchesnea indica（Andr.）Focke.中的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、反相HPLC制备色谱等多种方法分离纯化得到化合物,采用波谱方法鉴定化合物的结构。结果:从蛇莓中分离得到10个化合物,2α-3α-dihydroxyurs-12,18-en-27-oic acid（1）,2α-3α-dihydroxyurs-12,19-en-27-oic acid（2）,2α-羟基乌苏酸（Corosolic acid）（3）,乌苏酸（Ursolic acid）（4）,3-O-乙酰坡模醇（Pomolicacid acetate）（5）,坡模酸（Pomolic acid）（6）,蔷薇酸（Euscaphic acid）（7）,Doianoterpene D（8）,4-hydroxy-trans-cinnacic acid（9）,3-hydroxy-4-methoxy-trans-cinnacic acid（10）。结论:化合物1,2,5,6,8～10为首次从该植物中分离得到。

关键词：蛇莓乌苏烷三萜

微生物来源的次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶抑制剂2264 A和B的研究

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中国抗生素杂志 2008年第8期33卷 463-466页

作者：林洁可爱兵张雪莲郑智慧朱京童路新华李业英崔晓兰石英张华贺建功华北制药集团新药研究开发中心微生物药物国家工程研究中心石家庄050015

利用自建的快速高效的次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶(Inosine monophosphate dehydrogenase,IMPDH)抑制剂的高通量筛选模型,筛选分离得到两个活性化合物2264 A和B,通过对其紫外、质谱、核磁等理化数据的分析确定2264 A为cyclopenol,2264 B为vi... 详细信息

利用自建的快速高效的次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶(Inosine monophosphate dehydrogenase,IMPDH)抑制剂的高通量筛选模型,筛选分离得到两个活性化合物2264 A和B,通过对其紫外、质谱、核磁等理化数据的分析确定2264 A为cyclopenol,2264 B为viridicatol。2264 A和B对IMPDH的IC50分别为69.68、11.86μmol/L;体外脾淋巴细胞增殖实验显示2264 A和B分别在322.6和65.8μmol/L浓度下可完全抑制由ConA活化的脾淋巴细胞增殖,表明2264 B在分子水平和细胞水平均表现出较好的免疫抑制活性,2264 A的活性相对较弱。

关键词：次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶免疫抑制剂 Cyclopenol Viridicatol

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玉竹中新高异黄酮类化合物及其生物活性研究

玉竹中新高异黄酮类化合物及其生物活性研究

2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周

作者：李丽红任风芝陈书红郑智慧高月麒张华贺建功华北制药集团新药研究开发有限责任公司天然药物室

目的研究玉竹的生物活性成分。方法利用各种柱色谱及高压液相色谱等方法进行分离和纯化,根据理化性质和光谱数据对化合物结构进行鉴定;并应用高通量筛选模型对化合物进行评价。结果从玉竹中分离得到三个高异黄酮类化合物,确定结构分别为... 详细信息

目的研究玉竹的生物活性成分。方法利用各种柱色谱及高压液相色谱等方法进行分离和纯化,根据理化性质和光谱数据对化合物结构进行鉴定;并应用高通量筛选模型对化合物进行评价。结果从玉竹中分离得到三个高异黄酮类化合物,确定结构分别为5,7-dihydroxy-6-methoxyl-8-methyl-3-（2′,4′-dihydroxybenzyl）chroman-4-one（Ⅰ）,5,7-dihydroxy-6-methyl-3-（2′,4′-dihydroxybenzyl）-chroman-4-one（II）,5,7-dihydroxy-6-methoxyl-8-methyl-3-（4′-methoxybenzyl）chroman-4-one（Ⅲ）,三个化合物均显示了较强的抗肿瘤活性和抗炎活性。结论化合物I～III为未见文献报道的新化合物,其抗肿瘤和抗炎活性为首次报道。

关键词：玉竹高异黄酮化学成分抗肿瘤抗炎人白细胞弹性蛋白酶

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咪唑立宾产生菌的选育及其发酵的初步研究

咪唑立宾产生菌的选育及其发酵的初步研究

创新药物及新品种研究、开发学术研讨会

作者：李业英董悦生刘梅崔晓兰路新华张华贺建功华北制药集团新药研究开发中心国家为生物工程中心华北制药集团新药研究开发中心国家为生物工程中心华北制药集团新药研究开发中心国家为生物工程中心华北制药集团新药研究开发中心国家为生物工程中心华北制药集团新药研究开发中心国家为生物工程中心华北制药集团新药研究开发中心国家为生物工程中心华北制药集团新药研究开发中心国家为生物工程中心

咪唑立宾(mizoribine,MZ,bredinin)是日本旭化成从土壤霉菌Eupenicillum brefeldianum 的培养滤液中分离而得的一种咪唑核苷类抗生素,分子式为C9H13N3O6。它是一种嘌呤核苷合成抑制剂,能特异性地抑制快速增长的淋巴细胞、如T细胞、B细... 详细信息

咪唑立宾(mizoribine,MZ,bredinin)是日本旭化成从土壤霉菌Eupenicillum brefeldianum 的培养滤液中分离而得的一种咪唑核苷类抗生素,分子式为C9H13N3O6。它是一种嘌呤核苷合成抑制剂,能特异性地抑制快速增长的淋巴细胞、如T细胞、B细胞的分裂和增殖,从而产生免疫抑制作用。作为免疫抑制剂,1991年12月起在日本临床肾移植中应用。近年来在临床上除用于抑制。肾移植时的排斥反应外,同时也可用于治疗狼疮性肾炎、类风湿性关节炎及肾病综合征等自身免疫性疾病。以从土壤中筛选得到的能够产生咪唑立宾的丝状真菌作为野生出发菌株,经菌种鉴定为正青霉属(***)。然而由于野生菌株的发酵单位较低,不具备产业化价值。为提高其发酵单位,首先对其进行了自然选育的研究。通过对野生菌株进行自然选育,得到两株发酵单位明显提高的菌株MZ-1-4和MZ-1-6,发酵单位分别达到出发菌株的308％和336％。接着以 MZ-1-6作为出发菌株,在初始发酵配方的基础上,采用L9(34)的正交实验对其最佳发酵培养基进行了初步探索。通过对结果进行直观分析得到了各主要培养基成分的最佳配比。在该配方下 MZ-1-6的发酵单位提高了121％。随后又对MZ-1-6进行了紫外诱变育种的研究,经过诱变选育,得到了菌株MZ-2-43,其发酵单位是MZ-1-6的2．75倍。最后应用均匀实验设计软件,以工业化原材料替代实验室原材料,对MZ-2-43的最佳培养基组分进行了探索,得到了该菌株的最适发酵培养基,在此配方下,其发酵单位又进一步提高了22．2％。总之,经过一系列的菌种选育和发酵培养基的研究,最终获得了菌株MZ-2-43,在其最佳发酵培养基中,咪唑立宾的发酵单位提高到了野生出发菌株的10．3倍,初步具备了产业化的潜力。

关键词：咪唑立宾自然分离诱变正交及均匀设计