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清热解毒药抗金黄色葡萄球菌黏附乳腺上皮细胞机理研究

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清热解毒药抗金黄色葡萄球菌黏附乳腺上皮细胞机理研究

作者：谷静娟新疆农业大学

学位级别：硕士

试验通过乳腺基部注射金黄色葡萄球菌悬液感染小鼠乳腺诱发乳腺炎，并用金银花和/或连翘三种清热解毒药对金黄色葡萄球菌诱发的小鼠乳腺炎进行预防和治疗，同时分别用EGFP标记*** BL21菌株和奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌标准菌株黏附奶... 详细信息

试验通过乳腺基部注射金黄色葡萄球菌悬液感染小鼠乳腺诱发乳腺炎，并用金银花和/或连翘三种清热解毒药对金黄色葡萄球菌诱发的小鼠乳腺炎进行预防和治疗，同时分别用EGFP标记*** BL21菌株和奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌标准菌株黏附奶牛乳腺上皮细胞制作细菌黏附细胞模型，共同探讨金黄色葡萄球菌感染乳腺的致病机理，以及金银花、连翘防治乳腺炎的作用机理、清热解毒药抗金黄色葡萄球菌黏附乳腺上皮细胞作用机理。采用组织块接种法结合胰酶消化体外分离培养荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞，当细胞长满培养孔底80%左右时，用胰酶经过2-3次差时消化培养的原代细胞即得到纯化的乳腺上皮细胞，对细胞角蛋白18的表达进行检测，鉴定结果显示阳性，即所培养的细胞为上皮型。且奶牛乳腺上皮细胞在波长为514nm光激发下，细胞发出红色荧光。证明乳腺上皮细胞具有自发荧光的特性。利用奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌和EGFP标记*** BL21感染乳腺上皮细胞，制作细菌菌黏附乳腺细胞的模型，革兰氏染色法、*** BL21经IPTG诱导发荧光后，利用普通光学显微镜、激光共聚焦显微镜和电子扫描显微镜观察：奶牛乳腺上皮细胞胞质被染成浅粉红色，胞核被染成紫红色;粉红色*** BL21细菌紧密聚集在奶牛乳腺上皮细胞胞质周围，被染成紫红色的金黄色葡萄球菌，大量成簇聚集在奶牛乳腺上皮细胞胞质周围，靠近胞核;EGFP标记*** BL21细菌在488nm绿光激发显示绿色荧光，奶牛乳腺上皮于514nm红光激发下，细胞发出红色荧光，因此可清楚观察到荧光细菌黏附乳腺上皮细胞的部位;金黄色葡萄球菌呈典型的葡萄串状聚集成团黏附乳腺上皮细胞表面。三种方法均证明金黄色葡萄球菌和EGFP标记*** BL21成功黏附到乳腺上皮细胞。通过不同浓度104CFU·L-1、105CFU· L-1、106CFU·L-1金黄色葡萄球菌悬液采用基部注入感染小鼠乳腺，诱发小鼠乳腺炎病理模型，H.E.染色观察病理变化。试验结果表明，随着接菌浓度的增加，小鼠乳腺病理变化加剧：由低浓度104CFU·L-1接菌组出现毛细血管有轻度充血、少量腺上皮细胞脱落;至高浓度106CFU·L-1接菌组乳腺腺小叶坏死，间质炎性水肿，腺泡结构崩解，大量腺上皮细胞坏死、脱落;105CFU·L-1组乳腺小叶间质轻微水肿、噬中性粒细胞浸润，腺泡局部崩溃、少量噬中性粒细胞浸润，腺泡腔内少量腺上皮细胞坏死、脱落，毛细血管少量出血。最终本试验选用105CFU·L-1金黄色葡萄球菌悬液作为小鼠乳腺炎诱导剂量。利用清热解毒药金银花和/或连翘水煎液防治乳腺炎小鼠，通过细菌计数检测乳腺感染细菌量、H.E.染色观察病变程度、甲苯胺蓝染色观察肥大细胞数变化、ELISA检测血清中TNF-α含量变化，探讨金银花、连翘防治小鼠乳腺炎的作用效果。试验结果表明，金银花、连翘治疗和预防均可抑制乳腺细菌感染、抑菌效果方面预防比治疗时显著，且三种药中金银花效果优于合药连翘次之。中药预防和治疗均可使乳腺病变减轻，使乳腺功能恢复正常。治疗组中药各组血清中TNF-α的水平趋于正常，预防组中药各组血清中TNF-α的水平低于正常组，其中金银花效果优于合药连翘次之。由肥大细胞显示机体免疫及抗感染情况，治疗组中药各组肥大细胞数均趋于正常，表明机体炎症减轻、细菌感染情况减弱;预防组各种药组肥大细胞数虽减少但未达到正常水平，表明机体仍处于抗感染或炎症期。综上所述，中药金银花、连翘对金黄色葡萄球菌诱发的乳腺炎小鼠防治时，治疗效果好于预防效果，而金银花、连翘和合药之间的效果差异不显著。

关键词：金银花连翘金黄色葡萄球菌乳腺上皮细胞黏附

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搞好档案管理推动企业升级深入发展

江苏煤炭 1991年第2期 48-50页

作者：谷静娟江苏省煤炭工业总公司

本文以实例说明企业档案管理的重要性,讨论了我省煤炭系统企业档案管理工作的现状与存在问题,强调要继续深入贯彻《中华人民共和国档案法》,并提出了进一步搞好企业档案管理工作的几点看法,以推动企业升级深入发展,促进企业的技术进步。

关键词：煤矿档案管理企业升级

金银花、连翘对大肠杆菌感染模型小鼠血清Th1/Th2细胞因子的调节作用

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现代中西医结合杂志 2013年第6期22卷 594-596,599页

作者：厉世伟谷静娟赵璐李龙况玲新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

目的探讨金银花、连翘对大肠杆菌感染小鼠的保护作用机制。方法将雌性昆明种小白鼠随机分为金银花组和连翘组,每组再分为正常组、中药组、模型组和治疗组4个亚组进行处理,观察小鼠的临床状态,双抗体夹心法酶联免疫吸附实验(Elisa)检测... 详细信息

目的探讨金银花、连翘对大肠杆菌感染小鼠的保护作用机制。方法将雌性昆明种小白鼠随机分为金银花组和连翘组,每组再分为正常组、中药组、模型组和治疗组4个亚组进行处理,观察小鼠的临床状态,双抗体夹心法酶联免疫吸附实验(Elisa)检测血清γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-10(IL-10)的表达水平。结果金银花(0.01 kg/L)、连翘(0.01 kg/L)水煎液对小鼠大肠杆菌的感染有保护作用。与正常组及中药组比较,模型组与治疗组小鼠血清IFN-γ、IL-4表达及IFN-γ/IL-4、IFN-γ/IL-10比值均显著升高(P均0.05)。结论感染模型小鼠辅助性T淋巴细胞1型/2型(Th1/Th2)细胞因子分泌亢进,Th1/Th2平衡有向Th1型漂移的特点。金银花、连翘水煎液均能有效保护感染模型小鼠,其调节小鼠的免疫功能可能与调节Th1/Th2平衡相关。

关键词：炎症模型金银花连翘 IFN-γ IL-4 Th1 Th2

女贞枸杞散预防断奶仔猪腹泻效果和对血液白细胞数的影响

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动物医学进展 2012年第2期33卷 113-116页

作者：陈贯超董发明张晓锋谷静娟石应顺王登辉河南科技大学动物科技学院河南洛阳471003 洛阳春都投资股份有限公司河南洛阳471000 新密市农业技术推广中心河南郑州452370

为探讨以女贞子、枸杞子、穿心莲、大青叶等多味中药组成的"女贞枸杞散"对断奶仔猪腹泻的预防效果和对外周血各类白细胞数量的影响。根据体重相近、公母各半的原则选用80头体重为10kg左右的"杜长大"三元杂交断奶仔猪,随机分4组,分别为... 详细信息

为探讨以女贞子、枸杞子、穿心莲、大青叶等多味中药组成的"女贞枸杞散"对断奶仔猪腹泻的预防效果和对外周血各类白细胞数量的影响。根据体重相近、公母各半的原则选用80头体重为10kg左右的"杜长大"三元杂交断奶仔猪,随机分4组,分别为试验Ⅰ组(日粮中加0.4%"女贞枸杞散"),Ⅱ组(添加0.6%),Ⅲ组(添加0.8%)和对照组(普通日粮)。详细记录仔猪腹泻情况,计算腹泻率、腹泻频率、腹泻指数等。试验结束后采血,测定各类白细胞数量,结果表明,"女贞枸杞散"能有效地降低断奶仔猪的腹泻率,改善仔猪的生长性能,促进血液中的白细胞尤其是淋巴细胞的的生成,提高机体免疫力。

关键词：女贞枸杞散断奶仔猪腹泻白细胞

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荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞的分离培养

中兽医医药杂志 2013年第1期32卷 5-9页

作者：厉世伟谷静娟赵璐李龙王雪涛况玲新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052

目的:建立荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞的分离培养方法。方法:采用组织块种植法培养奶牛乳腺上皮细胞,利用胰蛋白酶差时消化法分离、纯化上皮细胞。结果:成功培养出奶牛乳腺上皮细胞,显微镜下观察,纯化的乳腺上皮细胞呈典型上皮细胞形态,细... 详细信息

目的:建立荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞的分离培养方法。方法:采用组织块种植法培养奶牛乳腺上皮细胞,利用胰蛋白酶差时消化法分离、纯化上皮细胞。结果:成功培养出奶牛乳腺上皮细胞,显微镜下观察,纯化的乳腺上皮细胞呈典型上皮细胞形态,细胞之间排列紧密,呈鹅卵石铺路样,形态均一,多角形的单层聚集。通过荧光免疫细胞染色方法对细胞骨架蛋白-角蛋白18进行鉴定,呈现阳性反应。乳腺上皮细胞增殖旺盛,经25次以上传代后长势仍然良好。结论:采用组织块种植法结合胰酶差时消化法成功获得纯化的奶牛乳腺上皮细胞。

关键词：荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞细胞培养组织块种植法

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黑种草籽提取物对炎症模型的作用研究

中兽医医药杂志 2013年第5期32卷 12-17页

作者：厉世伟谭秀芳谷静娟赵璐郭晓吴忠洋况玲新疆农业大学动物医学学院新疆医科大学药学院昌吉市庙尔沟乡畜牧兽医草原站

目的:探讨黑种草籽乙酸乙酯提取物和乙醇提取物对成纤维细胞炎症模型作用及保护大肠杆菌感染小鼠的作用机制。方法:将两种提取物按不同浓度添加到细胞炎症模型中,观察细胞形态;将两种提取物均按1 g/mL浓度腹腔注射给炎症模型小鼠,观察... 详细信息

目的:探讨黑种草籽乙酸乙酯提取物和乙醇提取物对成纤维细胞炎症模型作用及保护大肠杆菌感染小鼠的作用机制。方法:将两种提取物按不同浓度添加到细胞炎症模型中,观察细胞形态;将两种提取物均按1 g/mL浓度腹腔注射给炎症模型小鼠,观察小鼠临床症状,ELISA检测血清白细胞介素-10(IL-10)的表达水平。结果:0.1 g/mL乙酸乙酯提取物和0.4 g/mL乙醇提取物均可引起细胞病变,细胞固缩脱壁或裂解破碎;乙醇提取物在其安全浓度0.1-0.2 g/mL、乙酸乙酯提取物在其安全浓度0.025-0.05 g/mL均对细胞炎症模型有抗炎作用。与对照组比较,模型组小鼠血清IL-10显著升高(P<0.05);两种提取物治疗组IL-10水平均较模型组低,与对照组比较无显著差异,两种提取物(1 g/mL)均有降低炎症小鼠血清IL-10水平的趋势,对小鼠大肠杆菌的感染有保护作用,且乙醇提取物较乙酸乙酯提取物有效。结论:黑种草籽乙酸乙酯提取物和乙醇提取物在安全浓度内均对细胞炎症模型有抗炎作用;两种提取物(1 g/mL)均可降低炎症小鼠血清IL-10水平,且对小鼠大肠杆菌感染有保护作用,乙醇提取物较乙酸乙酯提取物好。

关键词：黑种草籽细胞炎症模型动物炎症模型 IL-10

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科技成果档案的程序化管理浅识

江苏煤炭 1993年第3期 57-57页

作者：谷静娟江苏省煤炭总公司

科技成果档案是科学技术研究活动全过程的直接记录,它既是科研成果的载体,又是继续开展科研活动的前提,确保其内容上的完整、准确、系统和形式上的标准、规范是其管理的首要任务。笔者对科技档案程序化管理有几点浅识: 第一、科技成果... 详细信息

科技成果档案是科学技术研究活动全过程的直接记录,它既是科研成果的载体,又是继续开展科研活动的前提,确保其内容上的完整、准确、系统和形式上的标准、规范是其管理的首要任务。笔者对科技档案程序化管理有几点浅识: 第一、科技成果档案特点 (1)真实性。真实性是科技成果档案最重要的基本特征,因为科技成果档案是科技实践和生产实践的客观反映,是这些活动的真实记录。(2)价值性。科技成果档案记载了科技活动的过程和结果,经开发利用可转化为生产力,产生效益。(3)可传递性。

关键词：科技成果档案程序化

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五味消毒饮对炎症模型的作用研究

中兽医医药杂志 2014年第3期33卷 13-17页

作者：谷静娟赵璐厉世伟郭晓迟姗姗吴忠洋况玲新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 昌吉市庙尔沟乡畜牧兽医草原站新疆昌吉831100

目的:探讨五味消毒饮水煎液对乳腺上皮细胞炎症模型的作用及对大肠杆菌感染小鼠的保护作用机制。方法:将96孔板细胞分为对照组、模型组、治疗组和中药组。将五味消毒饮水煎液按终浓度0.2 g/mL、0.4 g/mL和0.8 g/mL添加到乳腺上皮细胞炎... 详细信息

目的:探讨五味消毒饮水煎液对乳腺上皮细胞炎症模型的作用及对大肠杆菌感染小鼠的保护作用机制。方法:将96孔板细胞分为对照组、模型组、治疗组和中药组。将五味消毒饮水煎液按终浓度0.2 g/mL、0.4 g/mL和0.8 g/mL添加到乳腺上皮细胞炎症模型中,观察细胞形态,用MTT法检测各组细胞OD值;将24只小鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组8只,将1 g/mL的五味消毒饮水煎液腹腔注射于炎症模型小鼠,观察小鼠临床症状,以ELISA法检测血清白细胞介素-10(IL-10)的表达水平。结果:五味消毒饮水煎液0.8 g/mL使乳腺上皮细胞固缩、脱壁;0.2 g/mL对细胞炎症模型有显著的保护作用,细胞形态与对照组相同。五味消毒饮水煎液(1 g/mL)对小鼠大肠杆菌感染有保护作用,72 h内,对照组饮水、摄食均衡,精神状态良好,零死亡;模型组饮水、摄食减少,精神萎靡不振,死亡7只,治疗组死亡1只。与对照组比较,模型组小鼠血清IL-10显著升高(P<0.05);治疗组IL-10浓度较模型组低,与对照组比较无显著差异,五味消毒饮有降低炎症小鼠血清IL-10浓度的趋势。结论:五味消毒饮水煎液0.2 g/mL对细胞炎症模型有显著的保护作用,1 g/mL对小鼠大肠杆菌感染有保护作用,且能降低炎症小鼠血清IL-10浓度,促进小鼠免疫机能发挥作用。

关键词：五味消毒饮乳腺上皮细胞细胞模型炎症模型 IL-10

金银花、连翘对金黄色葡萄球菌诱发小鼠乳腺炎的防治作用研究

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中兽医医药杂志 2015年第3期34卷 44-47页

作者：张彩云谷静娟周银萍刘媛媛买占海齐晓娟阿依德古力.哈德依汗张桃齐文静况玲新疆农业大学动物医学院新疆乌鲁木齐830052

目的:研究中草药方剂预防和治疗小鼠乳腺炎炎症模型的效果。方法:用金黄色葡萄球菌感染小鼠建立乳腺炎炎症模型,后灌服金银花、连翘及其复方水煎液,观察其治疗乳房炎的效果;正常小鼠给药后,用金黄色葡萄球菌感染,观察其预防乳腺炎的效... 详细信息

目的:研究中草药方剂预防和治疗小鼠乳腺炎炎症模型的效果。方法:用金黄色葡萄球菌感染小鼠建立乳腺炎炎症模型,后灌服金银花、连翘及其复方水煎液,观察其治疗乳房炎的效果;正常小鼠给药后,用金黄色葡萄球菌感染,观察其预防乳腺炎的效果。用平板计数法计数各组乳腺组织的细菌感染数量;制作乳腺组织的石蜡切片,观察H.E染色和甲苯胺染色的乳腺组织病理变化、肥大细胞的数量和分布部位;尾静脉采集各组小鼠的血液,用ELISA法检测血清中TNF-α的含量。结果:预防组、治疗组与模型组比较,小鼠乳腺中细菌感染的数量均减少,且金银花的作用较连翘和混合药液显著;观察乳腺组织及细胞发现,预防组和治疗组对小鼠乳腺组织的病理变化均有一定的改善作用;预防组和治疗组小鼠血清中TNF-α的含量较模型组均降低。结论:金银花、连翘及其复方药液对小鼠乳腺炎均有很好的治疗效果,对该病原菌引起的乳房炎有较好的预防效果,其中金银花的作用效果最显著。

关键词：金银花连翘乳腺炎病理模型金黄色葡萄球菌