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人工表皮构建及其结构的研究

军事医学科学院院刊 2002年第4期26卷 267-269页

作者：刘杰吴小红崔雪梅王德文谷庆阳张燕徐龙河杨颖颙于淑贤军事医学科学院放射医学研究所北京100850 解放军总医院北京100853 中国皮革和制鞋工业研究院北京100016

目的 :以角朊细胞作为种子细胞 ,构建人工表皮 ,检测培养的人工表皮的结构 ,为进一步进行动物移植试验奠定基础。方法 :(1)采用分散酶 (dispase)分离表皮细胞 ,以无血清培养法培养表皮细胞。 (2 )人工表皮构建成功后 ,分别进行HE染色及... 详细信息

目的 :以角朊细胞作为种子细胞 ,构建人工表皮 ,检测培养的人工表皮的结构 ,为进一步进行动物移植试验奠定基础。方法 :(1)采用分散酶 (dispase)分离表皮细胞 ,以无血清培养法培养表皮细胞。 (2 )人工表皮构建成功后 ,分别进行HE染色及透射电镜观察。 (3)角蛋白免疫组织化学染色。结果 :经过 2～ 3周的培养 ,表皮细胞连接成片 ,呈现典型的“铺路石”状 ;继续培养 5～ 7d后 ,将细胞膜消化下来 ,HE染色显示由 2～ 4层细胞组成 ,电镜可以观察到桥粒及张力微丝束的结构 ;免疫组织化学染色显示培养细胞和细胞膜角蛋白染色阳性。结论 :该人工构建表皮与人正常表皮结构类似。

关键词：人工表皮皮肤组织工程皮肤移植角朊细胞角蛋白

急性放射性皮肤溃疡发生发展过程中多种生长因子及其受体表达水平和对溃疡愈合影响的研究

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军事医学科学院院刊 2001年第4期25卷 251-254页

作者：谷庆阳曹卫红杨志祥杨文锋孙向黎高亚兵杨红军事医学科学院放射医学研究所北京100850 军事医学科学院附属医院北京100039

目的 :研究多种生长因子及其受体在急性放射性皮肤溃疡组织中的表达及对溃疡形成和发展的影响。方法 :采用雌性Wistar大鼠 ,以手术法建立单纯皮肤伤口动物模型 ,以60 Coγ射线局部照射法建立急性放射性皮肤溃疡动物模型。观察病变 5 5d ... 详细信息

目的 :研究多种生长因子及其受体在急性放射性皮肤溃疡组织中的表达及对溃疡形成和发展的影响。方法 :采用雌性Wistar大鼠 ,以手术法建立单纯皮肤伤口动物模型 ,以60 Coγ射线局部照射法建立急性放射性皮肤溃疡动物模型。观察病变 5 5d ,采用免疫组化、原位杂交和图像分析等方法检测单纯伤口及皮肤溃疡组织中表皮生长因子 (EGF) ,碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF) ,血管内皮生长因子 (VEGF) ,血小板衍生生长因子_B(PDGF_B) ,转化生长因子_β1(TGF_β1)等及其受体的转录和表达水平。结果 :照后 14d照射野内开始出现皮肤溃疡 ,之后逐渐扩大、融合、加深。皮肤受照射区多种细胞 ,特别是溃疡床表皮细胞、成纤维细胞及血管内皮细胞中EGF ,bFGF ,PDGF_B ,VEGF等因子及其受体的转录及表达水平均较正常皮肤组织有所增强 ,但与单纯伤口组比较 ,溃疡组织上述因子及其受体的转录及表达水平明显降低。TGF_β1及TGF_βR1在受照射皮肤中表达增强 ,溃疡床的阳性细胞数量较单纯伤口中减少 ,强度未见减弱。结论 :急性放射性皮肤溃疡组织中多种生长因子及其受体表达水平降低可能与放射性皮肤溃疡发生、发展及难愈合 (不能形成有效肉芽组织 )

关键词：辐射防护急性放射性皮肤溃疡生长因子生长因子受体伤口愈合

壳聚糖无纺布敷料对大鼠烧伤创面的促愈作用研究

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军事医学科学院院刊 2001年第1期25卷 173-174页

作者：谷庆阳高亚兵杨红崔雪梅刘春杰黄是是高怀升军事医学科学院放射医学研究所北京100850 军事医学科学院卫生装备研究所天津300050

壳聚糖是甲壳质的脱乙酰基产物，是一种多糖物质，其化学名为β（1-4）-2-氨基-2-脱氧-D-葡聚糖。据文献报道，壳聚糖对伤口愈合有一定的促进作用［1］，并可能有止血作用［2］。本研究旨在动物皮肤烧伤创面愈合模型上，对我院卫生装备... 详细信息

壳聚糖是甲壳质的脱乙酰基产物，是一种多糖物质，其化学名为β（1-4）-2-氨基-2-脱氧-D-葡聚糖。据文献报道，壳聚糖对伤口愈合有一定的促进作用［1］，并可能有止血作用［2］。本研究旨在动物皮肤烧伤创面愈合模型上，对我院卫生装备研究所研制的壳聚糖无纺布敷料对烧伤创面的作用及其机制作一探讨，并与临床常用敷料作对照，为临床提供新型、实用、经济、效佳的敷料提供实验依据。1 材料和方法雌性Wistar大鼠48只（由军事医学科学院动物中心提供），随机分为包扎组（30只）和暴露组（18只）。以2%戊巴比妥钠(30 mg/kg 体重)腹腔注射麻醉后，经背部脱毛（8%硫化钠），以70%酒精棉球消毒，然后以TWD恒温可调电烫仪（成都飞机制造公司生产）在温度80℃、8 s作用时间下，沿脊柱上下烫两个圆形深二度创面，创面之间间隔2 cm。烫头直径为2.5 cm，压力为1 kg。烫完后以70%酒精消毒，暴露组直接放入单笼饲养，包扎组将近头部的创面敷以无菌壳聚糖无纺布2层，近尾部创面敷以无菌凡士林油纱布2层，然后外包以无菌纱布6层，单笼饲养。分别于伤后3，6，9，14，21和28 d各活杀5只（包扎组）及3只（暴露组）动物取材，部分标本（创面肉芽组织）经冷冻后留测羟脯氨酸含量［3］，其余以福尔马林固定，经石蜡包埋，切片后行HE染色。于上述各时间点将动物创面大小描印于透明薄膜上，以Leica QTM970型图像分析仪测算其面积。2 结果2.1 宏观观察观察期间所有动物全部存活。创面平均面积变化：暴露组伤口愈合较快，而包扎组伤口愈合较慢。伤后9 d和21 d壳聚糖包扎组创面平均面积小于油纱布包扎组面积。2.2 光镜观察结果伤后3d：烫伤部位表皮、真皮呈半均质状，毛囊结构完全破坏，胶原纤维变性，真皮深层与肌层间有充血、出血现象。各组均可见少量成纤维细胞和中性粒细胞出现于伤口底部组织中，表皮细胞亦开始增殖、移行。3组之间比较差别不明显。伤后6 d：各组创面底部组织中肉芽组织灶开始形成，并可见伤口周围表皮细胞增殖、移行。各组间未见明显差异。伤后9 d：各组创面均形成肉芽组织层。其中以暴露组肉芽组织层最厚，成纤维细胞和新生血管数量亦最多（+++）（图1A）；壳聚糖包扎组肉芽组织层略薄（++）（图1B）；而油纱布组仅出现较大的肉芽组织灶，成纤维细胞和新生血管数量最少（+）（图1C）。伤后14 d：各组创面肉芽组织层继续增厚。仍以暴露组为最厚，新生肉芽组织及新生表皮细胞分化亦最为成熟；壳聚糖组肉芽组织层较薄，其中成纤维细胞和新生毛细血管增殖较旺盛；油纱布包扎组肉芽组织含量明显少于壳聚糖包扎组。伤后21 d：暴露组创面已愈合，表皮细胞层较薄，成纤维细胞变得细小，胶原纤维束较多；壳聚糖包扎组肉芽组织层已基本填补组织缺损，但表皮细胞层尚未完全覆盖创面，肉芽组织中胶原纤维束已较明显；油纱布包扎组伤口内肉芽组织层急剧增厚，已大部填充组织缺损，但其中胶原纤维含量较少。2.3 伤口肉芽组织中羟脯氨酸含量的测定在伤后9，14，21和28 d，羟脯氨酸平均含量均以暴露组为最高，壳聚糖组次之，而以油纱布对照组含量最低。

关键词：壳聚糖无纺布敷料烧伤创面愈合生物敷料

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电磁脉冲对眼辐射损伤的研究

军事医学科学院院刊 2004年第2期28卷 120-122页

作者：姜涛王德文张建单清高亚兵何芳王晓民彭瑞云谷庆阳军事医学科学院放射医学研究所北京100850

目的 :通过电磁脉冲 (EMP)辐照成年犬 ,长期动态观察角膜、晶状体及视网膜的病理变化 ,探讨EMP对视觉系统的影响。方法 :高场强 (2～ 12 )× 10 4V/m的EMP、1～ 30次辐照实验犬 ,采用Feulgen ,AgNOR和PI染色方法 ,以激光扫描共聚焦显微... 详细信息

目的 :通过电磁脉冲 (EMP)辐照成年犬 ,长期动态观察角膜、晶状体及视网膜的病理变化 ,探讨EMP对视觉系统的影响。方法 :高场强 (2～ 12 )× 10 4V/m的EMP、1～ 30次辐照实验犬 ,采用Feulgen ,AgNOR和PI染色方法 ,以激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM)和图像分析技术进行检测。结果 :EMP辐射可使晶状体上皮细胞AgNOR和DNA含量下降 ,前皮质水肿 ,白内障发生。对EMP损伤敏感程度依次为 :晶状体 >角膜 >视网膜。损伤具有剂量效应相关性。结论 :高场强EMP可引起犬晶状体前皮质混浊、白内障发生 ,损伤具有剂量效应相关性。

关键词：电磁脉冲犬激光扫描共聚焦显微镜晶状体白内障

大鼠放射性皮肤溃疡组织中c-Fos、Rb蛋白表达研究

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辐射研究与辐射工艺学报 2000年第3期18卷 228-231页

作者：谷庆阳高亚兵王德文杨志祥赵坡杨文峰军事医学科学院放射医学研究所北京100850 解放军307医院外科北京100850

为研究大鼠放射性皮肤溃疡组织中ｃ－Ｆｏｓ、Ｒｂ表达。采用１４０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠进行局部照射（７射线）制备放射性皮肤溃疡动物模型。观察病变１年，然后采用ｃ－Ｆｏｓ、Ｒｂ多克隆抗体及免疫组化方法检测皮肤溃疡组织中... 详细信息

为研究大鼠放射性皮肤溃疡组织中ｃ－Ｆｏｓ、Ｒｂ表达。采用１４０只Ｗｉｓｔａｒ大鼠进行局部照射（７射线）制备放射性皮肤溃疡动物模型。观察病变１年，然后采用ｃ－Ｆｏｓ、Ｒｂ多克隆抗体及免疫组化方法检测皮肤溃疡组织中ｃ－Ｆｏｓ、Ｒｂ的表达情况。结果表明；ｃ－Ｆｏｓ、Ｒｂ的表达阳性率分别为４５．８％（３３／７）、６３．９％（４６／７２，两者阳性部位主要见于增生肥大的鳞状上皮细胞胞核、增生的间质成纤维细胞胞质及胞核、小血管内皮细胞中。初步的结论是；ｃ－Ｆｏｓ、Ｒｂ蛋白的高表达可能与放射性皮肤溃疡难愈合有关。

关键词：大鼠放射性皮肤溃疡癌基因 c-Fos Rb

放射复合伤口及单纯伤口愈合过程中肌成纤维细胞形态和数量变化的比较研究

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军事医学科学院院刊 2001年第3期25卷 205-207,218页

作者：高亚兵谷庆阳彭瑞云秦全红吴小红崔玉芳杨红王德文军事医学科学院放射医学研究所北京100850 军事医学科学院卫生学环境医学研究所天津300050

目的 :为研究放射复合伤口难愈合的机制 ,观察单纯伤口及放射复合伤口愈合过程中肌成纤维细胞数量的动态变化。方法 :利用本实验室已建立的放射复合伤口动物模型 ,采用光镜、电镜、免疫组化等方法 ,动态观察伤口愈合过程中肌成纤维细胞... 详细信息

目的 :为研究放射复合伤口难愈合的机制 ,观察单纯伤口及放射复合伤口愈合过程中肌成纤维细胞数量的动态变化。方法 :利用本实验室已建立的放射复合伤口动物模型 ,采用光镜、电镜、免疫组化等方法 ,动态观察伤口愈合过程中肌成纤维细胞数量的变化。结果 :2 5Gy(γ射线 )局部照射对伤口愈合有明显的损害作用 ,照射组伤口较对照组伤口延迟 6d愈合。与正常对照组相比 ,照射组肌成纤维细胞出现晚、高峰期数量少。结论 :辐射引起伤口愈合过程中肌成纤维细胞数量减少 ,时相延迟 ,从而影响伤口收缩。

关键词：伤口愈合肌成纤维细胞免疫组织化学放射复合伤

bFGF对辐射诱导的血管内皮细胞凋亡的作用

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军事医学科学院院刊 2003年第4期27卷 247-250页

作者：谷庆阳王德文李月娟彭瑞云董波王兆海刘杰邓桦姜涛军事医学科学院放射医学研究所北京100850

目的 :研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对辐射诱导的血管内皮细胞凋亡的作用。方法 :以6 0 Coγ射线照射法建立猪主动脉内皮细胞株PAE(porcineaorticendothelialcells)和原代培养的人脐带静脉内皮细胞 (humanum bilicalveinendotheli... 详细信息

目的 :研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对辐射诱导的血管内皮细胞凋亡的作用。方法 :以6 0 Coγ射线照射法建立猪主动脉内皮细胞株PAE(porcineaorticendothelialcells)和原代培养的人脐带静脉内皮细胞 (humanum bilicalveinendothelialcells ,HUVEC)的凋亡模型。以流式细胞术 [膜联蛋白 (annexin)_V_FITC +PI标记 ]评价细胞凋亡率 ,观察不同浓度的bFGF对细胞凋亡的影响。结果和结论 :bFGF对辐射诱导的血管内皮细胞凋亡有明显的抑制作用。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子血管内皮细胞细胞凋亡流式细胞术放射性皮肤溃疡

致伤前后不同时间照射对大鼠伤口愈合的影响规律

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中华放射医学与防护杂志 2000年第2期20卷 94-97页

作者：谷庆阳王德文高亚兵崔彩彬夏国伟崔雪梅熊呈琦北京放射医学研究所 100850

目的　观察致伤前后不同时间照射对大鼠伤口愈合的影响规律。方法　采用大体及光镜观察、免疫组化 (显示Ⅲ型胶原 )和原位杂交 (检测Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA)等方法 ,动态观察致伤前后不同时间照射对大鼠伤口愈合影响的病理变化过程。结果　伤... 详细信息

目的　观察致伤前后不同时间照射对大鼠伤口愈合的影响规律。方法　采用大体及光镜观察、免疫组化 (显示Ⅲ型胶原 )和原位杂交 (检测Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA)等方法 ,动态观察致伤前后不同时间照射对大鼠伤口愈合影响的病理变化过程。结果　伤前 2d至伤后 7d照射均能延迟伤口愈合 ,其中以伤后即刻照射影响最显著 ,其余依次为伤后 3d、伤前 2d及伤后 7d照射。结论　不同时间照射大鼠伤口愈合的影响程度不同。

关键词：伤口愈合胶原辐射

MAPK信号转导途径参与bFGF抑制辐射诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的作用

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中华放射医学与防护杂志 2003年第4期23卷 244-246页

作者：谷庆阳王德文彭瑞云董波王兆海刘杰邓桦王水明姜涛军事医学科学院放射医学研究所北京100850 解放军三○七医院

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对辐射诱导的血管内皮细胞凋亡的作用及其信号转导途径。方法　以6 0 Coγ射线照射建立原代分离培养的人脐带静脉内皮细胞凋亡模型 ,以流式细胞术 (Annexin V FITC +PI标记 )评价细胞凋亡率。... 详细信息

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对辐射诱导的血管内皮细胞凋亡的作用及其信号转导途径。方法　以6 0 Coγ射线照射建立原代分离培养的人脐带静脉内皮细胞凋亡模型 ,以流式细胞术 (Annexin V FITC +PI标记 )评价细胞凋亡率。观察不同浓度的bFGF和MEK的抑制剂U0 12 6对细胞凋亡的影响。结果　bFGF对辐射诱导的脐静脉内皮细胞凋亡有明显的抑制作用 ,细胞凋亡率可从 (35 2 2± 5 5 ) %降至 (11 6 7± 3 8) % ,而U0 12 6可部分阻断bFGF的抗凋亡作用 ,细胞凋亡率由 (10 5 9± 1 6 ) %升至 (17 96± 1 4 ) %。结论　bFGF可能通过MAPK信号转导途径抑制辐射诱导的脐静脉内皮细胞凋亡。

关键词： MAPK信号转导 bFGF抑制辐射诱导脐静脉内皮细胞细胞凋亡