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肠道侵袭性大肠埃希氏菌可视化环介导等温扩增方法的建立

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食品安全导刊 2024年第29期 57-61页

作者：杨穗珊常秀亭朱梦罗小菊寇力丹谢作蓉海南省检验检验研究院食品检验检测中心国家市场监管重点实验室(热带果蔬质量与安全)海南海口570100

肠道侵袭性大肠埃希氏菌(Enteroinvasive Escherichia coli,EIEC)是一种重要的食源性致病菌,可引起人类肠道疾病。本研究建立可视化环介导等温扩增(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)方法,针对EIEC特异性基因ipaH设计引物,优化反应条件,并对该方法的特异性、灵敏度进行评估。结果显示,所建立的LAMP方法在63℃反应45 min后可凭肉眼或紫外光下观察判定结果,对EIEC的检测灵敏度可达10 pg·μL^(-1)。该方法特异性良好,与其他常见肠道致病菌,如沙门氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌等均无交叉反应。本研究建立的可视化LAMP方法快速、灵敏度高、对设备要求低,可满足现场快速检测需求。

关键词：肠道侵袭性大肠埃希氏菌环介导等温扩增可视化

K-B法和VITEK2法检测108株大肠埃希氏菌18种抗生素耐药表型的一致性研究

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食品安全质量检测学报 2024年第10期15卷 31-38页

作者：梁其冰冯春艳谢作蓉冯晨韵袁维道陈彩霞王雪吟罗小菊海南省食品药品检验所海口分所海口570311 海南省食品检验检测中心国家市场监管重点实验室(热带果蔬质量与安全)海口570314

目的运用K-B法和VITEK2法检测大肠埃希氏菌对氨苄西林等18种抗生素的药敏情况,对比研究二者结果的一致性。方法收集食源性大肠埃希氏菌108株(32株产β-内酰胺酶的大肠埃希氏菌Escherichia coli producingβ-lactamase,ESBLs+***;76株不... 详细信息

目的运用K-B法和VITEK2法检测大肠埃希氏菌对氨苄西林等18种抗生素的药敏情况,对比研究二者结果的一致性。方法收集食源性大肠埃希氏菌108株(32株产β-内酰胺酶的大肠埃希氏菌Escherichia coli producingβ-lactamase,ESBLs+***;76株不产β-内酰胺酶的大肠埃希氏菌Escherichia coli non-producingβ-lactamase,***),通过K-B法和VITEK2法检测大肠埃希氏菌对18种抗生素的敏感性。结果除了复方新诺明,两种方法检测其他17种抗生素的敏感率、中介率和耐药率均无统计学上的差异;18种抗生素的一致率(catagorical agreement,CA)在85.18%~100.00%之间,非常重大误差(very major error,VME)在0%~26.41%之间,重大误差(major error,ME)在0%~1.78%之间,次要误差(minor error,MIE)在0%~12.04%之间。其中氨苄西林/舒巴坦的CA(87.96%)、复方新诺明的CA(85.18%)、氨曲南的VME(7.14%)、复方新诺明的VME(26.41%)和氨苄西林/舒巴坦的MIE(12.04%)不符合标准要求。结论K-B法与VITEK2法在耐药表型测定方面不具有完全等同性,K-B法对异质性耐药菌识别能力优于VITEK2法,但是在检测复方新诺明耐药表型时,可采用其他方法进行验证,综合判断后确定结果。

关键词：大肠埃希氏菌耐药表型 K-B法 VITEK2法

基于高通量测序技术分析不同原料海南酸瓜细菌多样性及食品安全风险

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食品安全质量检测学报 2023年第18期14卷 154-160页

作者：朱梦杨穗珊陈婉娃谢作蓉海南省食品检验检测中心国家市场监管重点实验室(热带果蔬质量与安全)海口570314 海南省食品药品检验所五指山分所五指山572200

目的探究海南传统酸瓜的细菌群落结构,为发酵酸瓜的品质提升和食品安全防控提供理论基础。方法收集3种海南地区常见原料(小西瓜、哈密瓜、葫芦瓜)腌制的传统酸瓜,利用Illumina Miseq高通量测序技术解析其细菌多样性,并比较其差异,并对... 详细信息

目的探究海南传统酸瓜的细菌群落结构,为发酵酸瓜的品质提升和食品安全防控提供理论基础。方法收集3种海南地区常见原料(小西瓜、哈密瓜、葫芦瓜)腌制的传统酸瓜,利用Illumina Miseq高通量测序技术解析其细菌多样性,并比较其差异,并对潜在的可利用微生物资源和引发食品安全风险的条件致病菌进行分析。结果不同原料发酵的酸瓜具有不同的细菌群落,3种海南酸瓜中优势细菌主要有乳杆菌属(Lactobacillus)、魏斯氏菌属(Weissella)、片球菌属(Pediococcus),其中乳杆菌属相对丰度占90%以上;同时,由哈密瓜制作的酸瓜中检测到了条件致病菌大肠-志贺菌属(Escherichia-Shigella)和克罗诺属(Cronobacter),存在一定的食用安全风险。结论海南酸瓜中蕴藏着丰富的乳酸菌菌群资源,为传统发酵食品产业资源发掘利用提供一定的理论基础和科学支撑,对影响食用安全的肠杆菌科等的防控也是发酵食品加工制作、储存销售过程中需要加强监管的一个重要方面。

关键词：海南酸瓜细菌群落高通量测序技术风险分析

餐饮食品及餐饮具食源性致病菌监测结果与分析

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食品安全导刊 2017年第9X期 114-115页

作者：谢作蓉朱梦林宝英海南省食品检验检测中心

对餐饮食品及餐饮具食源性致病菌监测的目的是监测酒店餐饮食品和餐饮具的食源性致病菌污染状况,预测可能存在的食品安全风险,保障酒店食客的饮食安全。选取酒店作为监测对象,对酒店餐饮食品和餐饮具采样检测,检测指标包括6种常见食源... 详细信息

对餐饮食品及餐饮具食源性致病菌监测的目的是监测酒店餐饮食品和餐饮具的食源性致病菌污染状况,预测可能存在的食品安全风险,保障酒店食客的饮食安全。选取酒店作为监测对象,对酒店餐饮食品和餐饮具采样检测,检测指标包括6种常见食源性致病菌。结果显示:酒店餐饮食品和餐饮具存在一定程度致病菌污染风险。结论:食源性致病菌污染存在一定风险,建议政府部门加强风险管理和风险评估研究工作,预防和控制酒店餐饮食品安全风险。

关键词：餐饮食品餐饮具致病菌

海南省桶装饮用水中铜绿假单胞菌耐药性、T3SS毒力基因分布与同源性分析

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中国热带医学 2023年第12期23卷 1307-1312页

作者：杨穗珊朱梦常秀亭罗小菊寇力丹王彬谢作蓉海南省食品检验检测中心国家市场监管重点实验室(热带果蔬质量与安全)海南海口570311

目的对海南省桶装饮用水中铜绿假单胞菌的耐药性及Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,T3SS)毒力基因携带情况进行调查,在菌株核糖体分型基础上探讨其与样品来源及毒力基因之间的关系,为桶装饮用水的安全监管、污染溯源调查及耐药菌... 详细信息

目的对海南省桶装饮用水中铜绿假单胞菌的耐药性及Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,T3SS)毒力基因携带情况进行调查,在菌株核糖体分型基础上探讨其与样品来源及毒力基因之间的关系,为桶装饮用水的安全监管、污染溯源调查及耐药菌临床治疗提供数据基础。方法使用VITEK 2 Compact全自动微生物药敏系统对分离得到的55株铜绿假单胞菌进行耐药性分析,通过PCR法扩增T3SS毒力基因ExoU、ExoS、ExoT、ExoY,并应用RiboPrinter全自动微生物基因指纹鉴定系统对分离菌株进行鉴定分型及聚类同源性分析。结果药敏结果显示,桶装饮用水中分离的铜绿假单胞菌菌株处于较低耐药水平,但仍然发现1株多重耐药铜绿假单胞菌,对亚胺培南、环丙沙星、头孢吡肟均耐药。T3SS毒力基因分布表现为4种基因型组合,分别为ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(+)/ExoU^(-)(45.45%,25/55)、ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(-)/ExoU^(+)(34.55%,19/55)、ExoT^(+)/ExoY^(-)/ExoS^(-)/ExoU^(+)(18.18%,10/55)、ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(+)/ExoU^(+)(1.82%,1/55)。菌株核糖体分型共分为6个亚型,各亚型包含菌株数分别为24、1、25、1、3、1,占比分别为43.64%、1.82%、45.45%、1.82%、5.45%和1.82%,以亚型Ⅰ和亚型Ⅲ的菌株占主要优势,亚型Ⅰ菌株主要的T3SS基因型为ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(-)/ExoU^(+),占比66.67%(16/24),亚型Ⅲ菌株主要的T3SS基因型则为ExoT^(+)/ExoY^(+)/ExoS^(+)/ExoU^(-),占比88%(22/25)。结论T3SS分泌系统呈现多个毒力基因协同表达的特点,各菌株亚型与毒力基因型存在一定的关联性,通过对两者之间的关系探讨对桶装饮用水铜绿假单胞菌污染溯源、生产控制、临床治疗具有一定的指导意义,初步积累了本地桶装饮用水中铜绿假单胞菌株库及药敏数据。

关键词：铜绿假单胞菌桶装饮用水耐药性毒力基因同源性

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球形芽胞杆菌C3-41芽胞外壁蛋白的鉴定

球形芽胞杆菌C3-41芽胞外壁蛋白的鉴定

2012年鄂粤微生物学学术年会——湖北省暨武汉微生物学会成立六十年庆祝大会

作者：赵妮谢作蓉胡晓敏袁志明中国科学院武汉病毒研究所

球形芽胞杆菌(Bacillus sphaericus)是一种广泛存在于自然界的好氧芽胞杆菌,由于其对蚊幼虫具有特异性毒杀作用,在世界范围内被成功地应用于疾病媒介蚊虫的生物防治。高毒力菌株在芽胞生长期形成由杀虫毒素蛋白构成的伴胞晶体,和芽胞一... 详细信息

球形芽胞杆菌(Bacillus sphaericus)是一种广泛存在于自然界的好氧芽胞杆菌,由于其对蚊幼虫具有特异性毒杀作用,在世界范围内被成功地应用于疾病媒介蚊虫的生物防治。高毒力菌株在芽胞生长期形成由杀虫毒素蛋白构成的伴胞晶体,和芽胞一起被包裹在芽胞外壁内,使其在野外应用中具有较好的抗逆性。但有关球形芽胞杆菌芽胞外壁的组成、结构和功能还缺少了解。本研究分离并纯化C3-41芽胞外壁组分,将SDS-PAGE分离后的清晰条带切胶并进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析,得到蛋白Bsph820。从C3-41中克隆Bsph820基因,并完成重组蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化并制备抗体。

关键词：芽胞杆菌C3-41 芽胞外壁蛋白 Bsph1820 Bsph0411

来源： cnki会议评论

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肉制品中沙门氏菌污染状况及血清分型分析

现代食品 2018年第11期3卷 96-99页

作者：谢作蓉林宝英高云慨海南省食品检验检测中心海南海口570311

沙门氏菌是重要的食源性致病菌之一,不同的沙门氏菌血清型对于人和动物的致病性不尽相同,了解肉制品中沙门氏菌污染情况并进行血清型研究对食品安全有着重要的意义。按照食品安全国家标准方法 GB4789.4-2010对采集的肉制品共75份进行沙... 详细信息

沙门氏菌是重要的食源性致病菌之一,不同的沙门氏菌血清型对于人和动物的致病性不尽相同,了解肉制品中沙门氏菌污染情况并进行血清型研究对食品安全有着重要的意义。按照食品安全国家标准方法 GB4789.4-2010对采集的肉制品共75份进行沙门氏菌的污染情况进行检测,并采用传统的血清凝集法和全自动微生物基因指纹鉴定系统(Ribo Printer~?)对分离到的沙门氏菌进行血清分型鉴定。对分离纯化的沙门氏菌进行了血清分型,两种方法分析结果一致:检出的沙门氏菌有鼠伤寒沙门氏菌、斯坦利沙门氏菌、姆班达卡沙门氏菌和沃兴顿沙门氏菌,均是能引起食物中毒的沙门氏菌血清型。肉制品中存在沙门氏菌的污染,提醒相关部门做好监控,以预防食源性疾病的发生。

关键词：沙门氏菌血清分型肉制品

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食品中副溶血性弧菌检测能力验证分析

现代食品 2018年第11期3卷 91-93页

作者：杨穗珊谢作蓉林宝英海南省食品检验检测中心海南海口570311

目的:通过参加FAPAS(food analysis performance assessment scheme)食品中副溶血性弧菌检测能力验证计划来确认及提高本验室对副溶血性弧菌的检验检测能力。方法:采用国家标准法GB 4789.7-2013和环介导等温扩增技术对收到的两份鱼肉盲... 详细信息

目的:通过参加FAPAS(food analysis performance assessment scheme)食品中副溶血性弧菌检测能力验证计划来确认及提高本验室对副溶血性弧菌的检验检测能力。方法:采用国家标准法GB 4789.7-2013和环介导等温扩增技术对收到的两份鱼肉盲样进行检测。结果:编号为M230d21A盲样未检出副溶血性弧菌,编号为M230d21B盲样检出副溶血性弧菌。结论:通过参加此次FAPAS能力验证来评价和监控实验员检验能力的持续状况,为自身的持续改进和质量管理提供信息,进一步促进实验室管理体系完善。

关键词：食品副溶血性弧菌能力验证

海南酸瓜源植物乳杆菌与壳聚糖复合处理对芒果保鲜效应研究

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食品安全质量检测学报 2023年第18期14卷 146-153页

作者：杨穗珊朱梦常秀亭罗小菊寇力丹谢作蓉海南省食品检验检测中心国家市场监管重点实验室(热带果蔬质量与安全)海口570311

目的从海南酸瓜中筛选具有抑菌活性的植物乳杆菌,并探究其发酵液与壳聚糖复配处理对芒果贮藏品质的影响。方法采用MRS培养基结合生理生化特征从酸瓜中分离植物乳杆菌,通过牛津杯法筛选对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特... 详细信息

目的从海南酸瓜中筛选具有抑菌活性的植物乳杆菌,并探究其发酵液与壳聚糖复配处理对芒果贮藏品质的影响。方法采用MRS培养基结合生理生化特征从酸瓜中分离植物乳杆菌,通过牛津杯法筛选对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌具有抑菌效果的菌株,采用16s rRNA基因序列测定方法对菌株进行确认。以芒果为保鲜对象,分别用菌株发酵液、壳聚糖、菌株发酵液-壳聚糖复配液进行处理,25℃贮藏12 d,每2 d取样,测定好果率、失重率、可溶性固形物、可滴定酸、维生素C(vitamin C,VC)、菌落总数、霉菌和酵母的变化,评价不同处理方式对芒果的保鲜作用。结果从海南传统发酵食品酸瓜中分离得到一株具有抑菌效果的植物乳杆菌R2。菌株发酵液、壳聚糖、菌株发酵液-壳聚糖复配液3种处理方式对芒果均具有保鲜效果,均能有效提高芒果好果率,降低失重率,减缓VC的损失,抑制表面微生物的生长而减缓芒果腐烂,其中菌株发酵液-壳聚糖复配液的保鲜效果最佳。与CK组对比,在贮藏第12 d时,菌株发酵液-壳聚糖复配液处理组的好果率高40%,失重率和可溶性固形物分别降低了4.4%和3.1%,可滴定酸下降趋势减缓,VC的含量为CK组的1.5倍,芒果表面菌落总数、霉菌和酵母菌落数均小于CK组。结论海南酸瓜源植物乳杆菌发酵液结合壳聚糖复配处理能有效保持芒果的贮藏品质,对芒果采摘后保鲜、果实品质保持和食品安全风险控制具有较好的应用价值。

关键词：植物乳杆菌海南酸瓜壳聚糖芒果保鲜