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一测多评法测定泽泻中4种三萜类成分的含量

中国药学杂志 2015年第15期50卷 1347-1352页

作者：赵万里张方方黄小强罗奋熔谌赛男李小艳许文吴水生福建中医药大学药学院福州350122 福建中医药大学大学生物医药研发中心福州350122

目的建立一测多评(QAMS)的泽泻多指标质量控制方法 ,并验证该方法在泽泻含量测定中应用的可行性和技术适应性。方法采用HPLC,以23-乙酰泽泻醇B为内参物,计算泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇B的相对校正因子,并利用该校正因子计算含量,... 详细信息

目的建立一测多评(QAMS)的泽泻多指标质量控制方法 ,并验证该方法在泽泻含量测定中应用的可行性和技术适应性。方法采用HPLC,以23-乙酰泽泻醇B为内参物,计算泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇B的相对校正因子,并利用该校正因子计算含量,同时与采用外标法测定4个三萜类成分的含量进行比较。结果建立的校正因子重现性良好,31批泽泻药材中4个三萜类的含量计算值与外标法实测值间(RSD≤3.52%)无显著差异。结论本实验所建立的一测多评法稳定、准确,可用于泽泻三萜类成分的质量控制。

关键词：泽泻三萜一测多评质量控制

常绿钩吻碱抑制人神经胶质瘤U251细胞增殖的体内外作用特征

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药学学报 2021年第3期56卷 786-792页

作者：李高攀王文义任丽谌赛男王河山许文吴水生福建中医药大学药学院福建福州350122 福建中医药大学生物医药研发中心福建福州350122

常绿钩吻碱(sempervirine,SPV)是从钩吻中分离得到的一种育亨宾型生物碱,本研究探讨了常绿钩吻碱抑制人神经胶质瘤细胞体内外增殖的作用特征。以0~16μmol·L^(-1)不同浓度常绿钩吻碱处理人神经胶质瘤U251细胞24、48和72 h,分别用MTT法... 详细信息

常绿钩吻碱(sempervirine,SPV)是从钩吻中分离得到的一种育亨宾型生物碱,本研究探讨了常绿钩吻碱抑制人神经胶质瘤细胞体内外增殖的作用特征。以0~16μmol·L^(-1)不同浓度常绿钩吻碱处理人神经胶质瘤U251细胞24、48和72 h,分别用MTT法和集落形成实验检测细胞增殖,Hoechst细胞核染色和Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡,Western blot法检测PI3K、AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2、caspase-3和cleaved caspase-3蛋白。采用体内裸鼠移植神经胶质瘤模型,观察常绿钩吻碱抗神经胶质瘤的体内作用,所有动物实验操作均严格遵守福建医科大学生物医学伦理委员会相关规定。结果显示,常绿钩吻碱在1~8μmol·L^(-1)能显著抑制U251细胞的增殖和集落形成,引起细胞核固缩,促进细胞凋亡,蛋白检测表明,其促进caspase-3的切割活化,下调Bcl-2/Bax值和PI3K蛋白的表达,抑制AKT的磷酸化;裸鼠移植瘤实验结果表明,剂量4和8 mg·kg^(-1)·day^(-1)常绿钩吻碱干预能抑制体内神经胶质瘤的生长,肿瘤重量分别减少了44.76%和61.26%。本研究在体内外水平表明,常绿钩吻碱能明显抑制神经胶质瘤的增殖,为其抗神经胶质瘤的研究开发奠定基础。

关键词：常绿钩吻碱神经胶质瘤增殖凋亡裸鼠 U251细胞

HPLC法同时测定钩吻茎中胡蔓藤碱丙等6个生物碱的含量

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药物分析杂志 2017年第4期37卷 595-601页

作者：谌赛男王河山曾靖舒周也莅雷仙武林贵男吴水生福建中医药大学药学院福州350122

目的:建立HPLC法同时测定钩吻茎中胡蔓藤碱丙、钩吻素甲、钩吻素子、钩吻素己、钩吻绿碱和胡蔓藤碱乙的含量,并比较评价各产地钩吻生物碱含量的差异。方法:采用外标法进行测定,色谱柱为ZORBAX Bonus-RP Analytical(4.6 mm×250 mm,5μm)... 详细信息

目的:建立HPLC法同时测定钩吻茎中胡蔓藤碱丙、钩吻素甲、钩吻素子、钩吻素己、钩吻绿碱和胡蔓藤碱乙的含量,并比较评价各产地钩吻生物碱含量的差异。方法:采用外标法进行测定,色谱柱为ZORBAX Bonus-RP Analytical(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1),检测波长254 nm,柱温30℃。分别测定32批钩吻茎,并进行聚类分析。结果:胡蔓藤碱丙、钩吻素甲、钩吻素子、钩吻素己、钩吻绿碱、胡蔓藤碱乙6个成分的线性范围分别为1.00~50.06μg·mL^(-1)(r=1.000 0)、1.13~50.85μg·mL^(-1)(r=0.999 8)、1.16~52.20μg·mL^(-1)(r=1.000 0)、1.16~52.20μg·mL^(-1)(r=0.999 7)、1.06~50.88μg·mL^(-1)(r=0.999 7)和1.01~50.50μg·mL^(-1)(r=1.000 0),平均加样回收率为93.1%~103.8%(RSD为2.0%~2.9%)。不同产地样品中钩吻茎中胡蔓藤碱丙、钩吻素甲、钩吻素子、钩吻素己、钩吻绿碱和胡蔓藤碱乙含量范围分别为0.136~2.202、0.564~2.686、0.718~3.553、0.160~2.025、0.151~3.493、0.288~4.700 mg·g^(-1)。结果显示不同产地的钩吻6个成分含量均有差异,32批不同产地钩吻药材可聚为6大类。结论:该法可为钩吻多指标成分的质量评价提供参考。不同产地钩吻的各个化学成分的含量呈现明显分类特点,为钩吻地区鉴定提供依据。

关键词：钩吻断肠草胡蔓藤大茶药野葛生物碱成分胡蔓藤碱丙钩吻素甲钩吻素子钩吻素己钩吻绿碱胡蔓藤碱乙中药多组分含量测定聚类分析高效液相色谱

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钩吻炮制减毒存效的物质基础分析

中国实验方剂学杂志 2020年第3期26卷 117-124页

作者：任丽李高攀谌赛男许文王河山黄美霞廖华军吴水生福建中医药大学药学院生物医药研发中心福州350122

目的:在前期研究基础上,检测钩吻炮制前后的6种主要生物碱成分的变化情况,以期揭示钩吻炮制后减毒存效的内在机制。方法:采用HPLC同时测定钩吻素甲、胡蔓藤碱丙、钩吻素子、钩吻素己、钩吻绿碱、胡蔓藤碱乙6个成分的含量,色谱条件为流... 详细信息

目的:在前期研究基础上,检测钩吻炮制前后的6种主要生物碱成分的变化情况,以期揭示钩吻炮制后减毒存效的内在机制。方法:采用HPLC同时测定钩吻素甲、胡蔓藤碱丙、钩吻素子、钩吻素己、钩吻绿碱、胡蔓藤碱乙6个成分的含量,色谱条件为流动相甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0~10 min,22%A;10~20 min,22%~30%A;20~30 min,30%~40%A),流速1 m L·min^-1,检测波长254 nm,柱温30℃,进样量10μL。采用聚类分析和主成分分析法对钩吻炮制前后化学成分变化情况进行分析。结果:炮制前上述6种成分在12批生品中的平均质量分数分别为1.444,1.129,3.590,1.603,2.376,1.631 mg·g^-1;炮制后六者的平均质量分数则依次为2.258,0.343,1.176,0.115,0.459,0.281 mg·g^-1;毒性最强成分钩吻素己质量分数下降最为显著,下降率达92.83%,而毒性较小的钩吻素甲炮制后质量分数升高了56.37%,其他4个成分质量分数均有不同程度的降低。聚类分析结果表明钩吻炮制前后可明显分为2个类别,主成分分析表明钩吻炮制后第1主成分由钩吻素子变为钩吻素甲。结论:钩吻炮制后毒性成分钩吻素己被显著降解,胡蔓藤碱丙、钩吻素子、钩吻绿碱、胡蔓藤碱乙成分含量下降以及钩吻素甲的含量升高可能是钩吻炮制后减毒存效的内在机制之一。

关键词：钩吻炮制生物碱钩吻素己钩吻素甲聚类分析主成分分析

4株石杉碱甲生产菌原生质体制备与再生条件的研究

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江苏农业科学 2015年第11期43卷 85-89页

作者：张方方刘海元张晓琼郑雅媗谌赛男黄小强吴水生福建中医药大学福建福州350122 上海医药工业研究院上海200437

为高效获得内生真菌U29、U32、U50、U51石杉碱甲生产菌株的原生质体和为原生质体融合及基因组改组选育高产石杉碱甲菌株提供参考,研究了溶解酶的浓度、加酶量、酶解温度、稳定剂等因子对4株菌原生质体制备的影响。通过研究获得了菌株原... 详细信息

为高效获得内生真菌U29、U32、U50、U51石杉碱甲生产菌株的原生质体和为原生质体融合及基因组改组选育高产石杉碱甲菌株提供参考,研究了溶解酶的浓度、加酶量、酶解温度、稳定剂等因子对4株菌原生质体制备的影响。通过研究获得了菌株原生质体制备的优化条件：溶壁酶浓度为3.0%、加酶量为2.0 mL/100 mg、菌龄为5 d、酶解时间为2.5 h、酶解温度为30℃、0.6 mol/mL氯化钠为稳定剂、CYM培养基为再生培养基。在此优化条件下,4株菌的原生质体的产量均大于7.0×10^-7个/mL,再生率可达20%以上。

关键词：内生真菌溶解酶原生质体制备原生质体再生

UFLC法测定蛇足石杉不同部位的石杉碱甲含量

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福建中医药 2015年第3期46卷 40-41页

作者：张方方郑雅媗黄小强谌赛男吴水生福建中医药大学药学院福建福州350122

石杉碱甲是20世纪80年代我国学者从蛇足石杉中分离得到的一种新型石松类生物碱,被广泛用于治疗阿尔茨海默症、重症肌无力,同时又能促智、提高青春期学生的学习记忆功能[1]。目前测定蛇足石杉不同部位提取物中生物碱含量的方法主要为反... 详细信息

石杉碱甲是20世纪80年代我国学者从蛇足石杉中分离得到的一种新型石松类生物碱,被广泛用于治疗阿尔茨海默症、重症肌无力,同时又能促智、提高青春期学生的学习记忆功能[1]。目前测定蛇足石杉不同部位提取物中生物碱含量的方法主要为反相高效液相色谱法（RP-HPLC）[2],

关键词：蛇足石杉石杉碱甲 UFLC法

UPLC-MS/MS法测定不同生长年限钩吻茎中6种生物碱的含量

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福建中医药 2023年第1期54卷 16-19页

作者：王河山谌赛男许文王英豪吴水生福建中医药大学药学院福建福州350122 道地药材国家重点实验室北京100700

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定不同生长年限钩吻茎中6种生物碱(钩吻碱甲、胡蔓藤碱丙、钩吻素子、钩吻素己、钩吻绿碱、胡蔓藤碱乙)的含量。方法采用UPLC-MS/MS法,通过正离子多反应监测(MRM)模式进行含量测定... 详细信息

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定不同生长年限钩吻茎中6种生物碱(钩吻碱甲、胡蔓藤碱丙、钩吻素子、钩吻素己、钩吻绿碱、胡蔓藤碱乙)的含量。方法采用UPLC-MS/MS法,通过正离子多反应监测(MRM)模式进行含量测定。色谱条件:ACQUITY UPLC BEHC18色谱柱,乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.25 mL/min,柱温45℃,进样量2μL。结果在上述的色谱条件下,6种生物碱在各自的线性范围内呈现良好的线性关系(r≥0.9990),精密度、稳定性、重复性考察的RSD均<5%,符合分析要求;平均回收率98.66%~104.69%,RSD<6%。1~4年生钩吻茎中除胡蔓藤碱丙外,钩吻碱甲、钩吻素子、钩吻素己、钩吻绿碱、胡蔓藤碱乙等含量均随着生长年限的增长而增加,6种生物碱总量也呈现上升趋势。结论本研究建立了UPLC-MS/MS法同时测定钩吻茎中6种生物碱含量,方法简易、准确、高效,为钩吻综合质量评价提供了数据参考。

关键词：超高效液相色谱-串联质谱钩吻茎不同生长年限生物碱

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钩吻的指纹图谱

福建中医药 2016年第5期47卷 28-30页

作者：谌赛男王河山曾靖舒周也莅雷仙武吴水生福建中医药大学药学院福建福州350122

钩吻Gelsemium elegans Benth.是马钱科胡蔓藤属植物,其主要化学成分为吲哚类生物碱,目前多采用钩吻素子和钩吻素甲作为药材的质量控制指标,不能完全反映药材中其它成分的情况。指纹图谱是评价药材质量的有效方法,我们对16批不同产地的... 详细信息

钩吻Gelsemium elegans Benth.是马钱科胡蔓藤属植物,其主要化学成分为吲哚类生物碱,目前多采用钩吻素子和钩吻素甲作为药材的质量控制指标,不能完全反映药材中其它成分的情况。指纹图谱是评价药材质量的有效方法,我们对16批不同产地的钩吻药材进行考察,以建立钩吻的HPLC指纹图谱,为钩吻的质量控制提供实验依据。

关键词：钩吻指纹图谱高效液相色谱法

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原生质体诱变选育石杉碱甲高产菌株

海峡药学 2015年第11期27卷 238-242页

作者：张晓琼郑雅媗张方方谌赛男黄小强吴水生福建中医药大学药学院福州350108

目的利用原生质体诱变方法从原始菌株炭团菌NX9选育石杉碱甲高生产菌株。方法对菌株NX9进行原生质体紫外诱变,筛选到的正突变菌株进行原生质体NTG进行诱变;结果通过对菌株NX9进行原生质体紫外诱变筛选到正突变株U50,石杉碱甲产量达到19... 详细信息

目的利用原生质体诱变方法从原始菌株炭团菌NX9选育石杉碱甲高生产菌株。方法对菌株NX9进行原生质体紫外诱变,筛选到的正突变菌株进行原生质体NTG进行诱变;结果通过对菌株NX9进行原生质体紫外诱变筛选到正突变株U50,石杉碱甲产量达到19.89μg·L^(-1),比出发菌株高16.7倍。对U50进行原生质体NTG诱变,选育到正突变菌株N65,产量达32.56μg·L^(-1),比出发菌株U50高出0.64倍,比NX9的产量提高了28.07倍,经5次传代后,遗传稳定性良好,可供进一步研究和育种。

关键词：石杉碱甲内生真菌原生质体紫外诱变原生质体NTG诱变